结直肠癌中Ets-1和整合素α6β4的表达及临床意义

目的：检测结直肠癌中转录因子Ets-1和整合素α6β4的表达,探讨其在结直肠癌浸润转移中的作用及临床意义。方法：选取2007年6月至2008年6月间天津医科大学总医院外科40例结直肠癌手术标本为研究对象,分别采用荧光实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肿瘤和切端组织中Ets-1和整合素α6β4的mRNA和蛋白表达水平,并结合临床病理资料进行统计学分析。结果：Ets-1和整合素α6β4在肿瘤组织中的mRNA表达水平和蛋白表达水平均高于切端组织 （P<0.05）;Ets-1 mRNA的表达与肿瘤的组织学类型、肿瘤部位、大小及分化程度未见相关性 （P>0.05）,伴淋巴结转移者Ets-1 mRNA的表达明显高于不伴淋巴结转移者, 其差异具有统计学意义 （P<0.05）, Ets-1 mRNA表达与大肠癌浸润深度及Dukes分期存在正相关, 伴随肿瘤浸润深度和临床分期的增加, Ets-1 mRNA表达明显增加, 其差异有统计学意义 （P<0.05）; 淋巴结转移者的Ets-1蛋白阳性率为91.3% （21/23）,无淋巴结转移者为58.8% （10/17）,两者差异具有统计学意义 （P<0.05）,伴随肿瘤浸润深度和Dukes分期的增加, 肿瘤组织中Ets-1蛋白阳性率也显著增加 （P<0.05）, 而Ets-1蛋白表达水平与病理类型及分化程度未见相关性 （P>0.05）; 结直肠癌中Ets-1的表达与整合素α6β4的表达呈正相关 （P<0.05）。结论： 检测结直肠癌内Ets-1和整合素α6β4的表达可作为评价肿瘤侵袭转移、 判断预后的重要指标, Ets-1可能成为结直肠癌基因治疗新的靶点。     

胰岛素瘤的定位与外科治疗

目的：评价胰岛素瘤影像学定位价值和外科治疗方式。方法：对1995年5月－2000年10月外科治疗的26例胰岛素瘤进行回顾分析。结果：BUS术前定位准确率23．1％，CT定位准确率55％，DSA定位准确率50％，手术探查准确率96．2％，行肿瘤剜除术21例，切除肿瘤21枚，行胰体尾部及脾切除4例，切除肿瘤7枚，其中1例为多发胰岛素瘤伴胰岛细胞增生，胰岛素瘤多达4枚，恶性胰岛素瘤伴肝转移1例，结论：胰岛素瘤影像学术前定位率很低，手术首选胰岛素瘤剜除术。     

毛细管电泳检测nm23-H1基因在乳腺癌组织中的表达

目的:检测nm23-H1基因在乳腺癌中的表达与突变,寻找它们与淋巴结转移的关系。方法:用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测nm23-H1mRNA表达,毛细管聚丙烯酰胺凝胶电泳(CPAGE)行单链构象多态性分析(SSCP)检测DNA突变。结果:应用CPAGE可在30min内分离出nm23-H1基因RT-PCR产物的单链及双链峰。nm23-H1表达、突变在腋淋巴结有、无转移组均有差异;mRNA在有远处转移组呈现低表达;DNA突变率在肿瘤≤5cm和>5cm组间有差异。结论:nm23-H1表达和突变可以做为评估乳腺癌转移危险的指标;CPAGE技术用于肿瘤组织的PCR-SSCP分析具有快速灵敏、准确、重复性好的特点。     

大鼠小肠移植术后浸润移植小肠的T细胞动态研究

以远交系大鼠制作异位小肠移植模型，利用图像分析技术对浸润移植小肠的T淋巴细胞亚群进行连续定量测定，并与终期组织病理检查做比较，分析T淋巴细胞在排斥反应中的作用。结果表明未使用免疫抑制治疗的大鼠在术后其移植物均出现OX8＋细胞浸润增多，而使用环孢素A的大鼠其OX8＋和W3／13＋细胞浸润逐渐减少；术后7～10天各组大鼠小肠移植物W3／25＋细胞均呈上升趋势。本研究说明OX8＋细胞亚群在排斥反应中起重要作用，其浸润增多与移植物局部免疫损伤的形成有密切关系。     

输注转染FasL基因的供者树突状细胞减轻小鼠心脏移植排斥反应

目的 探讨转染FasL基因的供者树突状细胞(DC)对小鼠心脏移植排斥反应的影响.方法 分离并培养C57BL/6小鼠骨髓DC,然后采用脂质体法以自行构建的pTracer-FasL真核表达质粒转染DC.以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者,将其分为转染组(n=12)、未转染组(n=12)及移植对照组(n=12).转染组小鼠心脏移植前7 d经阴茎背静脉注射1×106个转染FasL基因的供者DC;未转染组小鼠心脏移植前7 d经阴茎背静脉注射1×106个未转染的供者DC;移植对照组仅行心脏移植,不接受供者DC输注.供心均移植于受者腹腔内.各组中,6只小鼠用于观察移植心脏存活时间,另6只于术后7 d处死,取移植心脏,进行组织学观察及移植心脏排斥反应病理分级.结果 转染组、未转染组和移植对照组小鼠移植心脏存活时间的中位数分别为20 d、8.5 d和9 d,转染组移植心脏的存活时间明显长于未转染组和移植对照组(P＜0.01).转染组中,2只排斥反应的病理分级为0级,4只为1级;未转染组中,2只为2级,4只为3级;移植对照组中,1只为2级,5只为3级.转染组排斥反应的病理分级明显低于移植对照组(P＜0.01).结论 受者于心脏移植前输注转染FasL基因的供者DC,可有效延长移植心脏的存活时间,并减轻排斥反应的程度.     

