cyclin D3与淋巴瘤细胞增殖相关性的初步研究

目的：初步探讨cyclin D3与淋巴瘤细胞增殖活性的相关性。方法：运用荧光免疫细胞化学法结合激光共聚焦显微镜观察，分析淋巴瘤细胞株Raij细胞内cyclin D3与Ki67表达、定位的关系。通过转染pDsRed-cyclin D3和pSuPER-cyclin D3 siRNA质粒，分析改变eyelin D3表达水平对肿瘤细胞增殖能力的影响。结果：在分裂增殖旺盛的Raji细胞中，Ki67与cyclin D3共定位于细胞核内。导入外源性cyclin D3引起相应细胞核Ki67的表达增加，阻断内源性cyclin D3基因表达，导致同一细胞相同部位Ki67表达水平下降。结论：cyclin D3的表达水平与NHL细胞增殖活性密切相关，提示其可能在淋巴瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。     

Src抑制的蛋白激酶C底物在细胞因子诱导的C6胶质瘤细胞中表达的改变(英文)

目的研究肿瘤坏死因子(TNF-α)对培养的C6胶质瘤细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C Kinase Substrate,SSeCKS)表达的影响。方法根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的C6胶质瘤细胞随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,运用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位。结果细胞因子TNF-α可引起C6胶质瘤细胞中蛋白激酶C(Protein ki-nase C,PKC)底物的广泛磷酸化,并以时间及浓度依赖的方式上调PKC底物SSeCKS的表达。免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于细胞质,浓集于细胞伸长的足突中。TNF-α刺激后,SSeCKS向核周迁移。这些改变可被PKC的抑制剂Ro-31-8220部分抑制。结论TNF-α可诱导C6胶质瘤细胞中PKC的活性,上调SSeCKS表达,这些改变与PKC 的活性相关,提示SSeCKS可能参与胶质细胞中炎症信号的转导。     

P27kip1与细胞周期素D3在非霍奇金淋巴瘤中的表达、定位及相互关系

目的探讨P27^kip1和细胞周期素（cyclin）D3在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的表达、定位、相互关系及意义.方法采用免疫组织化学方法检测100例NHL患者病理标本及20例反应性增生淋巴结标本中P27^kip1、cyclin D3及细胞增殖指标Ki-67的表达.采用Western blot、免疫荧光双标法和激光共聚焦技术检测3种淋巴瘤细胞系细胞内P27^kip1和cyclin D3的表达、定位.结果 P27^kip1在NHL组织中的阳性率低于反应性增生淋巴结,且与肿瘤侵袭性以及增殖活性（Ki-67指数,Ki-67 LI）呈负相关;cyclin D3在NHL组织中的阳性率高于反应性增生淋巴结,且与肿瘤侵袭性以及增殖活性呈正相关;P27^kip1与cyclin D3呈负相关.但在少数病例出现P27^kip1的异常高表达并伴有cyclin D3和Ki-67的高表达.P27^kip1与cyclin D3在3种淋巴瘤细胞系的表达水平不一,在Raji细胞中P27^kip1与cyclin D3共同高表达并且共定位.结论 P27^kip1的低表达,cyclin D3的高表达与多数NHL的发生发展有关;部分病例或细胞系中P27^kip1的异常高表达及其与cyclin D3相互作用可能是NHL发生的另一机制.     

微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）免疫检查点分子程序性死亡配体1（PD-L1）的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法 选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族（miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141）的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果 138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%（81/138）,高于癌旁组织（3.6%,5/138）,差异有统计学意义（P<0.05）;PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关（P均<0.05）。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织（P均<0.01）,且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平（P均<0.01）。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达（P均<0.01）,且抑制癌细胞增殖活性（P均<0.01）。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达（P均<0.01）。结论 PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。     

p27kipl和Ki-67蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

目的 探讨p27^kipl和Ki-67蛋白在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化方法检测100例NHL及20例反应性增生淋巴结中p27^kipl和Ki-67蛋白的表达情况，结合临床及病理资料进行统计分析。结果 p27^kipl蛋白在反应性增生淋巴结(不包括生发中心)中的阳性率明显高于NHL，随着肿瘤侵袭性的增加，p27^kipl表达水平下降。Ki-67蛋白在反应性增生的淋巴结(不包括生发中心)中的阳性率明显低于NHL，其表达水平随着肿瘤的侵袭性增加而上升。NHL中p27^kipl蛋白的阳性率与Ki-67表达水平呈负相关。结论 p27^kipl与NHL的发生发展有关，联合检测p27^kipl及Ki-67蛋白水平可为NHL的临床诊断和治疗提供参考。     

