慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响

目的研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimula-tion with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响。方法以体外2%马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型。实验分3组:对照组、CsA组和KN93组。对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3 d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10+40 Hz,1.5 h/d,共2 d)处理。通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性。结果在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHCⅠ的mRNA及蛋白的表达。与分化对照组MHCⅠmRNA相对表达量(0.79±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC I型纤维的表达(与对照组比P<0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC I蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02)。对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93(0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P<0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P>0.05)。CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P<0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.05)。结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHCⅠ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据。     

骨髓移植后受体小鼠肠上皮内供体细胞的免疫电镜观察

目的 探讨骨髓移植后供体骨髓来源干细胞(bone marrow derived stem cells,BMDSCs)是否能够在受体肠上皮分化为具有正常超微结构和功能的肠上皮细胞.方法 使用Percoll液分离GFP转基因小鼠骨髓有核细胞,经尾静脉移植后3个月取材.标本经戊二醛固定,饿酸后固定,常规电镜超薄切片.采用包埋后染色免疫电镜技术以GFP抗体识别供体细胞,5nm胶体金标记二抗识别一抗后,进行电镜染色和观察.结果 透射电镜下可见电子密度高的单个或成簇分布的球形胶体金颗粒散布于肠上皮细胞内,阴性对照组未见胶体金颗粒.阳性细胞主要为杯状细胞和吸收细胞,且阳性细胞同其他上皮细胞之间存在有细胞连接. 结论 通过免疫电镜技术证实,移植后的供体骨髓来源细胞可以在受体小肠组织中分化为具有正常功能的肠上皮细胞.     

周细胞在创面修复早期血管生成中的分布与意义

目的 研究周细胞在创面修复肉芽组织血管生成过程中出现、分布规律与意义.方法 采用常规免疫组化、双重免疫组化染色,电镜技术及形态定量分析方法观测小鼠皮肤全层切割伤模型(1～9 d),特别是早期1、3、5、7 d创面修复肉芽组织内血管生成过程中,周细胞的出现、分布规律.离体采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导分化的周细胞前体细胞10T1/2模型,观察其在细胞外基质胶立体培养的变化.结果 周细胞可见于肉芽组织血管生成早期(1～7 d),且周细胞阳性染色的细胞数较内皮细胞多.肉芽组织内毛细血管和周细胞的数量在伤后持续增加,直到伤后5 d达峰值.周细胞在肉芽组织中还可形成条索状、腔样结构;离体培养的周细胞在细胞外基质胶内能够形成管腔样结构.结论 周细胞参与了肉芽组织早期血管生成过程并可形成腔样结构,可能在血管生成中具有主导或引导作用.     

基于地理信息系统的重庆市化学事故医学应急救援指挥系统

目的 本项目旨在开发基于地理信息系统（GIS）的重庆市化学事故救援系统。我室前期已研制重庆市化学毒剂数据库,并在此基础上建立了化学事故医学应急救援指挥系统。已初步具备化学事故医学应急指挥能力。近几年,我国城市GIS的建设和应用取得了较大进步,与此同时重庆市GIS公用平台也已建成并逐步具备二三维一体化的技术体系。构建一套基于GIS的重庆市化学事故医学应急救援指挥系统形成一套标准化的应急救援程序将十分重要。方法 基于GIS的重庆市化学事故医学应急救援指挥系统可利用现有重庆地理信息公共服务平台进行软件的二次开发。实现化学事故救援系统与GIS平台的结合。目前可通过组件技术以图层叠加的形式,将已有的化学事故应急救援指挥系统与GIS平台结合,并在终端服务平台运行。数据库数据可由市政府组织相关单位分批次采集并由软件开发部门统一录入。结果 建立基于三维可视化的GIS化学事故应急救援指挥系统,可为化学事故救援工作提供决策支持。该系统可迅速查看事故地点（单位）地理信息,提供二维、三维地图及遥感影像图。三维可视化遥感图像技术的引入可突破传统二维地图的局限,充分发挥其空间分析功能,使相关部门在第一时间对事故现场及周边地区基本状况有一个较为清晰的印象。迅速查找事故地点,准确获取事故单位化学品、化学危险品存放情况、负责人、联系方式等相关信息。系统可根据发生的事故类型和当时的气象条件结合化学扩散模型,计算出轻度、中度和重度中毒伤亡人数以及对应的应急反应级别。结合致伤区域范围, 以及可能的伤亡人数,进行救援点设置、伤员救护、人员疏散等工作, 使经济损失和人员伤亡降到最小程度。以上信息可生成图文并茂的应急救援参考方案,为现场指挥提供及时可靠的科学数据和图文资料。结论 基于三维可视化的GIS化学事故应急救援指挥系统的建立,可为化学事故应急救援工作提供决策支持。     

