不同细胞来源外泌体对肿瘤微环境的重塑作用

囊泡转运是细胞间沟通的重要方式。随着蛋白质组学、代谢组学、RNA组学等多组学联合研究的发展和进步,研究人员发现外泌体是细胞间通讯的重要信号转导媒介和介质。外泌体携带大量生物活性分子,对细胞生物学功能的发挥具有重要的调控作用,影响肿瘤细胞的特性。越来越多的证据表明,外泌体的功能与其来源的细胞及其内含物成分密切相关。肿瘤来源外泌体以自分泌和旁分泌的方式诱导癌细胞和基质细胞生理功能和代谢状态的改变,基质细胞来源外泌体参与建立、支持和营养肿瘤细胞的肿瘤微环境,并且不同免疫细胞来源外泌体可能呈现截然相反的功能。本文就不同细胞来源外泌体在肿瘤微环境中的作用和机制进行综述,为外泌体在肿瘤诊断、治疗及预后评估中的应用提供参考。     

LIN28A、 E-cadherin和 vimentin在浸润性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究RNA结合蛋白LIN28A、上皮间质转化相关因子E-cadherin和vimentin在浸润性乳腺癌中的表达及三者的相关性,探讨其对乳腺癌进展的影响。方法：收集40例浸润性乳腺癌组织标本及其对应的癌旁组织,实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组织化学法分别检测LIN28A、E-cadherin和vimentin的mRNA和蛋白的表达,分析其与临床病理指标之间的关系,TUNNEL法检测LIN28A阳性癌组织中的细胞凋亡情况,统计分析LIN28A和EMT相关蛋白之间的相关性及其与乳腺癌患者生存率之间的关系。结果：qPCR结果显示,LIN28A mRNA在乳腺癌组织中的相对表达水平高于癌旁组织,其与E-cadherin mRNA的表达水平呈负相关,与vimentin mRNA呈正相关（r依次=-0.340和0.380,P均 < 0.05）。免疫组织化学检测结果显示,在乳腺癌组织中,LIN28A、E-cadherin和vimentin蛋白表达率分别为60%、55%和65%。LIN28A蛋白的表达与E-cadherin蛋白呈负相关（r依次=-0.533和0.364,P均 < 0.05）,与vimentin蛋白呈正相关。LIN28A蛋白表达与肿瘤大小、病理分级和淋巴结转移有关。TUNEL检测结果显示,LIN28A蛋白表达阳性的乳腺癌组织中凋亡细胞率低于与癌旁组织（P < 0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示,乳腺癌组织LIN28A蛋白表达阳性患者的生存率低于LIN28A蛋白表达阴性者（P < 0.05）。结论：RNA结合蛋白LIN28A可能通过EMT促进乳腺癌的进展和转移,并且LIN28A高表达可能影响乳腺癌患者的预后。     

胃癌中DNA甲基化对miR-200c 141表达影响的研究

  目的  探讨胃癌组织中miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141表达水平和临床病理特征的相关性。  方法  运用实时定量PCR（qRT-PCR）和BS-MSP方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-200c/141CpG岛的表达与其基因甲基化水平。统计学分析miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141水平和临床病理特征的关系。  结果  miR-200c/141CpG岛的甲基化水平在胃癌组织中显著升高,miR-200c和miR-141的水平显著降低,miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c和miR-141的水平呈负相关。  结论  胃癌组织中升高的miR-200c/141CpG岛的甲基化水平诱导miR-200c和miR-141表达降低。      

miR-141-3p在胃癌组织和患者血浆中的表达及其临床意义

目的:检测miR-141-3p在胃癌组织及患者血浆中的表达水平,探讨其表达水平与患者病理特征和预后的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月胃癌根治性手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本44例,每例标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织.采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康志愿者血浆(25例)的表达情况,分析miR-141-3p的表达水平与胃癌患者DFS及临床病理特征的关系.结果:miR-141-3p在胃癌组织中的表达明显降低,在血浆中的表达水平明显升高(均P＜0.01).在胃癌组织中miR-141-3p高表达组DFS明显高于低表达组(21.8 vs 10.3个月,P＜0.01),且miR-141-3p在癌组织中的表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).在血浆中miR-141-3p的高表达组DFS明显低于低表达组(9.1 vs 21.0个月,P＜0.01),且miR-141-3p血浆中的表达水平与患者DFS呈负相关(P＜0.01).miR-141-3p在胃癌患者血浆中表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及脉管瘤栓相关(P＜0.01).结论:miR-141-3p在胃癌组织中表达显著降低且与患者预后呈正相关,其在患者血浆中表达显著升高且与患者预后呈负相关,表明miR-141-3p可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物.     

