牛珀至宝微丸对内毒素休克肺组织核转录因子-κB表达的调控

目的观察牛珀至宝微丸对内毒素休克肺损伤时核转录因子-κB表达的影响。方法静脉注射内毒素(LPS)1.5mg/kg、腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)100mg/kg造成内毒素休克模型,用牛珀至宝微丸作预治疗处理,免疫组化方法检测NF-κB在肺组织内的表达。结果LPS组阳性表达部位在细胞核,牛珀至宝微丸组表达部位主要在细胞质。牛珀至宝微丸降低NF-κB表达,肺损伤减轻。结论证实牛珀至宝微丸能降低内毒素休克时肺组织NF-κB表达,改变其表达部位,提示牛珀至宝微丸对内毒素休克造成的肺损伤的保护作用可能是通过调控肺组织NF-κB而产生的。     

龟板含药血清对大鼠骨髓间质干细胞体外增殖的影响

[目的]观察益肾中药龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)体外增殖的影响。[方法]使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,分别从光学显微镜下的形态学特征、免疫细胞化学染色后的MSC表型特征、四甲基偶氯唑盐(MTT)染色后MSC的吸光值以及以Brdu、增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色后MSC的阳性细胞数变化等角度观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC的生长变化。[结果]不同浓度的龟板血清均以浓度依赖方式促进MSC增殖活力和增加Brdu、PCNA阳性细胞数,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。[结论]龟板血清可促进MSC的增殖而有利于细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成,推测这可能是龟板补肾的机理之一。     

rno-miR-161靶向EGLN2抑制血管性痴呆大鼠额叶铁死亡

目的 探讨rno-miR-161调控egl-9家族缺氧诱导因子2(EGLN2)对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠额叶铁死亡的影响。方法 24只雄性SD大鼠按随机原则分为模型组和假手术组,模型组结扎双侧颈总动脉,假手术组不结扎双侧颈总动脉。术后4周水迷宫检测行为学。RT-qPCR检测VD模型大鼠额叶rno-miR-161的变化,RT-qPCR和Western blotting检测EGLN2和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因验证rno-miR-161与EGLN2是否存在靶向调控关系。RT-qPCR及Western blotting检测rno-miR-161-mimic和rno-miR-161-inhibitor对EGLN2表达的影响。siEGLN2转染PC12细胞,检测GPX4的表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠额叶rno-miR-161表达下降、EGLN2表达上升、GPX4表达下降。rno-miR-161直接靶向EGLN2。rno-miR-161-mimic抑制EGLN2的表达,rno-miR-161inhibito...     

壳聚糖-明胶-碱性成纤维细胞生长因子三维大孔支架对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景:干细胞的分化潜能与培养条件有密切关系,改变支架材料的表面特性,三维结构,增加生长因子均可实现对干细胞增殖分化的控制.目的:制备适合骨髓间充质干细胞附着生长的、具有最佳孔隙率和孔隙结构的药物缓释组织工程支架--三维大孔支架,提供能促进多能干细胞生长的微环境.设计:重复测量设计.单位:广州中医药大学基础医学院解剖教研室.材料:实验所用健康成年 SD 大鼠由广州中医药大学实验动物中心提供.壳聚糖、碱性成纤维细胞生长因子购自Sigma公司.方法:实验于2003-03/2006-12主要在广州中医药大学基础医学院解剖教研室完成.采用冷冻干燥的方法,用不同比例的壳聚糖.碱性成纤维细胞生长因子-明胶依次混匀,通过控制冷冻、复温和干燥时间处理使其具有最佳孔隙率和孔结构,制备具缓释碱性成纤维细胞生长因子功能的三维大孔支架.取SD大鼠股骨和胫骨骨髓,分离、培养骨髓间充质干细胞并移植于缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架上进行三维培养,与无碱性成纤维细胞生长因子的支架对照.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.主要观察指标:用ELISA和扫描电镜观察支架的三维结构和缓释性能,用苏木精-伊红染色、MTT、细胞计数及扫描电镜方法观察缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架对骨髓间充质干细胞生长状态和细胞活力的影响.结果:含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架有碱性成纤维细胞生长因子缓释性能,孔隙尺寸与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架三维结构相比,差异无显著性意义(P＞0.05).含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能提高在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活率,促进骨髓间充质干细胞黏附、增殖和活力,与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能缓释碱性成纤维细胞生长因子,有利于在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活,为其在组织工程中的应用打下基础.     

