C亚型SHIV-XJ02170在中国恒河猴体内传代研究

目的 了解SHIV-XJ02170病毒在中国恒河猴体内传代过程中病毒学和免疫学变化特点,构建适用于我国艾滋病疫苗评价的C亚型SHIV/中国恒河猴模型.方法 将SHIV-XJ02170感染性全长质粒转染293T细胞制备病毒,后肢静脉途径在中国恒河猴体内传3～4代.传代过程中采用流式细胞术检测外周血CD4/CD8比值,分析病毒致病能力的变化.实时荧光定量RT-PCR方法 检测SHIV病毒载量,了解病毒学变化特点.同时,利用ELISA和ELISPOT方法 分析病毒传代过程中体液和细胞免疫学变化特点.结果 SHIV-XJ02170病毒传代过程中,CD4/CD8比值未表现出剧烈的下降特点.线路3传代中急性期血浆病毒载量峰值和Setpoint值表现出连续上升的趋势.病毒感染恒河猴后可诱导较强的体液和细胞免疫应答.同时,病毒载量和交叉抗体滴度之间表现出显著的正相关关系.结论 SHIV-XJ02170病毒在中国恒河猴传代后未出现致病性突变株,但是表现出毒力上升的趋势.SHIV-XJ02170/中国恒河猴模型将在我国艾滋病疫苗有效性评价中发挥重要作用.     

体内电穿孔在质粒介导的基因转移及DNA免疫中的应用

目的 研究体内电穿孔技术对于质粒DNA介导的体内基因表达以及HIV-1 Env DNA疫苗免疫效果的影响.方法 将携带荧光素酶Luciferase基因的表达质粒p1.0-Luc和携带HIV-1 CN54 env基因的DNA疫苗质粒p1.0-gp1455m通过单独肌肉注射或肌肉注射后加电穿孔两种不同方法 注射小鼠.用IVIS(R)活体成像系统实时检测Luciferase报告基因在体内的表达情况.用ELISA检测HIV-1 Env特异的抗体反应,用IFN-γ ELISPOT检测HIV-1 Env特异的T细胞免疫反应.结果 体内电穿孔技术可以显著提高Luciferase在小鼠体内的表达水平,幅度达35倍.HIV-1 Env DNA疫苗免疫结果 显示,8μg质粒剂量电穿孔途径诱导的体液和细胞免疫应答强于40μg质粒剂量单纯肌肉注射组;体内电穿孔途径免疫2次与单纯肌肉注射途径免疫3次诱导的体液和细胞免疫应答水平相当.结论 体内电穿孔技术可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗的免疫应答.     

C亚型SHIV-XJ02170在中国恒河猴体内传代研究

Objective To analyze the virologic and immunologic properties during SHIV-XJ02170passage in vivo and construct the clade C SHIV/Chinese origin Rhesus macaques AIDS model . Methods SHIV-XJ02170 cell-free virus tranfected in 293T was adapted by serial passage in nine Chinese-origin Rhesus macaques. CD4/CD8 ratio was detected by flow cytometry to analyze the changes in viral pathogenicity. Real-time RT-PCR and IFN-γsecreting ELISPOT methods were used to analyze changes in characteristics of virology and immunology. Results During in vivo passage, CD4/CD8 ratio did not deeply decline. However,the peak and setpoint viral load in the line 3 show a continuous upward trend. The strong humoral and cellular immune responses were induced after SHIV-XJ02170 infection. Meanwhile, there was significant positive correlation between the viral load and binding antibody titer. Conclusion There were no pathogenic viral strains, and upward trend in virulence of SHIV-XJ02170 was found during in vivo passaging. SHIVXJ02170/Chinese origin Rhesus macaques model will play an important role in effect evaluation of candidate AIDS vaccines in China.     

