连翘叶乙醇提取物对人食管癌细胞增殖抑制作用的研究

 目的
研究中药连翘叶乙醇提取物体外对食管癌细胞增殖的影响及对TE-13细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法应用MTT法分析不同浓度连翘叶乙醇提取物(ethanol extract of Forsythia suspense leaf,FSEE）对人食管癌细胞TE-13、TE-1、Yes-2和 Eca-109增殖的影响;光学显微镜下观察经FSEE处理后细胞的形态学改变; Wright-Giemsa染色观察TE-13细胞凋亡的形态学变化;经Annexin V/PI双染后用流式细胞术检测 FSEE对TE-13细胞凋亡率的影响;用不同浓度(0.1、0.2、0.5mg/ml）FSEE作用于TE-13细胞24 h后,分析细胞PARP、Caspase 3、 Caspase 8、Caspase 9蛋白表达的变化。RT-PCR法检测FSEE对TE-13细胞凋亡相关基因Bcl-2家族中Bcl-2、Bcl-xL、Bax mRNA表达的影响。结果FSEE对人食管癌细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);经FSEE处理24 h后,TE-13细胞出现明显的凋亡形态学改变,TE-13细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较差异有统计学意义(P<0.01）;经0.1、0.2、0.5 mg/ml FSEE作用24 h后,TE-13细胞PARP、Caspase 3、Caspase 9蛋白出现裂解片段,并随药物浓度增加,裂解片段浓度升高,呈浓度依赖性,组间比较差异有统计学意义(P<0.01）。 经FSEE处理后,TE-13 细胞Bax mRNA表达上调, Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达水平下调。结论FSEE在体外可明显抑制食管癌细胞的增殖,诱导TE-13细胞凋亡,其机制可能与其通过Caspase依赖性的内源途径诱导细胞凋亡有关。     

幽门螺杆菌对神经和免疫系统疾病影响的研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori) 感染导致多种胃部疾病的发生,如胃炎、消化性溃疡和胃腺癌等。近年来,随着研究的不断深入,研究者发现,H.pylori还可以影响胃外疾病（包括血液系统、心血管系统、皮肤系统、神经及免疫系统等）的发生、发展,对神经和免疫系统疾病的影响尤为突出。研究发现H.pylori可能是神经退行性疾病的重要影响因素,同时其与免疫系统长期相互作用,影响了局部免疫微环境进而打破全身免疫系统的平衡,导致免疫相关疾病的发生。本文就H.pylori对神经及免疫系统疾病的影响和机制最新研究进行综述,为本研究领域的进一步发展提供参考。     

不同细胞来源外泌体对肿瘤微环境的重塑作用

囊泡转运是细胞间沟通的重要方式。随着蛋白质组学、代谢组学、RNA组学等多组学联合研究的发展和进步,研究人员发现外泌体是细胞间通讯的重要信号转导媒介和介质。外泌体携带大量生物活性分子,对细胞生物学功能的发挥具有重要的调控作用,影响肿瘤细胞的特性。越来越多的证据表明,外泌体的功能与其来源的细胞及其内含物成分密切相关。肿瘤来源外泌体以自分泌和旁分泌的方式诱导癌细胞和基质细胞生理功能和代谢状态的改变,基质细胞来源外泌体参与建立、支持和营养肿瘤细胞的肿瘤微环境,并且不同免疫细胞来源外泌体可能呈现截然相反的功能。本文就不同细胞来源外泌体在肿瘤微环境中的作用和机制进行综述,为外泌体在肿瘤诊断、治疗及预后评估中的应用提供参考。     

骨髓MSCs对GVHD模型大鼠的免疫调节作用

目的探讨骨髓源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)模型大鼠的免疫调节作用。方法从SD大鼠骨髓中分离培养MSCs。通过给放射线照射过的Wistar大鼠进行干细胞和单个核细胞(mononuclear cell,MNC)共同移植,建立大鼠GVHD模型,对其进行异基因骨髓移植的同时,共输注不同数量的供者源性的MSCs,观察受鼠的一般表现、生存期及病理损伤的变化;利用细胞免疫化学检测各实验组大鼠外周血MNC中Foxp3+细胞比例的变化,应用ELISA方法检测实验各组大鼠外周血血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的变化,诱导各组受鼠脾脏MNC为CTL,并用MTT法检测各组受鼠CTL的杀伤活性。结果异基因骨髓移植时,共输注供鼠MSCs能够明显降低GVHD的发生率,并减轻其病理损伤,延长生存时间;共输注MSCs受鼠血清中IFN-γ水平明显减低而IL-4水平明显增加(P<0.05),与GVHD组大鼠相比,共输注MSCs的各组大鼠外周血中Foxp3+细胞比例明显增加(P<0.05),而CTL杀伤活性明显减弱。结论 MSCs能够通过免疫调节作用抑制GVHD的发生,降低其严重程度,并延长受鼠生存时间。     

