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腺病毒介导细胞外信号调节激酶2表达对去分化软骨细胞增殖及胞外基质合成的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察腺病毒介导细胞外信号调节激酶2的过度表达对去分化软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响,以及腺病毒介导细胞外信号调节激酶2用于修饰去分化软骨细胞的可行性。
方法:实验于2004-09/2005-05在暨南大学组织移植与免疫研究中心进行。SD大鼠5只,周龄为3-5周,此处请核对体质量为(150&;#177;20)g,分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞,利用Adeasy系统构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体。流式细胞仪检测不同感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率,Western blot检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达,^3H-TdR,^3H-proline和^35 S-sulfate同位素掺入检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染对大鼠肋生长板软骨细胞增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响。
结果:①成功构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体重组腺病毒。②100感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率大于90%。③携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染的第5代大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1/2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达均显著增加,分别是Ad-CMV组的15.58和1.85倍。④同位素检测结果表明携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体的感染促进^3H-TdR、^3H-proline和^35S-sulfate的掺入,分别是对照组的2.52,1.61和1.53倍(P〈0.05)。
结论:腺病毒介导细胞外信号调节激酶2基因的过度表达促进去分化大鼠肋生长板软骨细胞的增殖和细胞外基质成分的合成。 相似文献
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可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养中细胞因子表达的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:研究可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养体系中TGF-β1、IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ及TNF-α表达水平的影响.方法:应用IL-4和GM-CSF诱导培养小鼠骨髓细胞,流式细胞术检测髓系树突状细胞(DC)分化标志CD11c;将等量的淋巴细胞与之共培养,ELISA检测共培养上清TGF-β1的含量,Luminex100检测IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量.结果:可溶性Jagged1/Fc处理组TGF-β1和IL-10的水平与DAPT对照组之间无统计学意义(P>0.05),而IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平升高(P<0.05).结论:Jagged1/Fc能促进DC-T细胞相互作用导致IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平上调. 相似文献
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Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,在抗原提呈细胞(APC)表面表达丰富,介导树突状细胞(DC)成熟和分化.Jagged1与其受体结合后,激活Notch信号通路,能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节性T细胞(regulatory T cell 1,Treg 1)或产生高水平TGF-β的TH3细胞,在诱导免疫耐受中发挥着重要作用. 相似文献
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CpG ODN对不同来源树突状细胞活化的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的比较CpG ODN-1826对BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)和脾脏来源树突状细胞(SDC)的活化作用.方法用CpG ODN-1826体外刺激树突状细胞(DC),流式细胞术检测CD80阳性率,ELISA检测1L-12(p70)分泌水平,MTT法检测活化DC刺激T细胞增殖的能力.结果CpG ODN-1826体外可不同程度激活BMDC和SDC,诱导DC上调CD80的表达和分泌高水平IL-12,促进DC刺激T淋巴细胞增殖.CpG ODN-1826刺激的BMDC膜表面CD80表达水平明显高于SDC,其分泌IL-12的水平亦高于SDC.结论CpG ODN-1826可促进小鼠骨髓来源和脾脏来源DC的功能成熟,CpG ODN-1826刺激活化BMDC的作用明显强于刺激活化SDC. 相似文献
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超抗原SE抗肿瘤研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
超抗原 (superantigen ,SAg)是一组具有强大刺激能力的细菌外毒素或逆转录病毒 ,其无需抗原提呈细胞 (antigenpresentingcells ,APC)内处理加工 ,能直接与APC膜上的MHC II类分子抗原结合槽外侧非限制性结合 ,以完整的蛋白质分子形式被提呈给T细胞 ,只需极低浓度 (1~ 10ng/ml)即可诱发最大的应答效应 ,导致带有特异性T细胞受体 β链可变区 (Tcellreceptorbetachainvariableregions ,TCR Vβ)序列的T细胞大量活化增殖 ,并释放出大量多种细… 相似文献
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目的:探讨可溶性Jagged-1/Fe嵌合蛋白(Jagged-1)对重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)产生细胞凶子的影响.方法:建立rmCM-CSF和rmIL-4体外诱导DC的模型,观察Jagged-1/Fc对DC分化的形态学影响.通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELlSA检测其细胞因子的表达水平,藉MTT法测定可溶性Jagged-1/Fc诱导的DC对同种异基因淋巴细胞增殖的刺激能力.结果:除了TGF-β,Jag-ged-1/Fc诱导的DC与细菌脂多糖(LPS)或酵母聚糖A诱导的DC不同,表现为生成TNF-α的水平明显降低,IL-4显著增高,而IL-10、IL-6、IL-2、IL-12和IFN-γ的水平与对照组无明显差异.γ分泌酶抑制剂DAFT能逆转Jagged-1/Fc抑制DC生成TNF-α.混合淋巴细胞反应显示Jagged-1/Fc诱导的DC对T细胞增殖的刺激能力最弱,LPS诱导的DC的刺激能力最强.结论:Jagged-1/Fc诱导的DC倾向介导免疫耐受,指导初始T细胞向Th2细胞偏离. 相似文献
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以小鼠可移植性实体型S180为模型,CP为阳性对照,通过125I-udR标记肿瘤细胞DNA释放试验,观察了SAW直接体内注射对该带瘤小鼠的免疫疗效、腹腔巨噬细胞细胞毒和脾脏NK细胞细胞毒活性的影响。结果表明SAW能明显增强带瘤小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒和NK细胞细胞毒活性,这与SAW的抗肿瘤效应呈一致关系。结果提示SAW体内注射的抗肿瘤机制与其增强巨噬细胞细胞毒和NK细胞细胞毒活性有关。 相似文献
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茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 阐明茴香霉素对淋巴细胞反应性的影响以及在皮肤移植中抑制排斥反应的作用.方法: 用MTT法检测茴香霉素刺激下淋巴细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中的反应性.C57BL/6小鼠作为供体, BALB/c小鼠作为受体.手术前3 d分别给3组BALB/c小鼠皮下注射生理盐水、环胞霉素A以及茴香霉素, 手术当天继续注射至术后第7天.环胞霉素A及茴香霉素的注射剂量分别为: 20 mg/kg、 12.5 mg/kg.结果: 在剂量10.0 μg/L时, 茴香霉素能抑制单向或双向混合淋巴细胞反应中淋巴细胞的反应性(P均<0.01); 茴香霉素组移植皮肤的存活时间明显高于环胞霉素A组以及对照组.结论: 茴香霉素能明显抑制淋巴细胞的反应性; 并且能明显延长受体对皮肤移植物的耐受时间, 可能为移植免疫排斥的治疗提供新的途径. 相似文献
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以小鼠可移植性实体瘤Ca759、H615、P615和S180为模型,观察了SPA、SAC和SAW三种生物制剂直接体内注射的免疫疗效。结果表明,三种制剂对Ca759、H615、P615无效,而对S180小鼠具有明显的免疫保护效应;SAC和SAW的疗效均优于SPA,并导致肿瘤明显坏死、出血、萎陷和结痂。提示S180可作为研究三种制剂抗肿瘤效应及其机制的肿瘤模型。 相似文献
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红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法.方法 原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析.结果 一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加.结论 红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点. 相似文献