芥子气损伤机制研究进展

芥子气在第一次世界大战作为化学战剂使用,造成大量的人员死伤,是外国军队装备主要的毒剂之一。芥子气中毒机理虽早有研究,但迄今尚未完全阐明^〔1〕。目前对芥子气损伤机制主要集中在DNA烃化和DNA链断裂、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)激活、谷胱甘肽耗竭、炎症反应、蛋白水解酶激活、细胞凋亡、钙紊乱、蛋白水解酶激活和免疫反应等几方面。为全面认识芥子气的损伤效应及制订相应的防治策略提供科学依据,本文对近年在芥子气损伤机制方面的研究进展综述如下。     

放射损伤,烧伤和放烧复合伤心肌线粒体脂质过氧化的加强效应

Ｗｉｓｔａｒ大鼠经６Ｇｙ＾６０Ｃｏ γ线和／或３０％总体表面积（ＴＢＳＡ）Ⅲ度烧伤致放射损伤（ＲＩ）、烧伤（ＢＩ）和放烧复合伤（ＲＢＩ）。观测伤后１、３、８、１６和２４ｈ大鼠心肌线粒体脂质过氧化和抗氧化酶活力的改变，发现三种伤类均表现为脂质过氧化代谢产物丙二醛（ＭＤＡ）含量伤后１ｈ即明显升高，２４ｈ降至对照组（Ｃ）水平；超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力在整个实验过程中维持在明显低于Ｃ组的水平；ＢＩ组和     

Cardiotoxin肌损伤模型的形态学观察

目的 建立由Cardiotoxin所致的肌损伤模型并了解损伤部位自然修复的情况，为研究肌损伤的再生及修复作用奠定基础。方法 将Cardiotoxin按8μg／g体质量局部注入SCID小鼠股四头肌中，分别观察不同时相点(24h、7d、2周、4周和6周)损伤部位的病理改变。结果 注射24h后可见肌细胞变性坏死，胞浆内有空泡形成；7d后肌纤维发生明显断裂，变性坏死加重，并出现钙化；2周后变性坏死钙化加重达到顶峰；4周后变性坏死钙化依然存在，但已可见部分肌纤维再生；6周后变性坏死已不明显，钙化仍存在，肌细胞大部分再生。结论 成功地建立了Cardiotoxin所致的肌损伤模型，该模型稳定、简便、易控制，且重复性好。     

葡萄糖水平对CEES染毒16 HBE细胞能量代谢的影响及其机制

目的：比较在高糖和低糖培养条件下,经半硫芥（CEES）染毒后支气管上皮细胞（16HBE）能量代谢的变化。方法采用高糖（4．5 mg/ml）和低糖（1．1 mg/ml）两种不同培养基培养16HBE细胞。 MTS法比较细胞增殖和CEES染毒后6 h细胞活性差异;用不同剂量CEES染毒两组细胞,24 h后HPLC检测胞内ATP、ADP、AMP含量,并计算ATP/ADP比值、腺苷酸池（总腺嘌呤核苷酸, total adenine nucleotides , TAN）及能荷值（能量负荷值,energy charge, EC）,Western印迹检测线粒体能量代谢功能酶COX-10和ISCU变化;流式细胞仪检测0．5 mmol/L CEES染毒后5、8、12、24 h时相点线粒体膜电位（MMP）变化。结果低糖培养的16HBE细胞的增殖明显增加,能量代谢指标ADP、TAN、COX-10和ISCU显著高于高糖组。高于0．5 mmol/L染毒剂量的CEES能显著降低高糖、低糖培养的16HBE细胞的活性,且在1．0 mmol/L下两组间差异有显著意义。高糖组在0．5、1．0 mmol/L染毒24 h后,ATP、ADP、TAN显著增高,而ATP/ADP比值及EC显著降低。低糖组在1．0 mmol/L染毒24 h后,ADP、AMP、TAN显著低于染毒前,而ATP/ADP比值及EC显著高于染毒前。在0．5 mmol/L CEES染毒下,高糖组线粒体膜电位在8～12 h显著增加,其后至24 h时恢复至正常水平。低糖组MMP在5 h有一过性显著降低,8 h后与染毒前已无显著差异。高糖培养时,16HBE细胞的氧化磷酸化相关蛋白COX-10和ISCU蛋白水平显著低于低糖培养的细胞;0．5～1．0 mmol/L CEES染毒24 h后,两者的水平显著升高,与低糖组已无显著差异。1．0 mmol/L CEES染毒24 h后,低糖组COX-10和ISCU水平显著降低。结论糖浓度差异会影响16 HBE细胞的能量代谢、增殖和CEES损伤后能量应激反应。高糖可能通过增加细胞的应激反应能力抵抗CEES的细胞毒性作用。     

解读医学专业课教学中的以人为本

现代医学模式的转变,为医学生的培养融入更多人的因素。以人为本是教育的核心理念,体现在医学专业课教学中,包含3个方面:出发点和落脚点以学生为根本,授课内容以专业服务对象为基本,教学过程以人的主观能动性为资本。     

