ABO血型抗体吸附剂:冻干红细胞膜的初步研究

目的制备冰冻干燥红细胞膜,探索其作为ABO血型抗体吸附剂去除血型抗体、制备通用型红细胞的可行性。方法收集A、B型红细胞膜,作冰冻干燥处理,与O型血浆中血型抗体反应后,检测血浆中抗体效价,评价其对血浆抗体的吸附效果;检测红细胞结构、功能及血浆中凝血因子活性变化,评价冻干红细胞膜与红细胞及凝血因子的兼容性;采用离心的方法去除残留的冻干红细胞膜。结果冰冻干燥红细胞膜上的抗原可有效吸附血型抗体、降低血浆中的血型抗体效价,全血中红细胞的变形指数、ATP含量,与反应前比较差异无统计学意义(P>0.05),反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。采用离心法可去除冻干红细胞膜,清除率约为77%。结论冰冻干燥的红细胞膜保持了很好的抗原性,作为ABO血型抗体的吸附剂能够有效去除ABO血型抗体;冰冻干燥红细胞膜不影响其中红细胞和凝血因子的理化性状和生物活性,并可通过离心的方法去除。     

人红细胞冻干程序优化的实验研究

目的 探讨冻干程序中几种参数设置对红细胞冻干复水后回收率的影响.方法 将红细胞装入细管分别用四种模式对其进行降温,降温完成后将细管取投入25℃水浴中,对其外形变化进行比较判断玻璃化的程度;将冻好的样品放入冻干机搁板上,温度分别设置为-40、-50、-60、-70和-80℃,对样品进行冻干;对干燥开始不同温度、升温速率、红细胞样品在每一温度干燥的时间等多因素加以比较;最后测定了红细胞残余含水量.结果 直接将样品投入液氮中降温,保护液在冷冻或溶化过程中形成玻璃化而未出现冰晶.搁板温度为-70℃和-80℃时红细胞回收率没有显著性差异(P>0.05),这两组与其他各温度下的回收率均有显著性差异(P<0.01).E程序下的红细胞和血红蛋白回收率最高,分别为83.14%±9.55%和85.33%±11.42%.与其他各程序间存在显著差异(与A、B、C相比P<0.01;与D相比P<0.05).随着残余含水量的增多,细胞回收率呈正相关的增加趋势.结论 冻干中采用液氮快速降温,搁板温度预冷至-70℃,开始干燥时的温度越接近样品最初在搁板的平衡温度,红细胞升华干燥阶段升温速率越均匀缓和,红细胞的冻干效果越好.     

二甲基亚砜在人红细胞冻干前负载海藻糖过程中的作用

目的研究人红细胞冻干保存前负载海藻糖过程中二甲基亚砜(DMSO)的作用,优化红细胞负载缓冲液配方。方法实验组以浓缩红细胞25份(10ml/份)负载海藻糖,负载缓冲液中添加DMSO;对照组25份负载海藻糖,负载缓冲液中未添加DMSO。37℃条件下孵育8h后,分别检测两组红细胞胞内海藻糖负载量、胞外游离血红蛋白水平、ATP含量、红细胞变形性,并利用流式细胞术检测负载后红细胞膜的完整性。结果实验组与对照组红细胞的胞内海藻糖负载量分别为(57.033±4.883)mmol/L,(49.184±4.858)mmol/L(P<0.05);胞外游离血红蛋白浓度分别为(4.131±0.473)g/L,(5.410±0.501)g/L(P<0.05);ATP浓度分别为(3.874±0.426)μmol/g Hb,(3.358±0.306)μmol/g Hb(P<0.05);红细胞变形指数分别为0.330±0.0211,0.277±0.0232(P<0.01);红细胞胞膜PS表达率分别为(5.04±0.495)%,(8.69±0.862)%(P<0.01)。结论DMSO在红细胞负载海藻糖过程中可有效增加胞内海藻糖负载量,并显著改善负载缓冲液对红细胞胞膜的高渗损伤,更好地发挥海藻糖对红细胞的保护作用。     