人AB型血清培养体系体外培养扩增人脐血源基质细胞的试验研究

目的建立并优化AB型健康成人血清培养体系对人脐血源基质细胞的体外培养条件,观察基质细胞的生物学特性。方法人脐带血标本分离培养人脐血源基质细胞,经密度梯度分离后,在含有15％人AB型血清、bFGF（2．5～20．0μg／L）、10mol／L氢化可的松的DMEM／F12培养液中进行原代培养和传代。倒置显微镜观察细胞生长情况,HE染色观察细胞形态特征,并采用常规HE染色和免疫细胞化学染色对培养细胞进行鉴定。结果成功获得人脐血源基质细胞并进行体外扩增培养和传代,培养细胞能形成纤维细胞样集落。优化的培养条件为：DMEM／F12培养基添加15％人AB型血清、10．0μg／LbFGF、10^-6mol／L氢化可的松。免疫细胞化学染色Vimentin＋、CD34＋、TdT-、CD45-、CK-,符合造血基质细胞特点。结论采用人AB型血清培养体系可成功培养扩增人脐血源基质细胞,为下一步临床应用研究打下坚实的基础。     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤诱导的血管内皮细胞成型的作用

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞成型的影响并初步探讨其机理。方法 采用在Ｉ型胶原凝胶上的细胞立体培养和内皮－胶质瘤细胞的联合培养法,观测人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞或其条件培养基对人脐静脉内皮细胞ＥＣＶ－３０４细胞形成管腔样结构的影响,同时以免疫组织化学结合图像分析的方法检测ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ蛋白的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１     

60Coγ射线照射后培养小鼠骨髓基质细胞内NF-κB的变化

目的 探讨辐射对培养小鼠骨髓基质细胞内ＮＦ－ｋＢ的影响。方法 采用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ及凝胶电泳迁移率实验。结果 免疫组化方法显示正常胃髓基质细胞细胞核的周围表达低水平的ＮＦ－ｋＢ,８．０Ｇｙ＾６０Ｃｏγ射线损伤后１ｈ即见其表达较正常显著升高并出现明显的核移位,４ｈ达高峰,６ｈ有所回落,８ｈ恢复正常;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示照射后骨髓基质细胞ＮＦ－ｋＢ的蛋白表达量较正常明显升高,     

抑制MAPK介导bcl-2抗低剂量电离辐射诱发白血病细胞凋亡

目的:利用髓性白血病细胞HL60细胞,研究低剂量电离辐射(1Gy)对MAPK(丝裂原激活的蛋白激酶)和JNK(c-JUN末端激酶)活性的影响,确定MAPK介导与细胞辐射敏感性以及bcl-2表达与细胞存活的关系。方法:在辐照前和辐照中用MEK1/2(MAPK激酶)的抑制剂PD98059处理转化的HL60/pCEP4(对照质粒)和HL60/bcl-2细胞,1Gyγ射线照射后测定MAPK、JNK、Cdc2激酶活性,流式细胞仪测定细胞周期,以细胞凋亡和细胞集落形成能力作为辐射敏感性指标。结果:1低剂量电离辐射后20min,HL60/pCEP4和HL60/bcl-细胞MAPK活性升高至峰值,而JNK激酶活性无显…     

用泛端粒PNA和全染色体特异DNA探针联合FISH检测人淋巴细胞完全和不完全染色体互换

人们已经观察到辐射诱导的染色体畸变中有明显的不完全易位存在。由于一些易位片段太小,可能不会被荧光原位杂交(FISH)的全染色体染色所检测到,因此,研究了用泛端粒肽核酸(PNA)探针和全染色体DNA特异探针的联合FISH检测辐射诱导的人淋巴细胞完全和不完全染色体互换。方法:培养人淋巴细胞52h后,用氚β射线对细胞进行0.9Gy的低剂量照射,剂量率为0.019Gy/h。在中期用RNA酶处理,然后用乙酸和甲醇(1∶3)固定30min,接着用KCl、蛋白酶K处理,4%的多聚甲醛固定10min。变性后,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的端粒PNA探针杂交1.5h,再用对1、2…     

芥子气暴露的远后效应

芥子气是一种糜烂性化学毒剂,能作用于眼、呼吸系统、皮肤和骨髓等组织器官,导致急性损伤且遗留远后损伤效应.目前尚无针对芥子气中毒的特效解毒药,仅采取对症和支持疗法.