香加皮宝霍甙-Ⅰ抑制人食管癌细胞增殖的机制

目的观察香加皮活性成分宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞增殖活性及凋亡的影响,并探讨其与β-catenin通路的关系。方法采用MTT法观察宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞Eca-109增殖活性的影响;Annexin V/PI染色检测宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞凋亡的影响。RT-PCR法检测宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞β-catenin、survivin 和c-myc mRNA表达的影响,Western blot和激光共聚焦显微镜检测食管癌细胞β-catenin、磷酸化β-catenin、survivin和c-myc蛋白表达的变化。结果10~40μg/ml宝藿甙-Ⅰ明显降低了Eca-109细胞的增殖活性并诱导其凋亡。经宝藿甙-Ⅰ处理24 h后,β-catenin、survivin 和c-myc mRNA和蛋白表达水平均降低,磷酸化的β-catenin蛋白表达升高,β-catenin在细胞核和细胞质中的表达均降低,且在胞核中的降低更为明显。结论香加皮宝藿甙-Ⅰ可通过调节β-catenin通路活性抑制食管癌Eca-109细胞增殖。     

五味子提取物对辐射所致小鼠淋巴细胞减少的预防效果及其机制

目的：研究中药五味子（Schisandra Chinensis,SC）提取物对辐射所致小鼠外周血淋巴细胞减少的预防效果及其机制。方法：将48只BALB/c小鼠随机分为4组,分别为SC预防组（SC+ray）、NS对照组（NS+ray）、SC对照组（SC）和正常对照组（NS）。一次性6 Gy γ射线照射,照射后进行小鼠外周血白细胞和淋巴细胞计数,细胞免疫荧光检测外周血Ｔ淋巴细胞亚群,Gimsa染色观察小鼠胸腺细胞形态,流式细胞术检测胸腺细胞凋亡率,RTPCR法检测胸腺组织中Bcl2和Fas 基因mRNA的表达。结果：NS对照组小鼠照射后外周血白细胞总数和淋巴细胞数量及亚群均明显下降(P<0.0),SC预防组较NS对照组白细胞总数和淋巴细胞数量均明显升高(P<0.01);SC预防组小鼠外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞百分率较NS对照组小鼠明显升高（P<0.01）。NS对照组小鼠照射后胸腺细胞数目减少,并可见多处片状细胞凋亡和坏死;SC预防治疗组较NS对照组胸腺细胞凋亡率明显降低\[(21.32±2.56)% vs (2.87±1.03)%,P<0.01\];RTPCR结果表明,照射后小鼠胸腺细胞Bcl2表达明显降低,Fas表达明显升高(均P<0.01),而SC预防组较NS对照组Bcl2表达明显升高,Fas表达明显降低(均P<0.05)。结论：SC通过升高Bcl2表达、降低Fas表达调控胸腺细胞凋亡,从而有效预防辐射所致小鼠外周血淋巴细胞的减少。     

淫羊藿苷(ICA)对化疗后免疫抑制小鼠的免疫促进作用

目的:通过观察淫羊藿苷(ICA)对化疗药环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,探讨ICA促进免疫功能的作用及机理.方法:除正常组小鼠外,所有小鼠经腹腔注射Cy(300 mg/kg);第二天开始给予实验组小鼠灌胃不同剂量的ICA[150、80、40 mg/(kg·d)],阳性对照组小鼠尾静脉注射参芪扶正注射液(1 ml/d),模型组给予等量生理盐水,连续干预10天.所有小鼠均于末次给药12小时后处死,计算胸腺指数(TI)和脾指数(SI),光镜下计数外周血和脾淋巴细胞数量.MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应.ELISA法检测TNF-α的含量.乳酸脱氢酶实验(LDH)检测小鼠脾脏NK和CTL细胞的活性.流式细胞术(FACS)检测脾淋巴细胞中NKT和CD3+T细胞的比例.结果:模型组小鼠以上各项免疫指标均有所下降.ICA处理组小鼠脾脏指数和胸腺指数均升高(P<0.01),脾淋巴细胞数量显著增加(P<0.01),但未达到正常对照组水平;ICA明显提高小鼠脾淋巴细胞的增殖反应,促进了小鼠脾NK和CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性(P<0.01),提高了小鼠脾细胞TNF-α的产生(P<0.01).ICA处理组小鼠脾细胞中CD3+T、NKT细胞比例明显增加(P<0.01).结论:ICA能促进小鼠免疫功能,具有逆转化疗后小鼠免疫抑制状态的作用.     