术中自体血液回收对红细胞流变学的影响

目的通过检测术中自体回收血液的流变学指标,评价血液回收技术对红细胞流变学的影响。方法前瞻性自身对照研究,观察20例2018年1~12月于首都医科大学附属北京友谊医院择期行非停跳冠脉动脉旁路移植手术、拟使用术中自体血液回收机对术野血液进行回收的患者。采用椎板法对患者静脉血、术中自体回收血液和同期10份使用枸橼酸-磷酸-葡萄糖-腺苷保护液贮存10~15 d的悬浮红细胞进行聚集指数,变形指数和全血黏度检测。结果自体回收红细胞的聚集指数和变形指数分别为4. 37±0. 83和0. 84±0. 22,静脉血红细胞分别为4. 55±0. 83和1. 01±0. 25,两者相比较差异均无统计学意义(P=0. 413,0. 051);自体回收红细胞的切变率200/s、切变率30/s、切变率5/s和切变率1/s时的全血黏度分别为3. 40±0. 54 m Pa·s、4. 36±0. 84 m Pa·s、7. 12±1. 85 m Pa·s和15. 10±5. 15m Pa·s,静脉血红细胞分别为3. 15±0. 90 m Pa·s、4. 05±1. 18 m Pa·s、6. 67±2. 06 m Pa·s和14. 25±4. 80 m Pa·s,两者相比差异均无统计学意义(P=0. 234,0. 310,0. 428,0. 543)。贮存10~15 d的悬浮红细胞的聚集指数和变形指数分别为4. 55±1. 41和0. 91±0. 30,与静脉血红细胞相比差异无统计学意义(P=0. 892,0. 863);悬浮红细胞在切变率5/s和切变率1/s时全血黏度分别为6. 45±1. 29 m Pa·s和13. 79±3. 35 m Pa·s,与静脉血红细胞相比差异均无统计学意义(P=0. 103,0. 203);悬浮红细胞在切变率200/s、切变率30/s时的全血黏度分别为3. 08±0. 58 mPa·s和3. 91±1. 05 mPa·s,较静脉血降低,差异均有统计学意义(P=0. 020,0. 041)。结论术中自体回收红细胞保持了良好的抗聚集能力和变形能力,能为气体交换提供足够的交换面积并变形通过毛细血管为组织供氧。综合考虑回收红细胞同时具有良好的携氧、释氧能力以及流变学性质,在术中需要输注红细胞时应首选自体回收红细胞。     

通用O型全血的初步研究

目的探讨冰冻干燥红细胞膜的制备技术及通用O型去除血型抗体全血的可行性。方法将A型及B型红细胞膜经过冰冻干燥处理后,加入O型全血中,经反应后测定血浆中血型抗体效价,并检测红细胞结构及功能,检测血浆中凝血因子活性变化。结果经过冰冻干燥处理后,红细胞膜仍具有抗原性,可有效降低血浆中的血型抗体效价,而全血中红细胞的变形指数、ATP含量与反应前差异无显著性,反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较,差异无显著性。结论尽管红细胞膜在体内是否产生大量抗体及其清除过程等尚需进行动物实验确定,但使用冰冻干燥红细胞膜制备通用型血液过程简便易行,具有进一步的研究价值。     

人红细胞冻干保护剂配方及浓度的优化

本研究探讨不同红细胞冻干保护剂配方及浓度的变化对红细胞冻干-复水后回收率的影响。应用一系列不同浓度的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、海藻糖及不同渗透性保护剂组成的红细胞冻干保护剂保护冻干红细胞并检测冻干红细胞复冰后红细胞及血红蛋白的回收率．结果显示：荷载海藻糖的红细胞在添加不同浓度保护剂保护下各组的红细胞损失率差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01），其中以有PVP360的保护液组中的细胞损失最大（0．24％），含有PVP40且胞外海藻糖浓度为150mmol／L时，红细胞的损失最小（0．02％）．海藻糖浓度为150mmol／L与海藻糖浓度为50mmol／L的保护剂组之间存在统计学差异（P〈0．01）。冻干红细胞在添加不同PVP40浓度的冻干保护剂作用再水化后红细胞和血红蛋白回收率也不相同。15％PVP40＋150mmol／L海藻糖＋2％BSA在红细胞冻干中的保护效果最好，红细胞和血红蛋白回收率分别为（61．29±4．93）％，（62．49±5．91）％，与其它各组间存在显著差异（P〈0．01）。含有甘油的冻干保护液对红细胞冻干过程中的保护效果最好，红细胞和血红蛋白回收率分别为（65．97±4．52）％和（67．24±5．94）％，与其它渗透性保护剂组相比存在显著性差异（P〈0．01）。结论：红细胞冻干保护剂为0．8mol／L甘油＋15％PVP40＋150mmol／L海藻糖＋2％BSA是最佳保护剂浓度配方。     

冻干前人红细胞对海藻糖的负载影响因素研究

目的研究影响海藻糖负载多种因素,探讨人红细胞对负载海藻糖的影响因素及规律性。方法根据红细胞海藻糖的负载量衡量,利用硫酸-蒽酮法检测红细胞在不同胞外海藻糖浓度、不同孵育时间、不同孵育温度的条件下对海藻糖的摄取量,并检测红细胞溶血程度。结果红细胞内海藻糖在负载液中的浓度<1000 mmol/L、负载时间<9 h、负载温度<37℃条件下,海藻糖的摄取量呈正相关。在负载液中浓度为0、200、400、600、800、1000mmol/L时,红细胞内海藻糖浓度分别为0、10.03、14.5、41.7、55.3和71.6 mmol/L;在温度为37℃时红细胞在浓度为1 000 mmol/L负载液中分别孵育0、1、3、5、7、9 h,胞内海藻糖浓度分别为0、5.73、6.11、55.7、和61.2 mmol/L。对温度、时间和胞外海藻糖浓度的统计分析显示,温度对负载后胞内海藻糖浓度的影响最大(P<0.01)。结论37℃、采用新鲜红细胞在海藻糖浓度为800 mmol/L的负载缓冲液中孵育7 h能有效摄取海藻糖,使之达到对红细胞起到冻干保护作用的胞内海藻糖理论浓度。     

