RUNX3 基因启动子甲基化与膀胱移行细胞癌发生的关系

目的 检测抑癌基因RUNX3 启动子区CpG 岛甲基化状态及其在 BTCC 中 mRNA 和蛋白表达水平.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation - specific PCR,MSP)技术检测 BTCC 中RUNX3 基因启动子区域甲基化状态,RT - PCR 和 Western blot 法分别检测其 mRNA 和蛋白表达水平.结果 RUNX3基因在正常膀胱组织中未发生甲基化,而在 BTCC 组织中甲基化频率占46.9%(15/32),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).在15例启动子异常甲基化的癌组织标本中,14 例同时伴有 RUNX3 基因表达缺失或下调,二者存在明显的相关性(r=0.6472,P=0.012).RUNX3 mRNA 和蛋白表达在正常膀胱组织和 BTCC 组织分别为93.8%(30/32)、34.4%(11/32),二组间表达差异有统计学意义(P相似文献   

非那雄胺和乙烯雌酚联合应用对减少经尿道前列腺切除术出血的临床观察

目的评价术前使用非那雄胺和乙烯雌酚对经尿道前列腺切除术（TURP）中出血的影响及作用机制。方法将拟行TuRP的良性前列腺增生患者分为两组，实验组76例术前口服非那雄胺，连续7—10d，5mg／次，2次／d，同时肌注乙烯雌酚2mg，1次／d，共7—10d；对照组48例采用空白对照。所有手术由同一组医师实施，逐一记录手术时间、术中切除前列腺组织重量及冲洗液量；计算术中出血总量、出血指数、出血强度。逆转录聚合酶链式反应测定实验组与对照组前列腺组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果实验组术中平均出血总量、平均出血指数、平均出血强度较对照组明显减少；VEGF阳性表达率，实验组明显低于对照组。结论术前联合应用非那雄胺和乙烯雌酚能有效减少TURP术中出血，其机制可能与抑制了增生前列腺组织中的血管生成有关。     

膀胱癌中Smad4、Ki-67、CyclinD1基因表达及临床意义

目的 检测Smad4、Ki-67、CyclinDl基因在膀胱癌中的表达并探讨其I临床意义.方法 采用RT-PCR技术检测32例膀胱移行细胞癌癌组织、癌旁组织及正常膀胱组织中Smad4、Ki-67、CyclinDl基因的表达,结合临床资料分析评价上述基因表达与膀胱癌临床生物学行为的关系.结果 Smad4、Ki-67、CyclinDl在膀胱癌组织阳性表达率分别为34.4%、53.1%、46.9%(P<0.05).Smad4的表达随膀胱癌病理分级、临床分期的升高而下降(P<0.05),而Ki-67的表达呈递增趋势(P<0.01).CyclinDl在正常组织中不表达,而在Gl期呈高表达,并且随膀胱癌病理分级、临床分期的增加呈递减趋势(P<0.01).Smad4与Ki-67的表达呈负相关(r=-0.673,P<0.05),Smad4与CyclinDl呈正相关(r=0.717,P<0.05),Ki-67与CyclinDl呈负相关(r=-0.515,P<0.05).结论 Ki-67、CyclinDl基因的表达异常及协同作用在膀胱癌的发生和发展过程中起重要作用.     

少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建

目的克隆少汗型外胚层发育不良症（HED）eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型（M）和野生型（W）的真核表达载体pcDNA3.1（-）-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点的引物, 从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA,利用RTPCR法克隆eda-A1（M/W）基因cDNA序列;并运用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pcDNA3.1（-）载体和eda-A1基因片段,将eda-A1 （M/W） 插入到pcDNA3.1 （-） 载体中,从而构建新的真核表达载体,命名为pcDNA3.1 （-）-eda-A1-M和pcDNA3.1（-）-eda-A1-W。结果成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因,并发现未见报道过的907位A→C错义突变,导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸;经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证,成功构建了pcDNA3.1（-）-eda-A1-W/M的真核表达载体。结论成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因（突变型和野生型）真核表达载体pcDNA3.1（-）-eda-A1-M/W,为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础。     

以尼龙膜为载体的基因芯片探针及样品合理浓度筛选

背景：目前多数芯片采用玻璃片基，以Cy3和Cy5标记，价格高，主要用于科研，但不能在临床上大规模推广应用。课题组采用尼龙膜为载体制作基因芯片，以期获得一种具有高灵敏度和准确性、快速简便、可同时检测多种疾病且成本低的芯片。 目的：对以尼龙膜为载体基因芯片的可行性进行检测，同时对所用探针及目的基因的量进行优化。设计、时间及地点：基因工程探针设计，于2005—10／2006-09在兰大科技园百源基因公司实验室完成。 材料：甘肃省肿瘤医院2005—10／2006-04切除的新鲜大肠癌标本，取距肿瘤边缘5～10cm以上的正常组织作为对照，病理证实无癌细胞浸润。尼龙膜带正电荷，购自Amersco公司。 方法：从液氮中取出冻存的新鲜组织200mg，采用Trizol法提取组织总RNA，并用Oligo dT纤维素层析法纯化mRNA。使用TaKaRa的M—MLV Rtase cDNA synthesis Kit（code D6130）反转录合成cDNA的第1，2链，产物分为两部分，一部分作为模板进行地高辛标记PCR，所得产物作为目的基因，另一部分作为制备探针的模板。对获得的GAPDH，Actin，CyclinD1三种基因片段PCR产物进行纯化。以带正电荷的尼龙膜为载体，将不同浓度的三种基因片段作为探针点于其上，所得芯片分别与不同浓度的地高辛标记目的基因进行杂交。 结果：目的基因取2．5μL，1．25μL时，加入杂交液后因目的基因的浓度太小，造成各点探针密度相对较高，而无法反映出正确的显色趋势。目的基因取5μL时，探针密度为10～20μL情况下3种探针显色深度较恰当的反映了由强到弱的趋势，ACTIN〉CyclinD1〉GAPDH。目的基因取10μL时，探针取15μL，20μL的量能较为合理的反映由强到弱的趋势。目的基因取20μL时，此时杂交液中目的基因的浓度对于ACTIN和CyclinD1过高，不能明显反映二者着色深浅变化。 结论：以尼龙膜为载体的基因芯片本底清晰，合理目的基因用量为5μL，与其相匹配的优化探针用量为10～20μL。     

