通痹灵总碱对LPS刺激后的巨噬细胞产生炎症介质的影响

类风湿关节炎(RA)是目前世界性的难治性重大免疫性疾病,严重危害人类健康.其病理特点是反复发作,病情缠绵难愈.肥厚增生的类风湿滑膜组织结构特点是大量巨噬细胞浸润.活化的巨噬细胞在类风湿性滑膜及被破坏的血管翳组织中被大量发现并产生大量的炎症介质如前列腺素(PG)、白三烯(LT)和一氧化氮(NO)等.炎症介质的主要生理学效应包括收缩平滑肌、趋化白细胞和降解细胞间质等,导致组织局部的毛细血管扩张,血流加快,血管通透性加大,白细胞和血浆经毛细血管渗出,从而导致炎症的发生.通痹灵是以《金匮要略》中桂枝芍药知母汤为基础研制而成的,具有清热除湿、滋阴通阳、活血通络、化瘀止痛的功效.通痹灵总生物碱是从中药复方通痹灵提取出的有效部位之一.既往研究证实[1,2]:通痹灵总生物碱(TA)可抑制异常增殖的T淋巴细胞,调节Th1/Th2比值.本研究观察不同浓度的TA对LPS活化的巨噬细胞产生炎症介质PGE2、LTC4、NO的影响.     

通痹灵对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

目的探讨中药通痹灵(TBL)抗软骨破坏的作用机制。方法以胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规HE染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以鼠重组白细胞介素-1β(rrIL-1β)体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,培养48h后,收集细胞上清液,用阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖(GAG)含量;用硝酸酶还原法检测NO的含量。结果①趾关节病理HE切片评价结果显示:通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P<0.05〉;②不同浓度的rrIL-1β(1、10、100、500、1000ng/ml)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01),且呈量效关系;③不同浓度的通痹灵总碱(200、100、50、25mg/L)及地塞米松可明显地抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P<0.01)及NO的产生(P<0.01)。结论通痹灵总碱可抑制CIA大鼠趾关节软骨破坏;体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解,其作用途径可能是通过抑制NO的生成来实现的。     

通痹灵对滑膜细胞趋化因子RANTES、MCP-1影响的研究

目的：探讨通痹灵对类风湿关节炎滑膜产生趋化因子RANTES、MCP-1的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL-10刺激，不同浓度通痹灵总碱、MTX作用后，ELISA法测定培养上清RANTES、MCP-1含量,取经通痹灵、MTX治疗后的CIA大鼠关节滑膜组织，提取总RNA，用RT-PCR法测定其中RANTESmRNA、MCP-1mRNA水平．结果：通痹灵总碱10mg／L可以非常明显减少RANTES产生，与IL-10组比较，差异非常显著：MTX1mg／L也能减少RANTES产生，与IL-10组比较，有显著性差异．通痹灵总碱和MTX各剂量组都能减少MCP-1产生。通痹灵能抑制滑膜组织中趋化因子MCP-1mRNA、RANTESmRNA的表迭，MTX对MCP-1mRNA、RANTESmRNA的影响作用不明显．结论：通痹灵可抑制类风关滑膜趋化因子RANTES，MCP-1产生．     

《金匮要略》风湿病治法探要

对<金匮要略>关于风湿病的治法进行了探讨.主要有祛风寒湿法,如桂枝芍药知母汤、乌头汤;利小便祛湿法,如麻杏苡甘汤用薏苡仁;微汗法,如麻黄加术汤、麻杏苡甘汤;温阳祛风湿法,如桂枝附子汤、甘草附子汤;温中祛寒湿法,如肾着汤;涌吐风痰法,如藜芦甘草汤;外治法,如纳药鼻中、针刺;补肾法,如八味肾气丸;补气养血法,如防己黄芪汤、薯蓣丸.     