大鼠小肠移植后外周血CD45RC+细胞和CD45RC-细胞比值的变化及意义

目的探讨可用于诊断小肠移植后排斥反应的指标.方法采用F334大鼠建立同系全小肠移植模型,以近交系F334大鼠和BN大鼠建立同种全小肠移植模型,术后采用流式细胞仪连续测定外周血CD4+、CD8+细胞中CD45+亚群以及CD45RC+细胞与CD45RC-细胞比值(CD45RC+/CD45RC-)的变化,同期进行移植肠组织病理学检查.结果同系移植组受者术后均获长期存活(＞28 d);同种移植组受者术后存活(12.0±1.3)d,出现中、重度排斥反应.术后外周血CD4+CD45+和CD8+CD45+细胞的变化,两组间的差异无统计学意义;同系移植组CD4+CD45RC+/CD4+CD45RC―及CD8+CD45RC+/CD8+CD45RC―在术后3 d升高,然后迅速降至手术当天的水平,同种移植组上述指标术后均维持较高水平.结论动态观察CD4+CD45RC+/CD4+CD45RC-较适于监视排斥反应的发展过程,而CD8+CD45RC+/CD8+CD45RC-更适于排斥反应的早期诊断.     

大鼠肠系膜血管吻合式小肠移植模型建立及其意义

报告采用大鼠系膜血管吻合式小肠移植模型的制作方法,依此法共施小肠移植手术96只,模型稳定后的51只手术成功率达87.4%。该方法所建立大鼠自体移植模型不仅为利用远交系大鼠研究小肠移植免疫反应提供可靠的阴性对照,而且可做为移植小肠保存、缺血后再灌注损伤等多方面研究的较好模型。     

以细胞动力学评估结直肠癌的切除范围

目的 评估结直肠癌的切除范围。方法 采用单克隆抗体识别的流式细胞分析技术对 30例结直肠癌标本的肿瘤组织 (T)、癌旁 2 cm(P2)、癌旁 5 cm(P5)及远癌切端正常组织 (N)进行 4点检测，分析各点间 DNA指数 (DI)、增殖期细胞百分比 (SPF)及增殖指数 (PI)的差异性。结果 T组织异倍体率显著高于 P2、 P5及 N组织， P2与 P5组织间异倍体率差异无显著性，而 P2、 P5组织异倍体率显著高于 N组织； T组织的 SPF及 PI值明显高于 P2、 P5及 N组织，而 P2、 P5及 N各点间检测结果差异无显著性。结论 癌旁 5 cm处组织细胞已出现了潜在的恶变倾向，从而对癌旁 5 cm作为切除范围的标准已属安全的观点提出了质疑。     

纳米载体组氨酸接枝聚介导的 shRNA 对大鼠肝脏 MyD88基因表达的干扰作用

目的：研究应用纳米载体组氨酸接枝聚（β-氨基酯）（HGPAEs）介导的RNA干扰技术对大鼠肝脏髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）基因表达的抑制作用。方法构建HGPAEs及针对大鼠MyD88基因的shRNA（ small hairpin RNA）质粒,并将二者耦合成pMyD88-HGPAEs载体,分别设置生理盐水组、HGPAEs 组、pHK-HGPAEs 阴性对照组、shRNA 组和pMyD88-HGPAEs干预组,通过门静脉注射方法体内转染大鼠肝脏,分别采用荧光定量PCR技术和蛋白印迹法（ Western blot ）检测转染后的MyD88转录水平及蛋白表达水平。结果成功构建载shRNA质粒的HGPAEs载体,体内转染大鼠肝脏后,shRNA组及pMyD88-HGPAEs干预组MyD88基因表达水平差异具有统计学意义（P＜0．05）。与其他4组相比,pMyD88-HGPAEs干预组MyD88基因的mRNA转录水平及蛋白表达水平显著下降（ P＜0．01）,而生理盐水组、单纯HGPAEs组、pHK-HGPAEs阴性对照组转染后MyD88基因mRNA转录水平及蛋白表达水平差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论 HGPAEs是一种较为理想的基因转运载体,应用针对大鼠MyD88基因的载shRNA质粒的HGPAEs载体,经门静脉注射方法转染大鼠肝脏可显著性抑制MyD88基因表达,本实验成果的取得为下一步动物实验提供一定的资料。