RUNX3 基因启动子甲基化与膀胱移行细胞癌发生的关系

目的 检测抑癌基因RUNX3 启动子区CpG 岛甲基化状态及其在 BTCC 中 mRNA 和蛋白表达水平.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation - specific PCR,MSP)技术检测 BTCC 中RUNX3 基因启动子区域甲基化状态,RT - PCR 和 Western blot 法分别检测其 mRNA 和蛋白表达水平.结果 RUNX3基因在正常膀胱组织中未发生甲基化,而在 BTCC 组织中甲基化频率占46.9%(15/32),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).在15例启动子异常甲基化的癌组织标本中,14 例同时伴有 RUNX3 基因表达缺失或下调,二者存在明显的相关性(r=0.6472,P=0.012).RUNX3 mRNA 和蛋白表达在正常膀胱组织和 BTCC 组织分别为93.8%(30/32)、34.4%(11/32),二组间表达差异有统计学意义(P相似文献   

RUNX3 基因启动子甲基化与膀胱移行细胞癌发生的关系

目的 检测抑癌基因RUNX3 启动子区CpG 岛甲基化状态及其在 BTCC 中 mRNA 和蛋白表达水平.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation - specific PCR,MSP)技术检测 BTCC 中RUNX3 基因启动子区域甲基化状态,RT - PCR 和 Western blot 法分别检测其 mRNA 和蛋白表达水平.结果 RUNX3基因在正常膀胱组织中未发生甲基化,而在 BTCC 组织中甲基化频率占46.9%(15/32),并且随着肿瘤分级、分期的增加,其甲基化水平逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01).在15例启动子异常甲基化的癌组织标本中,14 例同时伴有 RUNX3 基因表达缺失或下调,二者存在明显的相关性(r=0.6472,P=0.012).RUNX3 mRNA 和蛋白表达在正常膀胱组织和 BTCC 组织分别为93.8%(30/32)、34.4%(11/32),二组间表达差异有统计学意义(P相似文献   

膀胱癌患者尿脱落细胞抑制消减文库的构建及差异基因的初步筛选

目的 应用抑制性消减杂交方法 筛选膀胱移行细胞癌患者与正常人尿脱落细胞差异表达基因.方法 分离膀胱移行细胞癌患者与正常人尿液中总mRNA,用SMART技术反转录成cDNA,经过酶切、接头连接、两轮消减杂交及两轮抑制性PCR,使得差异表达的DNA片段得以富集.PCR产物与T/A载体连接并转化大肠杆菌XL-blue构建差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后随机挑取克隆进行酶切、测序及同源性分析.结果 PCR鉴定有317个克隆载有主要在200～900bp之间呈随机分布的插入片段,片段插入率达93.2%,证实建库成功.对20个质粒测序结果 经同源性比对分析,其中20个片段源于17个已知基因,1个克隆在GenBank中未检索到与其有相似性的基因序列,表明它们可能为BTCC差异表达的新基因.结论 该消减杂交文库质量町靠,它的成功构建为进一步筛选、克隆膀胱肿瘤差异表达基因提供了依据.也为膀胱肿瘤诊断基因芯片的研究与开发奠定了基础.     

尿nephrin与肌酐比率和RBP-4在2型糖尿病肾病诊断中的意义

目的:探讨尿nephrin与肌酐比率(UNCR)和视黄醇结合蛋白4(RBP-4)在2型糖尿病肾病诊断中的意义。方法:选取2型糖尿病患者110例,正常健康对照组40例。采用定量酶联免疫吸附法(ELISA)测定2组患者尿白蛋白、肌酐、nephrin和RBP-4的含量,依据尿白蛋白与肌酐比率(UACR)将糖尿病患者分为正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组,进行UNCR与RBP-4相关性分析。结果:正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组UNCR比较差异具有统计学意义(P0.05);正常白蛋白尿组UNCR阳性率为51.7%,而微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组UNCR阳性率均大于95%,UNCR与RBP-4呈正相关。正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组RBP-4含量比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:UNCR和RBP-4在糖尿病早期诊断和预测糖尿病肾病病情进展中有重要的指示作用。     

甘草及黄芪浸出液对致龋菌的体外菌抑作用

目的:体外研究甘草、黄芪浸出液对口腔常见致龋菌的抑制效果,并与国外致龋菌抑菌产品(M I)进行比较。方法:选用陇产甘草、黄芪为原料,以变形链球菌、乳酸杆菌为实验菌株,利用其选择性培养基进行液体培养,在培养基中添加不等量的药物,测培养24hrs后菌液的OD值、PH值,用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果:甘草、黄芪浸出液分别对变形链球菌、乳酸杆菌的生长、产酸均有抑制效果,与国外同类抑菌产品相比无显著性差异。结论:甘草、黄芪浸出液对口腔主要致龋菌有抑制作用。