Cyclin E与Rb在B细胞性非霍奇金淋巴瘤中的表达

研究表明，Rb蛋白的异常表达与某些肿瘤的发生有关。Cyclin E通过改变Rb蛋白的磷酸化状态来调节Rb的生物学活性，其异常表达与多种肿瘤的侵袭陛及预后相关。本研究分析了62例B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B—NHL)中cyclin E与Rb蛋白的表达，探讨了cyclin E和Rb与B—M也发病的关系。     

LPS对大鼠雪旺氏细胞TNF-α合成和释放的影响

目的：探讨内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）的诱导作用对大鼠雪旺氏细胞肿瘤坏死因子α（tumor nec-rosis factor-α,TNF-α）的表达。方法：不同浓度,不同时间用LPS刺激雪旺氏细胞,用酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测细胞胞液和上清中分泌的TNF-α的表达量,同时用间接免疫荧光细胞化学染色检测TNF-α的细胞定位。结果：用LPS10μg/ml刺激后2小时能显著促进雪旺氏细胞浆内TNF-α的表达,同时也检测到培养液上清中有TNF-α的释放。结论：细菌的致病因子LPS的诱导确能促进雪旺氏细胞高效表达和分泌TNF-α,从而为雪旺氏细胞作为免疫活性细胞在周围神经系统中发挥免疫调节作用提供初步依据。     

2015 年医学免疫学领域国家自然科学基金项目概况

<正>医学科学部医学免疫学科(H10)主要资助针对医学科学问题开展的免疫学研究,包括对机体免疫系统的发育分化和免疫应答及其异常的研究,以及在各类疾病发生、发展、转归、诊断、治疗和预防等过程中的免疫学机制(包括基础研究和临床基础研究)~[1]。本文分析了2015年医学免疫学领域国家自然科学基金项目基本情况,旨在为相关人员今后申报国家自然科学基金提供参考。1申请项目情况医学免疫学(H10)是医学科学部设立的一级申     

p27^kipl及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27^kipl为CIP／KIP家族的主要成员，对细胞周期起负调节作用。由于p27^kipl的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase—associated protein 2，Skp2）介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节，因此p27^kipl降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要。Skp2为人类F-box蛋白家族成员，介导p27^kipl的多聚泛素化及随后的蛋白水解。研究发现Skp2在人类多种肿瘤中都有表达，并且与肿瘤组织的分化程度及预后相关。我们旨在对Skp2参与介导的p27^kipl的泛素-蛋白酶体途径降解与p27^kipl的稳定性之间的关系进行探讨，运用目前比较公认的血清饥饿合并释放方法同步化处理U937细胞，结合Western blot、免疫荧光双标记及激光共聚焦技术检测在不同生长状态下p27^kipl、Skp2及其他细胞周期相关分子在U937细胞内的表达和定位情况。     

人类NET-1基因正、反义真核表达载体的构建及在肝癌SMMC-7721细胞中的表达

肝癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一,其中约55%发生在中国[1],至今仍缺乏有效的治疗手段.NET-1属于四次跨膜蛋白(TM4S)家族成员[2],具有显著上调癌形成的作用[3].在研究人体组织中NET-1表达及分析肝与肝癌组织NET-1表达差异的基础上[3-5],作者采用分子克隆和基因转染技术将构建的NET-1正、反义真核表达载体分别转染肝癌细胞SMMC-7721,为进一步探讨NET-1基因在肝癌发生发展中的作用提供实验模型.