连翘提取物体外抗肿瘤活性的初步研究

目的:观察连翘根、叶和果3个部位各自的醇提物和水提物对食管癌细胞体外增殖和凋亡的影响,探讨连翘根醇提物(ethanol extract of Forsythia suspensa root,FSEER)的抗肿瘤机制。方法:分别制备连翘根、叶和果3个部位的醇提物和水提物,用MTT法检测6种连翘提取物对食管癌细胞TE-1、TE-13、Yes-2、Eca-109的增殖抑制作用;然后用不同浓度FSEER处理食管癌细胞24 h后用倒置相差显微镜和瑞氏-吉姆萨染色观察细胞的形态学变化,再分别用不同浓度FSEER处理TE-13细胞不同时间后,以Annexin V/PI双染法通过流式细胞仪检测TE-13细胞凋亡率的变化,Western blot检测PARP蛋白表达变化。结果:6种连翘提取物对食管癌TE-13细胞均有增殖抑制作用(P0.05),其中FSEER效果最明显。经FSEER处理后,TE-13细胞显示典型的凋亡形态变化,与对照组相比凋亡率明显增高(P0.05),PARP蛋白出现了裂解片段的表达,且呈现一定的剂量和时间依赖性。结论:FSEER体外对人食管癌细胞的增殖有明显的抑制作用,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

下调IL-8 表达抑制食管鳞状细胞癌KYSE170 细胞的迁移能力及其相关机制

目的：研究白介素8（IL-8）对食管鳞癌细胞株KYSE170 迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法：体外合成针对IL-8 的siRNA,采用脂质体法转染KYSE170 细胞,利用Real-time PCR和Wsetern blotting 及ELISA 法检测沉默效率,镜下观察细胞形态学改变,划痕实验检测细胞迁移能力,CCK-8 实验检测细胞增殖能力的变化。Wsetern blotting 检测IL-8 受体及JAK2-STAT3 信号通路相关蛋白的表达。结果：与阴性对照组比较,靶向沉默IL-8 处理后的KYSE170 细胞,其IL-8 基因和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,IL-8 分泌量显著减少（P<0.01）;IL-8 基因沉默后,KYSE170 细胞迁移能力明显减弱（P<0.01）,而细胞增殖能力无明显变化。IL-8 受体2 即CXCR2、转移相关蛋白WASF3 的表达水平明显降低（P<0.05）,而IL-8 受体1 即CXCR1的表达水平没有明显变化;JAK2-STAT3 信号通路关键蛋白p-JAK2 和p-STAT3 表达明显降低（均P<0.01）。结论：下调IL-8 的表达可以抑制食管癌细胞株KYSE170的迁移能力,其机制可能通过介导CXCR2 及其下游JAK2-STAT3信号通路活性的改变相关。     

WEE1 G2检查点激酶对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究WEE1 G2检查点激酶(WEE1)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖、迁移以及侵袭的影响及失调机制。方法取RL95-2细胞系培养,并分别转染WEE1小干扰RNA(si-WEE1组)、NEAT1小干扰RNA(si-NEAT1组)、WEE1过表达质粒(pc-WEE1组)、NEAT1过表达质粒(pc-NEAT1组)、miR-139-5p模拟物(miR-139-5p mimic组)、miR-139-5p抑制剂(miR-139-5p inhibitor组),并设立相应对照组(si-NC、pc-NC以及NC mimic)。以实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测子宫内膜癌组织和细胞中WEE1 mRNA表达水平,以CCK-8实验检测细胞增殖,以Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,以Western blot检测WEE1表达。结果子宫内膜癌患者癌组织和对应癌旁组织中WEE1的表达量分别为1.19±0.21和1.01±0.20;EC细胞系(RL95-2)和人正常子宫内膜细胞(h EEC)中WEE1的表达量分别为1.95±0.15和1.00±0.10;si-NC组和si-WEE1组48 h时细胞光密度值分别为0.68±0.05和0.50±0.02;72 h时为1.12±0.09和0.75±0.05;细胞侵袭数目分别为109.33±8.06和67.67±5.25。癌组织与癌旁组织相比,EC细胞系与人正常子宫内膜细胞系相比,si-WEE1组与si-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在子宫内膜癌中,NEAT1通过miR-139-5p/WEE1促进EC恶性进展,这可能成为子宫内膜癌的诊断性生物标志物和治疗靶点。