miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的：利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法: 实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒 pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR（miR-205互补位点）点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mut-YES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果：与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics 转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组（P<0.05）;YES1-3′UTR与miR-205 mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组（P<0.01）;YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组（P<0.05）。结论： miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。     

体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流对犬脑组织保护作用的实验研究

目的:探讨体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术对犬脑组织的影响.方法:14只健康成年杂种犬随机分为实验组和对照组,每组7只.右侧第4肋间进胸,常规建立体外循环.实验组不阻断升主动脉,血流降温到28℃,心包腔内注入4℃生理盐水诱导室颤,同时行充分左心引流;对照组阻断升主动脉,经主动脉根部灌注冷晶体停跳液.检测相应时间点血清IL-8和S100β蛋白浓度:检测CPB前及结束时脑组织S100β蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达.结果:实验组与对照组的血清IL-8、S100β的浓度水平比较差异有统计学意义(P<0.05),各时间点之间也存在差异(P<0.05).两组在CPB前IL-8、S100β浓度无明显差异,转机后均开始升高,且均在CPB 2 h达到高峰,并于CPB3h逐渐下降,但仍然高于CPB前水平.脑组织免疫组化显示:两组脑组织的S100β及NSE的积分光密度值比较差异有统计学意义(P<0.05).在CPB结束时,两组脑组织的S100β和NSE的积分光密度值比CPB前显著增高(P<0.01).结论:体外循环不阻断升主动脉低温室颤左室引流技术可减轻全身炎症反应,减少脑栓塞发生率,有利于脑保护,具有一定的临床价值.     

树突状细胞疫苗对体外肺癌细胞杀伤机制的实验研究

树突状细胞（dendritic cell．DC）是体内功能最强的抗原提呈细胞（antigen presenting cells，APC），成熟的DC是唯一能激活幼稚T淋巴细胞（naive Tcell）的专职抗原提呈细胞．在诱导高效而特异的抗肿瘤细胞免疫中起关键作用。本文旨在探讨DC疫苗培养的上清液对杀伤靶细胞的杀伤机制，为后期临床应用提供一定的实验依据。     

肺癌可溶性抗原致敏的DC诱导CTL特异性杀伤肺癌细胞的实验研究

目的 通过对负载人肺癌GLC-82细胞可溶性抗原的树突状细胞（DC）体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）对肺癌细胞的杀伤研究，为以DC为基础的肺癌免疫瘤苗的临床应用提供一定的实验依据。方法 通过用3MKCl提取法和弱酸洗脱法获得人肺腺癌细胞GLC-82的可溶性抗原多肽，用GLC-82细胞抗原多肽冲击致敏从人外周血单核细胞（PBMC）中用GM-CSF、IL-4和TNF—α体外诱导扩增并经鉴定的DC；利用负载GLC～82细胞抗原多肽的DC，刺激同种异体外周血T淋巴细胞活化增殖，诱导产生具有识别肺癌细胞抗原的特异性CTL；进一步探讨该CTL对GLC-82，肺癌CALU-6和人红白血病K562细胞的体外杀伤效应。结果 人PBMC体外经7d诱导出的DC，经光镜、电镜、免疫组化证实具有典型的树突状细胞特性；经GLC-82抗原致敏的DC诱导同种异体T淋巴细胞活化增殖产生CTL，诱导激活的CTL与靶细胞共育时镜下发现CTL靠近并聚集在肿瘤细胞周围，致使肿瘤细胞发生凋亡和坏死。结论肺癌可溶性蛋白抗原能活化致敏DC，无需明确肿瘤特异抗原，获取方法简便可行；联合应用GM—CSF、IL-4和TNF—α诱导人PBMC中的单核细胞，能诱导出功能较强的DC；致敏DC能强烈刺激初始型同种异体T淋巴细胞增殖产生CD8^＋表达增加的CTL;激活的CTL对肺癌靶细胞发挥高效而特异的细胞毒效应，对非肺组织瘤靶细胞也具有非特异性杀伤效应。     

大鼠肾移植1000例经验总结

目的:对大鼠肾移植进行经验总结以指导实验与临床研究.方法:作者在2004-01/2009-07海德堡大学移植中心期间,采用大鼠肾动、静脉与腹主动脉、腔静脉行端侧吻合.对于急性肾移植模型,输尿管直接植入膀胱内;对于慢性肾移植模型,输尿管采用端端吻合法.术中直接切除对侧肾脏,完成大鼠肾移植1 000例,并对其进行总结.结果:只要供体肾脏冲洗良好,吻合时暖缺血时间小于30 min,手术时间60 min左右,吻合技术娴熟,移植成功率达98%以上.结论:该实验模型安全、方便、可行.肾移植成功的关键是手术技术.     

达·芬奇机器人手术与开放性手术根除前列腺癌的临床对照

目的 探讨前列腺癌治疗新技术达·芬奇(DA-Vinci)手术机器人的临床应用效果及与开放性手术的效果比较.方法 对2006年6～8月德国海德堡大学外科医院收治的46例前列腺癌手术治疗患者临床资料进行分析,其中行常规开放性手术17例,达·芬奇机器人手术29例.结果 达·芬奇机器人手术治疗较开放性手术出血少,患者疼痛轻微.手术和住院时间缩短,术中和术后感染的机会少,恢复迅速并且腹部瘢痕小.结论 达·芬奇机器人根除前列腺癌手术治疗作为一种微创、准确、智能化的新的手术操作系统.具有开放性手术无可比拟的优势,为外粹医师提供了新的技术平台.     

