PREPARATION AND CYTOLYTIC TUMOR ACTIVITY OF OSTEOSARCOMA TUMOR INFILTRATING LYMPHOCYTES IN VITRO

In this study, the isolation, purification and differentiation of tumor-lnflltratlng lymphocytes (TIL) from 6 fresh osteosarcoma specimens were achieved by discontinuous density gradient centrifugation. One specimen of the osteosarcoma TIL were enlarged in IL-2 for long time in vitro, reaching 28 days and their cytolytic activity against different tumor cell lines was Investigated. The experimental results indicated that the preparation of osteosarcoma TIL adopted by the mechanical means was simple, having higher purifity, keeping higher effects on killing NK- sensitive tumor cell lines and NK-insensitive tumor cell lines as well as rapid proliferation in vitro cultured in IL-2.     

MTT法检测LAK细胞活性的初步研究

本文应用MTT法测定了LAK细胞介导杀伤肿瘤细胞的细胞毒作用,现报道如下。1 材料与方法1.1 材料与试剂:白细胞介素2(IL-2):中国预防医学科学院病毒研究所候云德教授惠赠;MTT:3-(4,5 dimetyl-2-thiazoly-2,5-diphenyl-2H-tetrazoli-um-bromide,Fluka);PHA:广州医药工业研究所产品;酸化异丙醇:含0.04 mol/L HCl的异丙醇;96孔细胞培养板(Costar)购自美国;酶联免疫检测仪:     

抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)的构建和表达

目的：构建抗CD71人-鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法：将鼠源性抗CD71单抗(7579)重、轻链可变区基因(VB和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ-Expr和pκ-Expr中；将嵌合表达载体(Chi7579-pγ-Expr和Chi7579-pκ-Expr)经电转染技术共转染至真核细胞(SP2／0)中。结果：经ELISA法检验阳性转染瘤细胞培养上清，证明其表达蛋白产物中同时具有人IgG重链恒定区(pγ)和轻链恒定区(Cκ)蛋白；通过间接免疫荧光流式细胞术(FCM)和间接免疫荧光显微技术，证明该表达产物能够特异性识别和结合表达于靶细胞表面的CC71分子。结论：抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)在体外真核细胞表达成功。     

抗CD71人-鼠嵌合抗体诱导K562细胞凋亡及其机制探讨

目的　研究抗CD71人 鼠嵌合抗体诱导K5 6 2细胞凋亡的效应及其机制。方法　台盼蓝拒染法观察抗CD71人 鼠嵌合抗体对K5 6 2细胞生存的影响 ;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K5 6 2细胞的作用 ;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K5 6 2细胞凋亡 ,以AnnexinⅤ检测其凋亡率及进行细胞周期分析 ;并检测胞浆中细胞色素C和活化的caspase 8的相对含量。结果　抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K5 6 2细胞的增殖作用 ,且二者抑制作用差异无显著性(P >0 .0 5 )。经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K5 6 2细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变 ,细胞周期分析可见其将细胞周期阻止在G1 期 ,胞浆中细胞色素C含量增加而活化的caspase 8的含量不增加。结论　抗CD71人 鼠嵌合抗体可通过线粒体死亡途径诱导K5 6 2人红白血病细胞凋亡 ,其诱导凋亡可能与其干扰细胞铁离子转运有关。     

抗CD4人-鼠嵌合抗体的表达和抗增殖效应

目的：制备抗CD4人－鼠嵌合抗体。方法：从分泌抗CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，通过RT－PCR扩增出VH和VL的DNA 片优，对VH和VL进行DNA序列测定和分析，证实VH和VL具有小鼠Ig可变区完整的结构功能后，将VH亚克隆至重链表达载体pγ1-Expr,VL亚克隆至轻链表达载体pκ－Expr转化XL2－Blue细菌，通过菌落或质粒PCR筛选阳性克隆，通过电转染将VH－Pγ1，LV－pκ共转染至小鼠骨髓瘤细胞X63Ag8,653，通过G418筛选，ELISA和免疫荧光鉴定。结果：得到分泌抗CD4人－鼠嵌合体的阳性转染瘤细胞克隆。所得到的嵌合抗体在体外对PHA和IL－2诱导的PBMC增殖具有抑制作用。结论：人－鼠嵌合抗体得到成功表达，并有可能作为免疫抑制剂应用于抗移植排斥和自身免疫疾病的治疗。     