颈外静脉套管针穿刺的临床应用

静脉输液及静脉给药是医院临床抢救和治疗病人的重要措施之一。如何及时、准确地为病人建立静脉通路是医务人员重要技术操作之一。在临床中采用颈外静脉套管针穿刺置管的方法，由于穿刺的方法容易掌握，穿刺成功率较高，既可减轻病人反复多次穿刺的痛苦，又能使输液更为方便快捷，减轻了医务人员的重复劳动，受到医务人员及患者的认可。     

龟板含药血清促进骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白4的表达

目的 龟板有促大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖作用,本研究观察龟板含药血清对MSCs中骨形态发生蛋白4(BMP4)表达的影响.方法 使用密度梯度法分离大鼠骨髓间充质干细胞进行培养,传代纯化,在基础培养液中添加不同浓度龟板含药血清和对照血清,用荧光定量PCR和原位杂交方法检测BMP4 mRNA表达,用ELISA、免疫组织化学和免疫荧光组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测BMP4蛋白表达的变化.结果 BMP4蛋白和mRNA表达相一致,龟板含药血清以浓度依赖方式促进MSC的BMP4 mRNA及其蛋白表达.结论 龟板含药血清以时效和量效依赖性促进BMP4在MSCs的表达,可能与龟板促MSCs增殖作用有关.     

三叉神经标本的制作技术和体会

现在教学过程中 ,标本的损坏率较高 ,尤其是三叉神经结构小、分支多 ,制作难度大 ,成功率低。为了提高该标本制作的质量和成功率 ,现就三叉神经的制作经验介绍如下。1　取材取一成人完整头颅 ,将脑取出 ,在眉弓和枕外隆凸作一连线 ,沿线把颅盖去掉 ,再将颅做正中矢状切面 ,最后剥除头面部的浅层结构 ,放入 10 %左右的盐酸溶液中浸泡以备用。2　方法①在标本的外侧面从眼裂到耳郭前 ,做一“U”型切口 ,用咬骨钳或骨剪将额骨及颧弓去掉直至下颌骨下缘 ;②先用刀把咬肌去掉 ,暴露下颌骨 ,再用咬骨钳、牙科钻等器械将下颌骨凿开 (小心不要将下…     

去卵巢大鼠骨质疏松对下丘脑雌激素α受体的影响

目的 观察去卵巢雌性大鼠骨质疏松对下丘脑雌激素α受体(estrogen receptor alpha,ERa)及基基因表达的影响。方法 将45只SD大鼠随机分为对照组、假手术对照组和去卵巢组,用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测下丘脑ERa及其mRNA表达。结果 去卵巢组ERa受体及其mRNA阳性细胞与对照组比较显著减少(P<0.01)。结论 下丘脑ERa受体及其mRNA阳性细胞的减少可能在绝经后骨质疏松发生起重要作用。     

D-氨基半乳糖致敏的内毒素休克SD大鼠模型

目的： 建立稳定的D-氨基半乳糖致敏的内毒素休克SD大鼠模型。方法： 采用不同剂量的D-氨基半乳糖（D-GalN）和内毒素（LPS）剂量，分别以腹腔注射10 mg/kg、50 gmg/kg 、100 mg/kg D-GalN,再分别以0.5 mg/kg、1.0 mg/kg、1.5 mg/kg、2.0 mg/kg LPS静脉注射。51只大鼠随机分组，以平均动脉压低于8.0 kPa(60 mmHg)为休克指标，持续6 h以上至实验结束动物不死亡为休克稳定标准，优化与实验要求相符的造模条件。结果： 腹腔分别注射10 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg D-GalN和同时分别静脉注射LPS 0.5 mg/kg、1.0 mg/kg组无动物死亡，但休克持续时间较短。静脉注射LPS 2.0 mg/kg组动物死亡率较高。静脉注射LPS 1.5 mg/kg和同时腹腔注射D-GalN 100 mg/kg组，尽管有少量动物死亡，但休克持续时间最长(P<0.01)。 结论： 腹腔注射D-GalN 100 mg/kg和静脉注射内毒素1.5mg/kg时可建立稳定的D-GalN致敏的内毒素休克SD大鼠模型。     

免疫组化染色的体会

免疫组化的染色过程中，易出现非特异性——假阳性。免疫组化假阳性发生的原因与内源性酶、组织固定、染色方法、抗体质量、组织片的质量，病理医生的经验不足等因素有关。本人通过多年的免疫组化经验和全面的分析，发现免疫组化染色过程的很多细节和步骤均可能影响到染色结果，提出了各环节步骤的主要注意事项，得出避免假阳性的操作技术。