不同药物预处理诱导心肌内源性HSP70表达的对比实验研究

目的:通过对比几种不同药物预处理对心肌内源性HSP70的诱导作用,筛选最佳诱导药物及诱导时间。方法:成年SD大鼠,分为4组:NS组,NE组、NCR组、NTG组。按规定剂量腹腔注射相应的药物行预处理。各组大鼠实验结束后被处死,采用免疫组化S-P法检测心肌内源性HSP70的光密度值。结果:①所选的药物可诱导内源性HSP70产生,其诱导活性依次为:尼可地尔>硝酸甘油≥去甲肾上腺素;②药物预处理诱导心肌内源性HSP70的表达量随给药次数的增加呈递增趋势。结论:尼可地尔注射液是最有效的诱导心肌产生内源性HSP70的药物,最佳时间为连续给药9次。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤时基质金属蛋白酶的影响

目的观察N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理对心脏移植缺血再灌注损伤（IRI）时基质金属蛋白酶（MMP）的影响,并探讨其可能的机制。方法健康雄性Lewis大鼠60只,随机分为3组。对照组：摘取供体心脏前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射生理盐水0.5 ml;供体预处理组：摘取供心前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg;受体预处理组：受体于移植前30 min经受体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg。供心冷藏于4℃组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（HTK）18 h后建立大鼠腹腔异体异位心脏移植模型。移植后24 h光镜下观察心肌胶原含量的变化;免疫组织化学法检测心肌组织中MMP2/9蛋白表达;采用实时PCR检测MMP2和基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）mRNA表达。结果 NAC供体/受体预处理组心肌胶原含量明显低于对照组（4.49±0.62/5.88±0.96 vs.10.43±0.93,P〈0.01）;免疫组织化学法半定量评分显示NAC供体/受体预处理组MMP2/9蛋白含量明显低于对照组（1.60±0.22/2.13±0.23,1.63±0.18/2.78±0.16 vs.3.00±0.15/3.78±0.15,P〈0.01）,受体预处理组心肌组织中MMP2 mRNA明显低于对照组（1.45±0.72vs.2.77±1.62,P〈0.05）,而供体预处理组TIMP2 mRNA明显高于对照组（2.59±2.12 vs.0.63±0.50,P〈0.05）。结论在大鼠心脏移植中NAC对供心IRI具有保护作用,可能是通过NAC直接抑制活性氧所致的MMP2/9升高,激活TIMP2,减轻了心肌IRI。     

一氧化氮合酶在N-乙酰半胱氨酸调控大鼠心肌冷缺血-再灌注损伤中的变化

目的:观察一氧化氮合酶(NOS)在N-乙酰半胱氨酸(NAC)调控大鼠心肌冷缺血-再灌注损伤中的变化。方法:将健康雄性Lewis大鼠60只随机分为3组。(1)对照组:摘取供心前30 min,经供体大鼠下腔静脉注射生理盐水0.5 mL;(2)供体预处理组:摘取供心前30 min,经供体大鼠下腔静脉注射NAC300 mg/kg,受体大鼠不作预处理;(3)受体预处理组:移植前30 min,经受体大鼠下腔静脉注射NAC300 mg/kg,供体大鼠不作预处理。将冷藏于4℃HTK液18 h的供心移植至受体大鼠腹腔,建立同种异体心脏移植模型。于再灌注24 h后取供心采用免疫组化方法检测诱导型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶(iNOS/eNOS)蛋白表达水平,以免疫组化评分(IHS)表示。采用Real time-PCR法检测iNOS/eNOS mRNA表达。结果:与对照组相比,供、受体预处理组的iNOS蛋白表达降低,IHS评分分别为3.00±0.15、1.50±0.22、1.63±0.26,P<0.05;而eNOS蛋白表达升高,IHS评分分别为2.00±0.21,3.60±0.16,3.40±0.26,P<0.05。与对照组相比,受体预处理组iNOS mRNA表达降低(0.43±0.17对1.00±0.41,P<0.05),供体预处理组eNOS mRNA表达升高(3.06±1.47对1.00±0.65,P<0.05)。结论:NOS参与了NAC预处理减轻移植大鼠心肌缺血-再灌注损伤的过程。     

CT血管造影分析体外循环与非体外循环冠状动脉旁路移植后的桥血管通畅率

背景：近年来,非体外循环冠状动脉旁路移植后桥血管通畅率是否与传统的体外循环冠状动脉旁路移植相同存在争议。 目的：探讨体外循环与非体外循环冠状动脉旁路移植后桥血管时间通畅率的差异性。 方法：选取同一操作者行体外循环冠状动脉旁路移植患者100例,按其临床特征及桥血管病变危险因素匹配抽取非体外循环冠状动脉旁路移植患者137例。采用64排多螺旋CT血管造影分析冠脉搭桥后1个月,1年,2年,3年,4年的桥血管通畅情况。 结果与结论：共对641条桥血管进行评价,两组中左侧乳内动脉桥血管时间通畅率均高于大隐静脉桥,两组左侧乳内动脉桥和大隐静脉桥血管时间通畅率比较差异均无显著性意义。说明非体外循环与体外循环冠状动脉旁路移植后患者桥血管时间通畅率相似,对于某些适当的患者来说,非体外循环冠状动脉旁路移植不失为一个良好的选择。