中药升陷汤抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭转移作用研究

目的:本研究旨在体外筛选出升陷汤抑制人肺癌A549细胞侵袭转移的有效萃取部位,并对其分子机制进行探讨。方法:通过MTT法和形态观察筛选出升陷汤抑制A549细胞增殖的有效萃取部位。Annexin V/PI双染法检测升陷汤正丁醇提取物对A549细胞的凋亡诱导作用。划痕实验和Transwell小室检测生陷汤提取物对A549细胞侵袭、转移的影响;Western blot检测侵袭转移相关信号通路分子表达的变化。结果:20-400μg/mL正丁醇萃取部位作用于A549细胞48、72h后可明显抑制其增长,且与凋亡相关。20-80μg/mL升陷汤作用于A549细胞24h后可明显抑制其侵袭和转移;正丁醇萃取部位可明显降低p-ERK和基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达(P<0.01)。结论:升陷汤正丁醇萃取部位能显著抑制A549细胞的增殖和侵袭转移。     

痰热清注射液缓解Lewis肺癌模型小鼠化疗后的免疫抑制

目的：研究痰热清注射液对Lewis肺癌化疗模型小鼠免疫抑制作用的影响,以探讨其对荷肺癌小鼠的免疫调节作用。方法：构建C57 BL /6小鼠Lewis肺癌模型, 40只模型小鼠随机分为模型对照组、痰热清组、化疗组、痰热清联合化疗组及正常对照组,每组8只。治疗后摘小鼠眼球取血,取脾脏、外周血和胸腺,并分离腹腔巨噬细胞（Mφ）,检测各组小鼠胸腺指数及外周血淋巴细胞数量,MTT法检测各组小鼠脾T、B淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测胸腺细胞的凋率和外周血内CD3+、CD3-NK1.1+细胞及CD3+NK1.1+细胞比例,RT-PCR检测胸腺组织 Bcl-2和Fas mRNA表达水平,乳酸脱氢酶（LDH）释放法和ELISA法检测Mφ的杀伤活性及及其分泌IL-12能力,免疫透射比浊法检测小鼠外周血清中IgG及补体C3的含量。结果：痰热清联合化疗组小鼠的胸腺指数、外周血淋巴细胞计数及T、B细胞增殖活性均明显高于单独化疗组（ P <0.01）,同时胸腺细胞的凋亡水平明显低于单独化疗组（ P <0.01）。痰热清联合化疗组小鼠外周血CD3+T细胞、CD3-NK11+细胞及CD3+NK1.1+细胞比例均明显高于化疗组 ( P <0.01)。与化疗组相比,痰热清联合化疗组小鼠胸腺组织 Bcl-2 mRNA 水平明显增高,而 Fas mRNA水平明显减低(均 P <0.01)。痰热清组小鼠Mφ杀伤活性及分泌IL-12水平均明显高于化疗组(均 P <0.01) ,同时外周血IgG及补体C3含量明显高于化疗组(均 P <0.01)。结论：痰热清注射液对肺癌化疗小鼠的免疫系统有明显保护作用,其对抗肿瘤免疫力有明显的促进作用。     