血栓弹力图及凝血试验用于心脏瓣膜术后检测的价值及两者相关性分析

目的:探讨血栓弹力图(TEG)及凝血试验在用于心脏瓣膜手术后检测的价值,分析TEG及凝血试验的相关性。方法:回顾分析100例2014年3月至2017年5月,在本院进行心脏瓣膜手术的成人患者,患者均于手术结束时进行了TEG检测和凝血试验、血常规检测PLT。分析患者TEG检测中各参数与凝血试验各指标之间的相关性,探讨二者对心脏瓣膜术后检测的价值。分析心脏瓣膜手术后患者的TEG检测中K值、R值(反应时间)、α角、MA(最大振幅)与凝血试验中的参数PT(凝血酶原时间)、INR(国际标准比值)、APTT(活化部分凝血时间)、TT(凝血酶时间)、FIB(纤维蛋白原)及PLT这些参数之间的相关性关系。结果:K值与PT、R值、 INR、APTT呈显著正相关;R值与K值、 INR、PT、APTT呈显著正相关;α角与PT、INR、APTT、K值、R值呈负相关,与MA显著正相关;MA与PLT显著正相关,与APTT显著负相关。结论:TEG指标和凝血试验对心脏瓣膜术后患者的的凝血功能监测都具有重要的作用,二者之间具有明显相关关系。心脏瓣膜置换术后患者应用TEG和凝血试验进行监测对指导临床输血具有积极意义,两者结合能够快速判断出血的原因,减少手术后的并发症和出血量,还能避免过度治疗、指导血液制品的合理使用。     

人红细胞冻干前负载海藻糖最佳化研究

为更好的实现海藻糖在红细胞冻干保存中的保护作用,关键是克服质膜对海藻糖的非渗透性,使胞质内海藻糖达到有效浓度。本研究的目的是通过对人红细胞负载海藻糖的规律性研究,筛选出海藻糖负载的最佳负载条件并评价海藻糖负载对红细胞各项理化指标的影响。在不同孵育温度(4、22和37℃)、孵育时间(0、2、4、6、8、10小时)、不同负载缓冲液浓度(0、200、400、600、800、1000mmol/L)条件下检测新鲜红细胞对海藻糖的成功负载量及红细胞各项理化指标;在固定负载条件下,对新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞海藻糖负载、游离血红蛋白(FHb)、血红蛋白(Hb)和红细胞平均体积(MCV)进行了比较。结果表明:红细胞对海藻糖的负载与孵育温度、时间及负载缓冲液海藻糖浓度密切相关。随着温度的升高、时间的延长和负载缓冲液海藻糖浓度的增加,红细胞对海藻糖的摄取量也随之增加。在海藻糖负载最佳条件下,新鲜红细胞和4℃保存72小时红细胞的胞内海藻糖浓度、FHb浓度分别为65.505±6.314mmol/L、66.2±5.002mmol/L和6.567±2.568g/L、16.168±3.922g/L。结论:红细胞负载海藻糖的最佳条件是采用新鲜红细胞,在37℃条件下、海藻糖浓度为800mmol/L的负载缓冲液中孵育8小时,这一条件可使胞内海藻糖达到有效浓度,并保持红细胞细胞理化性质稳定和膜完整性。     

自体回收血液红细胞2,3-DPG、G-6-PD、PS表达的变化研究

目的探讨血液回收对红细胞2,3-DPG和G-6-PD水平和磷脂酰丝氨酸（PS）表达的影响。方法选择心脏择期手术患者30例,使用费森尤斯盘式连续式血液回收机进行术中血液回收,与静脉血相比,比较红细胞2,3-DPG和G-6-PD水平和磷脂酰丝氨酸（PS）的表达变化。同时,将回收红细胞静置6h,比较上述指标的变化。结果与静脉血相比,放置0h的红细胞2,3-DPG与G-6-PD活性明显高于静脉血（P值均〈0.05）。流式细胞仪检测结果显示,两者红细胞膜PS表达的差异无统计学意义（P〉0.05）。放置6h的回收红细胞2,3-DPG活性明显低于静脉血（P〈0.01）,而G-6-PD活性与静脉血的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论与静脉血相比,术中回收红细胞具有较好的携氧和抗氧化能力。但放置6h后的回收红细胞携氧能力不如静脉血。建议放置6h的回收红细胞不要回输。