纳米蜂胶对肿瘤细胞K562,L929,MNK28的杀伤效应及机理研究

目的:了解纳米蜂胶对常见肿瘤细胞的体外杀伤效应,并探讨其机理.方法:乳酸脱氢酶法测定纳米蜂胶体外对小鼠成纤维瘤细胞、人胃癌细胞、人红白血病细胞和非肿瘤源性的脐静脉内皮细胞的杀伤作用.流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率.结果:纳米蜂胶在浓度16～400μg·ml-1范围内对3种肿瘤细胞都有一定的杀伤作用,且随着浓度的升高杀伤率增加,其对肿瘤细胞的杀伤作用明显强于普通蜂胶,但低于氟尿嘧啶.纳米蜂胶对K562,L929,MNK28半数致死浓度(IC50)分别为(357.8±8.3)μg·ml-1,(472.3±27.5)μg·ml-1,(461.7±18.7)μg·ml-1.而普通蜂胶对K562,L929和MNK28的IC50分别为(737.6+74.3)μg·ml-1,(753.6±82.1)μg·ml-1,(939.3±75.5)μg·ml-1.而两种蜂胶对人脐静脉内皮细胞的毒性均较低.细胞凋亡率与杀伤率有一定的线形关系,纳米蜂胶作用后处于G0/G1期的肿瘤细胞的比例明显增高.结论:纳米蜂胶体外对小鼠成纤维瘤细胞、人胃癌细胞、人红白血病细胞具有明显的杀伤作用,诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一.     

益气活血方逆转白血病细胞耐药和促凋亡作用的研究

耐药是白血病化疗失败的主要原因之一。在对耐药机制进行深入研究的同时,更重要的是寻找逆转耐药的途径,从而提高化疗效果。本实验初步研究了自组方剂 A(益气活血方)逆转白血病细胞耐药和促凋亡的作用。材料与方法1 试剂 MTT(Sigma 产品)。三尖杉酯碱(H)为北京协和制药厂产品(批号:970403)。柔红霉素(DNR)为意大利 AR-MITALIA CARLO ERMA LTD 产品。抗 P-170单抗为宝灵曼公司产品。抗 BCL-2单抗为美国 CALBIOCHEM Co 产品。LSABTMPAC 为 DAKO JAPAN Co.LID 产品。     

急性白血病患者外周血单个核细胞内及癌细胞株细胞内cAMP、cGMP的研究

本文报告应用放射免疫法检测了37例急性白血病患者(急性淋巴细胞性白血病,简称急淋18例:急性粒细胞性白血病,简称急粒19例)外周血单个核细胞内、8个癌细胞株细胞内、15例正常人外周血单个核细胞中cA MP、CG MP的含量。结果白血病癌细胞株细胞内、急淋、急粒患者的治疗前,诱导期外周血单个核细胞内cAMP含量比正常入低。cGMP的含量比正常人高。cAMP/cGMP比值低于正常人,P<0.01。而缓解期病人cAMP水平回升,cGMP及cAMP/cGMP比值水平下降均接近正常对照组,提示:急性白血病患者的外周血单个核细胞内及白血病癌细胞株细胞内的环核苷酸有变化,而且急淋病人细胞内的环核苷酸的变化较急粒显著,白血病的不同的时期环核苷酸更有差异。     

复方抗病毒制剂体外抗流感病毒和呼吸道合胞病毒作用及毒性研究

目的 测定复方抗病毒制剂体外对流感病毒和呼吸道合胞病毒的抗病毒作用. 方法 用鸡红细胞血凝素滴定法测定不同浓度复方抗病毒制剂在狗肾传代细胞（MDCK）中对流感病毒的抑制作用;用中和实验测定复方抗病毒制剂在Hep 2细胞中对呼吸道合胞病毒的活性. 结果 复方抗病毒制剂浓度＜1.5 mg&#8226;mL^-1时对MDCK细胞及Hep 2细胞无明显毒性. 浓度＞0.15 mg&#8226;mL^-1能抑制流感病毒的血凝活性和呼吸道合胞病毒对靶细胞的攻击作用. 结论 复方抗病毒制剂体外对流感病毒和呼吸道合胞病毒具有较强的抑制作用,且有较大的安全性.