塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞增殖及侵袭功能的影响

目的：研究塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞增殖、化疗敏感性及侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法：分别用不同浓度（0、20、40及80μmol/L）塞来昔布处理T细胞淋巴瘤Jurkat和Hut78细胞系24、48和72 h后,采用MTT法检测Jurkat和Hut78细胞的增殖活性。再用40μmol/L塞来昔布处理Jurkat和Hut78细胞48 h后,采用MTT法检测其对化疗药物敏感性的影响;流式细胞术检测塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞凋亡水平的影响;Transwell小室检测塞来昔布致Jurkat和Hut78细胞侵袭能力的变化;实时荧光定量PCR （qPCR）及Western blot技术分别从mRNA及蛋白水平检测塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞系P38、P65、Bcl-2、Bax、MDR1、MMP2及MMP9表达水平的影响。结果：与对照组比较,20～80μmol/L塞来昔布作用于Jurkat和Hut78细胞不同时间后,细胞增殖活性均受到明显抑制（P<0.05）。40μmol/L塞来昔布对化疗药物的敏感性明显增强（P<0.05）,且凋亡水平明显增加（P<0.01）;与40μmol/L塞来昔布共培养的Jurkat和Hut78细胞,其穿透Transwell小室的能力明显下降（P<0.01）,且P38及Bax蛋白的表达水平均明显增加（P均<0.01）,而P65、MDR1、Bcl-2、MMP2及MMP9表达水平均明显降低（P均<0.01）。结论：塞来昔布对T表型淋巴瘤细胞增殖和侵袭能力具有明显抑制作用,提示其在T细胞淋巴瘤的临床治疗中具有应用前景。     

木鳖子醇提物抑制小鼠黑素瘤B16细胞体内外侵袭转移的实验研究

目的:观察木鳖子醇提物(ethanol extract from cochinchina momordica seed,CMSEE)对小鼠黑素瘤细胞B16及其荷瘤小鼠移植瘤侵袭转移的影响,初步探讨其作用机制.方法:通过划痕实验和体外迁移实验检测不同质量浓度CMSEE(20、25、30μg/mL)作用24和48 h后,B16细胞侵袭和转移能力的改变;分别用RT-PCR和Western印迹法检测不同质量浓度CMSEE(20、25、30μg/mL)作用24 h以及25μg/mL CMSEE作用不同时间(0、6、12、24、36、48 h)对B16细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9 mRNA及其蛋白以及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、TIMP-2蛋白表达的影响.以B16细胞建立小鼠荷瘤模型,用10 mg/kg CMSEE灌胃治疗荷瘤小鼠,HE染色观察各组小鼠的肿瘤、肝、脾组织的病理变化.结果:CMSEE(20～30 μg/mL)可明显抑制B16细胞的侵袭和转移能力,可使B16细胞划痕的直径明显变宽(P＜0.05),穿过Transwell小室膜的细胞数显著减少(P＜0.05),并呈浓度依赖性;CMSEE(20～30μg/mL)可明显下调B16细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表达(P＜0.05),并有浓度依赖性;而CMSEE对B16细胞中TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达无明显影响(P＞0.05).CMSEE可有效抑制小鼠体内黑素瘤的侵袭和转移.结论:CMSEE在体内外均能明显抑制小鼠B16细胞的侵袭和转移能力,其作用机制可能与其抑制MMP-2和MMP-9的表达有关.     

木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛对食管癌移植瘤的抑制作用

目的：探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛（p-hydroxylcinnamaldehyde,CMSP）对食管癌细胞增殖及在BALB/c裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法： 细胞计数法检测CMSP对食管癌细胞株Kyse 30和TE-13增殖的抑制作用,RT-PCR法检测食管癌细胞中CEA和SCC mRNA的表达情况,Western blotting法检测食管癌细胞中C-myc和N-myc蛋白的表达变化。构建裸鼠食管癌细胞移植瘤模型,分为对照组和CMSP处理组,实验结束后测量移植瘤大小及体积;免疫组织化学SP法观察移植瘤组织C-myc和N-myc蛋白的表达变化,H-E染色后光镜下观察两组裸鼠移植瘤组织和肝、脾组织的病理学变化。结果：CMSP对食管癌细胞Kyse 30和TE-13的增殖具有明显的抑制作用\[（1.7±0.3) vs (3.8±0.3),(1.6±0.2) vs (4.5±0.4),均P<001\]。经CMSP处理后：（1）Kyse 30和TE-13细胞中CEA和SCC mRNA表达降低（P<0.01)、C-myc和N-myc蛋白表达明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）;（2）裸鼠移植瘤平均体积和质量明显降低（P<0.05或P<0.01）,移植瘤组织中C-myc和N-myc蛋白表达水平低于盐水对照组肿瘤组织。CMSP处理组和对照组中肝、脾组织并未发生任何病理改变。结论：木鳖子单体化合物CMSP体外抑制食管癌细胞增殖,体内抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长。     

香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制.方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理.MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Westcm boltting检测pro-BID、Mcl-l、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平.结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP (50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1 μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(/＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P＜0.05或P＜0.01).SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P＜0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P＜0.05).结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性.     