“强仿”拉下高药价

为确保医改顺利实施,国家可通过“强仿”策略实现重要药品和医用器材的国产化,以大幅减轻群众的看病就医负担。     

HIV-1广谱中和活性样本膜蛋白基因序列特征分析

目的分析广谱中和活性感染者不同时间点HIV-1膜蛋白基因的序列特征。方法应用单拷贝基因组扩增技术(Single genome amplification,SGA)扩增获得不同时间点样本的全长膜蛋白(Env)基因,分析Env基因可变区序列长度、糖基化位点数目、细胞嗜性及中和表位关键氨基酸的变异。结果系统进化分析显示在5个不同时间点获得的98条全长Env基因为HIV-1 B’亚型毒株;毒株序列随时间推移基因距离增加,V1V2区序列长度变化大于V4区,V3区与V5区序列长度保持恒定;Env基因共享序列有27个潜在糖基化位点(PNGS),V1V2区的糖基化位点数目变化较大,MPER区次之,V3区数目恒定;部分毒株嗜性随时间推移发生了从CCR5到CXCR4的转变;Env基因与广谱中和活性相关的特征氨基酸位点的突变率在4.76%~100.00%间。结论广谱中和活性感染者不同时间点的Env基因序列差异随时间推移而增加,中和单抗识别的关键位点氨基酸存在不同类型和不同程度的突变,表明广谱中和活性感染者体内毒株在免疫压力下持续进化。     

HIV-1的分类与命名

随着研究的逐步深入,HIV-1的分类与命名不断地发生变化.本文介绍了这方面的研究进展,同时介绍了HIV-1亚型研究对人们深入理解HIV起源、流行趋势、传播路线所起的积极作用,对合理开发用于HIV感染诊断、疾病监测的试剂及合理地设计疫苗所起的指导性作用.     

慢病毒dUTPase结构与功能的研究进展

dUTPase是生物体遗传和基因复制的重要水解酶,它可以防止dUTP在DNA合成中的插入和错配,维持DNA复制的保真性和降低生物体发生突变的频率;同时还为DNA的合成提供必需的原料.对于慢性病毒来说,它还是构成病毒毒力及病毒高效复制的因素.因此,dUTPase可用于抗肿瘤细胞和抗病毒药物的筛选.本文对dUTPase的分布和进化关系、结构与功能的研究进展进行了概述.     

具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定

目的 从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法 以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC₅₀)<0.1μg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒...     

陕西省HIV-1流行株膜蛋白基因 C2-V3区序列特征和亚型分析

目的了解陕西省HIV-1毒株的流行情况和亚型特征.方法用套式聚合酶链式反应(Nested-PCR)对6份采集于陕西省经确认为HIV-1感染者或艾滋病病人外周血淋巴细胞(PBMC)提取核酸,从6份样品中获得了HIV-1膜蛋白(ENV)基因的核酸片段进行扩增,并测定和分析了C2-V3及其邻区共312个核苷酸序列.结果 6份血样中,2份为HIV-1A亚型毒株感染(SHX7、SHX8);4份为HIV-1B'亚型(泰国B'亚型)毒株感染(SHX1、SHX5、SHX6、SHX9).SHX1、SHX5、SHX6、SHX9彼此间基因离散率为5.62%,SHX7与来自卢旺达的U08794之间的基因离散率仅为2.41%.结论陕西省目前存在HIV-1 A、B'两种亚型的毒株,HIV-1 B'亚型由邻近地区传入,HIV-1 A亚型为与非洲人接触传入.     

HIV抗体诊断初筛试剂临床质量评估

检测艾滋病病毒(HIV)抗体,是当前常规使用的临床诊断依据[1],其正确与否直接影响受检者本人及其家庭以及社会的稳定性,涉及到法律诉讼事件.为此,卫生部专门制定了<全国艾滋病检测工作规范>和,要求对HIV抗体检测严格掌握质量管理,其中试剂质量是质量控制的一项重要措施;而有组织地定期对市场上HIV抗体诊断试剂进行临床应用质量评估工作,是对已实行的国家药政部门对试剂出厂后批批检制度的一项重要补充,无论是对用户,厂家还是政府有关部门都有重要意义[2].