木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤B16细胞的分化及其机制

探讨从中药木鳖子中提取的单体化合物对羟基桂皮醛（p-hydroxylcinnamaldehyde,PHD）对小鼠黑素瘤B16细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法: 以10、20、40 μmol/L PHD作用B16细胞,设空白对照及福司克林（Forskelin）阳性对照组。磺酰罗丹明（suphrhodamineB,SRB）法检测PHD对B16细胞生长的抑制率,平板克隆集落形成实验检测细胞的克隆形成能力,Giemsa 染色观察细胞形态,比色法检测细胞中黑色素含量和酪氨酸酶（tyrosinase,Tyr）活性,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,Western blotting检测Tyr、酪氨酸酶相关蛋白1（tyrosinase protein,Trp1）及MAPK信号转导通路中p-P38、p-JNK和p-ERK1/2的表达。结果：PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的增殖抑制作用,10、20、40 μmol/L PHD作用B16细胞48 h后,其增殖抑制率与对照组相比明显增加[（12.78±0.87）%、（37.70±2.28）%、（42.17±4.18）% vs 0,P<0.05],20、40 μmol/L PHD组增殖抑制率与Forskelin组相比明显增加[（37.70±2.28）%、（42.17±4.18）% vs（22.00±1.13）%,P<005]。40 μmol/L PHD处理B16细胞24、48、72 h后,B16细胞呈典型分化形态,黑色素含量及Tyr活性与对照组相比均明显增加[（0097±002）、（0.13±0.04）、（0.15±0.05）vs（0.085±0.003）;（1.11±0.31）、（1.43±0.05）、（1.67±0.49）vs (0.64±010）,P<005];细胞集落形成能力和迁移能力都明显降低（均P<0.05）。与空白对照组相比,PHD处理组细胞Tyr和Trp1的表达明显增加（P<0.05）,MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的表达水平也明显增加（P<0.05）,而p-ERK活性差异则无统计学意义（P>0.05）。结论：PHD通过上调MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的活性而对小鼠黑素瘤B16细胞产生明显的增殖抑制,并在形态和功能上诱导黑素瘤细胞的分化。     

中药木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛对小鼠的毒性

目的：检测中药木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛（CMSP）的毒性,为其应用于临床肿瘤治疗提供毒理学依据。方法：60只昆明小鼠（4~6周龄,雌雄各半）分为空白对照组,CMSP 200 mg/kg和400 mg/kg染毒组,每组20只,采用腹腔注射的方式染毒,每周3次,每次100 μL,连续28 d。观察各组小鼠一般状态,28 d后,处死小鼠,摘眼球取血,采用全自动血细胞分析仪及全自动生化分析仪检测小鼠血常规、肝肾功能和心肌酶谱等生化指标,并计数雄性小鼠精子畸形率,同时采用HE染色观察各组小鼠重要脏器组织的病理改变。观察骨髓细胞微核形成率。结果：观察期内无小鼠死亡,各组小鼠血常规指标、雄性小鼠精子畸形率与对照组相比,差异均无统计学意义（P > 0.05）,高剂量CMSP组小鼠外周血ALT和AST较对照组高（P < 0.05）,肾功能及心肌酶谱无明显差异（P > 0.05）。HE染色结果显示各组小鼠内脏组织均未观察到肉眼可见的病理改变。小鼠骨髓细胞微核形成率亦无明显变化（P > 0.05）。结论：在本研究中,我们发现CMSP具有相对较小的毒性作用,因此可考虑应用于肿瘤临床治疗中,但在后续研究中需充分关注其可能具有的肝功能损伤作用。     

胃癌中DNA甲基化对miR-200c 141表达影响的研究

  目的  探讨胃癌组织中miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141表达水平和临床病理特征的相关性。  方法  运用实时定量PCR（qRT-PCR）和BS-MSP方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-200c/141CpG岛的表达与其基因甲基化水平。统计学分析miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141水平和临床病理特征的关系。  结果  miR-200c/141CpG岛的甲基化水平在胃癌组织中显著升高,miR-200c和miR-141的水平显著降低,miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c和miR-141的水平呈负相关。  结论  胃癌组织中升高的miR-200c/141CpG岛的甲基化水平诱导miR-200c和miR-141表达降低。      

香加皮宝霍甙-Ⅰ抑制人食管癌细胞增殖的机制

目的观察香加皮活性成分宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞增殖活性及凋亡的影响,并探讨其与β-catenin通路的关系。方法采用MTT法观察宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞Eca-109增殖活性的影响;Annexin V/PI染色检测宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞凋亡的影响。RT-PCR法检测宝藿甙-Ⅰ对食管癌细胞β-catenin、survivin 和c-myc mRNA表达的影响,Western blot和激光共聚焦显微镜检测食管癌细胞β-catenin、磷酸化β-catenin、survivin和c-myc蛋白表达的变化。结果10~40μg/ml宝藿甙-Ⅰ明显降低了Eca-109细胞的增殖活性并诱导其凋亡。经宝藿甙-Ⅰ处理24 h后,β-catenin、survivin 和c-myc mRNA和蛋白表达水平均降低,磷酸化的β-catenin蛋白表达升高,β-catenin在细胞核和细胞质中的表达均降低,且在胞核中的降低更为明显。结论香加皮宝藿甙-Ⅰ可通过调节β-catenin通路活性抑制食管癌Eca-109细胞增殖。