香加皮羽扇豆烷乙酸酯对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响

目的 研究香加皮中提取的羽扇豆烷乙酸酯(CPLA)对正常人外周血淋巴细胞和吞噬细胞免疫调节功能的影响.方法 无菌分离人外周血淋巴细胞和巨噬细胞,加入PHA和不同质量浓度的CPLA,MTT法检测其对淋巴细胞增殖及巨噬细.胞对食管癌细胞株ECA-109生长的影响;RT-PCR法检测CPLA对γ-干扰素(INF-γ)mRNA表达的影响;ELISA法检测CPLA作用后淋巴细胞和巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)等细胞因子分泌的变化.结果 5～40μg/mL CPLA能明显增强PHA活化的人外周血淋巴细胞的增殖(P<0.01);20、40 μg/mL的CPLA能使淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达水平明显升高(P<0.01);用CPLA处理后的巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能明显增强(P<0.01),并证实了该作用可能与CPLA促进巨噬细胞分泌TNF-α增多有关;CPLA能促进淋巴细胞产生IL-2和TNF-α,并呈现浓度依赖性(P<0.01).结论 CPLA能增强人外周血淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能,发挥抗肿瘤作用.     

淫羊藿苷促进脐血来源树突状细胞的分化与成熟

目的：研究淫羊藿苷（icariin,ICA）体外对脐血单个核细胞来源树突状细胞的分化、成熟及免疫活性的影响。方法：无菌条件下采集脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,用GMCSF、IL4诱导树突状细胞（dendritic cells, DCs）,第5天后将DCs分为3组（ICA组、TNFα组和阴性对照组）并作相应处理。倒置显微镜和透射电镜下观察DCs形态,流式细胞术检测DCs表面分子CD1a、CD80、CD83和CD86的表达情况,ELISA法检测DCs培养上清中IL12和IFNγ的水平,MTT法检测DCs刺激T细胞增殖的能力。结果：ICA刺激后,脐血单个核细胞来源DCs呈现典型的成熟DCs形态学特征。ICA组DCs表面CD1a、CD80、CD83和CD86表达水平较对照组均明显上调（P<0.05）,且CD86的表达水平显著高于TNFα组（P<0.05）。ICA组DCs上清中IL12、IFNγ的水平及诱导T细胞增殖的能力较对照组DCs明显增高（P<0.05）,但与TNFα组DCs无显著差异。结论：ICA可刺激脐血单个核细胞来源DCs的分化和成熟,增强DCs的免疫学活性。     

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

 目的 研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞增殖作用的影响,以期为该成分用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据。 方法 采用逐步分离法包括柱层析和高效液相色谱等对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离、纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定。采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果。 结果 宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞增殖（P<0.05）,并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加,Eca109 G₀/G_1期细胞明显增加（P<0.05）,S期和G2/M期细胞明显减少（P<0.05）;经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长和宝藿苷Ⅰ浓度的增加而明显升高（P<0.01）;经宝藿苷Ⅰ（15mg/kg）治疗荷Eca109细胞裸鼠后,肿瘤生长受到明显抑制（P<0.01）,生长抑制率达（60.9±0.16）%。 结论 香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导细胞凋亡有关。     

天花粉蛋白抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长及逆转syk基因甲基化的研究

目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和诱导细胞凋亡过程中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,syk)基因甲基化状态的改变,以寻找新的去甲基化药物.方法:采用MTT法分析TCS对MDA-MB-231细胞增殖的影响,Giemsa染色法观察TCS作用后细胞形态学的变化,FCM检测不同浓度TCS作用48 h后MDA-MB-231细胞凋亡和细胞周期分布情况,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测MDA-MB-231细胞经TCS作用前后syk基因甲基化状态的改变,RT-PCR方法分析TCS作用后MDA-MB-231细胞中syk、Dnmts和MBD2 mRNA表达量的变化,比色法检测TCS对MDA-MB-231细胞DNA甲基转移酶活性的影响.结果:TCS体外对MDA-MB-231细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性;TCS可诱导MDA-MB-231细胞出现空泡样变性、核固缩和核碎裂等细胞凋亡形态学改变,能使MDA-MB-231细胞凋亡并可诱导细胞生长周期阻滞,凋亡率明显高于对照组(P<0.05),并呈时间和浓度依赖性.TCS可以逆转MDA-MB-231细胞syk基因启动子区甲基化状况;MDA-MB-231细胞syk mRNA表达阴性,经TCS作用后,syk mRNA表达阳性;MDA-MB-231细胞经TCS作用48 h前后Dnmts和MBD2 mRNA表达量没有明显变化(P>0.05),但Dnmts活性降低.结论:TCS在抑制MDA-MB-231细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中对syk基因具有明显的去甲基化作用,因而可能成为新型的去甲基化药物.     

香加皮羽扇豆烷乙酸酯对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响

目的 研究香加皮中提取的羽扇豆烷乙酸酯(CPLA)对正常人外周血淋巴细胞和吞噬细胞免疫调节功能的影响.方法 无菌分离人外周血淋巴细胞和巨噬细胞,加入PHA和不同质量浓度的CPLA,MTT法检测其对淋巴细胞增殖及巨噬细.胞对食管癌细胞株ECA-109生长的影响;RT-PCR法检测CPLA对γ-干扰素(INF-γ)mRNA表达的影响;ELISA法检测CPLA作用后淋巴细胞和巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)等细胞因子分泌的变化.结果 5～40μg/mL CPLA能明显增强PHA活化的人外周血淋巴细胞的增殖(P<0.01);20、40 μg/mL的CPLA能使淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达水平明显升高(P<0.01);用CPLA处理后的巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能明显增强(P<0.01),并证实了该作用可能与CPLA促进巨噬细胞分泌TNF-α增多有关;CPLA能促进淋巴细胞产生IL-2和TNF-α,并呈现浓度依赖性(P<0.01).结论 CPLA能增强人外周血淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能,发挥抗肿瘤作用.