以创新和应用能力为目标的防原医学教学改革探索

根据军事医学教学以培养适应现代化建设和国防卫生事业需要的高素质人才为目的,在防原医学教学中,以学员为认知主体,充分突出“四个结合、四个为主”的军事医学特色,综合应用多种教学方法,有效提高了教学质量,为培养高素质的现代化医学人才打下良好基础。     

基因捕获成体干细胞及鉴定的初步研究

目的 探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性. 方法 线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质干细胞(hBMSC).为排除潮霉素B筛选的假阳性干细胞,以C2C12、hBMSC细胞基因组DNA为模板,PCR 扩增ROSAFARY上LacZ部分序列(560 bp)进行鉴定. 结果 ROSAFARY脂质体转染PA317细胞后LacZ染色, 400倍镜下可见2-5个蓝色细胞/视野.病毒上清感染种植于24孔板的C2C12和hBMSC, 4 d后经LacZ染色,C2C12可见6个蓝色细胞/孔,400倍镜下hBMSC可见4-5个蓝色细胞/视野.最佳PCR鉴定参数为基因组模板量2 μg, 退火温度55.5 ℃,Mg2 浓度3 mmol/L. 结论 逆转录病毒基因捕获载体感染多种成体干细胞后 LacZ染色显示可成功捕获激活状态启动子驱动的基因,为基因捕获应用于成体干细胞分化及恶性转化分子机制的研究奠定了基础.     

多用途基因捕获C3H/10T1/2细胞阳性克隆库的构建及鉴定

目的: 以10T1/2细胞为间充质干细胞模型,构建用于间充质干细胞分化及恶性转化分子机制等研究的基因捕获阳性克隆库.方法: Dra I线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY后,与pIRES2-EGFP用脂质体共转染phoenix细胞,LacZ染色证明转染成功后收集病毒上清感染10T1/2细胞.经潮霉素筛选获得阳性克隆,为排除假阳性克隆用LacZ部分片段PCR进行鉴定.结果: ROSAFARY脂质体转染phoenix细胞后48 h,GFP指示的转染效率约为20%～30%,LacZ染色有大约10%的阳性率.150 mg/L潮霉素筛选病毒感染的10T1/2细胞,挑取药物抗性克隆,PCR鉴定后获得43个阳性克隆,LacZ染色5个为捕获基因高表达细胞克隆.结论: 基因捕获技术建立非胚胎干细胞的克隆是可行的,成功建立的基因捕获阳性克隆库为应用基因捕获技术揭示成体干细胞分化及恶性转化分子机制奠定了基础.     

小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2的多向分化潜能研究

目的 建立小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2细胞成肌、成脂、成内皮、成神经元分化的细胞实验模型.方法 用化学诱导剂5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2细胞成肌、成脂,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合诱导C3H/10T1/2细胞成内皮,bFGF、β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)、DMSO诱导C3H/10T1/2细胞成神经元细胞分化.诱导期间应用细胞形态学观察、油红"O"染色、免疫细胞化学染色检测内皮细胞表面标志CD31和神经元特异性烯醇化酶(oeuron-specific enolase,NSE)对分化细胞进行鉴定.结果 5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2 10 d后细胞变长,17 d后可见明显肌管形成,15 d少量细胞出现脂滴,25 d油红"O"染色见细胞质大量红色脂滴;VEGF和bFGF诱导5 d后细胞呈现"鹅卵石"样形态,8 d后阳性表达CD31;bFGF、β-巯基乙醇和DMSO联合诱导3 d后细胞胞体收缩,突起变长,15 d NSE染色阳性.结论 C3H/10T1/2细胞具有多向分化的潜能,可用作研究间充质干细胞生物学特性的模型.     

间充质干细胞经MyoD转染诱导为成肌细胞后对肌损伤的修复作用

目的 观察间充质干细胞(MSCs)被MyoD转染诱导为成肌细胞后对肌损伤的修复作用并探讨其机制.方法 160只SCID小鼠随机分为正常组、致伤对照组、MSCs组和成肌细胞组,每组40只.将真核表达双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-MyoD转染MSCs,使MSCs分化诱导为成肌细胞,将MSCs和成肌细胞分别植入Cardiotoxin造成的小鼠损伤肌组织中,1、2、4、6周后观察肌损伤修复效果.结果 成功制作了肌损伤模型,MSCs和成肌细胞对肌损伤均有促进修复作用,以成肌细胞效果显著,成肌细胞组肌肉组织抗牵引力强于MSCs组.Western blotting结果表明,修复过程中成肌细胞组MyoD表达显著高于MSCs组、损伤对照组和正常组,成肌细胞组1周时JNKl、ERK2表达显著增加,p38表达显著减少,但6周时与正常组比较均无显著差异.结论 MSCs被MyoD转染诱导后形成的成肌细胞能有效修复肌损伤,JNKl、p38及ERK2在修复中起重要作用.