通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响

背景：中医对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的认识和治疗积累比较丰富的经验，尤其是经过近几年来的研究，取得了令人瞩目的进展，具有治疗方法多，疗效确切，毒副作用少的特点，因而从中医领域进一步探寻治疗RA更为有效的药物和方法，有着重要的科学意义和社会意义。而中药能否在RA发病中通过多途径、多靶点、多环节作用方式，抑制或阻止软骨和骨的破坏并促进他们的新陈代谢及其损伤的修复的研究更是少有报道。目的：探讨中药通痹灵抗软骨破坏的作用机制。设计：以实验动物为研究对象的完全随机设计，对照实验研究。单位：一所大学金匮教研室。材料：实验于2002—08／2003—12在广州中医药大学第一附属医院综合实验室完成。Wistar清洁级大鼠，雌性，体质量(110&;#177;20)g，35只。由解放军第一军医大学动物实验室提供，动物合格证号：2002A041。将Wistar大鼠适应性喂养3d后，随机分为正常组、造模组、通痹灵总碱组。通痹灵总碱由广州中医药大学热带病研究所植物化学分析室提取。方法：以胶原诱导型关节炎大鼠为动物模型，分组灌胃治疗后，做大鼠趾关节病理切片，常规苏木精．伊红染色，观察软骨病变；培养软骨细胞，以rrIL-1β体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型，加用不同浓度的通痹灵总碱，并以地塞米松作为对照组，培养48h后，收集细胞上清液，用阿利新兰法检测GAG含量；用硝酸酶还原法检测一氧化氮的含量。主要观察指标：①主要结局：通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠趾关节软骨病变及对rrIL-1β诱导的软骨细胞基质降解的影响②次要结局：通痹灵总碱对rrIL-1β诱导的软骨细胞生成一氧化氮的影响。结果：①趾关节病理苏木精-伊红染色切片评价结果显示：通痹灵总碱组软骨破坏程度小于造模组(P&;lt;0．01)；②不同浓度的rrIL-1β(1，10，100，500，1000μg／L)促进了软骨细胞蛋白多糖的降解(P&;lt;0．01)，且呈量效关系。③不同浓度的通痹灵总碱(200，100，50，25mg／L)及地塞米松可明显抑制软骨细胞蛋白多糖的降解(P&;lt;0．01)及一氧化氮的产生(P&;lt;0．01)。结论：通痹灵总碱可抑制胶原诱导型关节炎大鼠趾关节软骨破坏；体外实验结果显示通痹灵总碱可对抗软骨细胞蛋白多糖的降解，其作用途径可能是通过抑制一氧化氮的生成来实现的。     

二藤合剂氯仿提取物对类风湿性关节炎T细胞的免疫调节作用

【目的】观察二藤合剂氯仿提取物对活化的类风湿性关节炎(RA)患者T细胞表达CD69以及Jurkat细胞周期的影响．推测其可能的细胞免疫调控机制。【方法】培养Jurkat细胞，加入二藤合剂各提取物培养72h，四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测增殖率，筛选有效部位；无菌抽取RA患者全血，与不同浓度二藤合剂氯仿提取物或染料木黄酮预孵30min后，再加植物血凝素(PHA)培养24h，采用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率；培养Jurkat细胞，加不同浓度的二藤舍剂氯仿提取物或氨甲喋呤(MTX)继续培养48h，流式细胞术检测细胞周期。【结果】二藤合剂各提取物中以氯仿提取物抑制Jurkat细胞增殖作用最强；10mg／L和20mg／L的二藤合剂氯仿提取物可显著抑制PHA刺激下RA患者的T细胞，尤其是CD4T细胞表达CD69；10mg／L浓度的氯仿提取物主要将细胞增殖周期抑制在G1期，与MTX作用于S期有明显区别。【结论】二藤合剂氯仿提取物可抑制RA患者T细胞尤其是CD4T细胞的早期活化，阻止T细胞能量和原料合成，从而阻断其DNA合成过程，减少细胞向G2期的转化，为其用于RA的治疗提供了实验依据。     

通痹灵对胶原诱导型关节炎大鼠关节破坏的影响

【目的】观察通痹灵对胶原诱导型关节炎(CIA)模型大鼠关节破坏的影响。【方法】采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射复制CIA模型,造模成功后随机分为模型组、通痹灵组(剂量为3.0 g.kg-1.d-1)、甲氨蝶呤组(MTX组,剂量为每周7.6 mg.kg-1),并设正常对照组;各组按设计剂量灌胃相应药物或生理盐水35 d后,采用容积法评价后肢肿胀度,采用乳腺钼靶机进行全身X光照片,比较各组大鼠各关节破坏程度的差异。【结果】通痹灵可显著性减轻CIA模型大鼠的足肿胀度和四肢关节肿胀数,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01);模型组大鼠X光片显示各关节骨面受到严重侵蚀,关节间隙变窄,通痹灵可显著性抑制CIA大鼠的关节破坏程度(P<0.05或P<0.01),其作用与阳性对照药MTX相仿(P>0.05)。【结论】通痹灵治疗类风湿性关节炎的作用可能与其抑制关节破坏程度,减轻关节炎症有关。     

对《金匮要略》关节疼痛的探讨

关节疼痛是痹证的主要症状之一，痹证与现代医学的风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎等病的临床表现颇为相似，是常见病、多发病之一。在《金匮要略》(以下简称《金匮》)中对关节疼痛的论述主要在湿病、历节病等篇章。研究了《金匮》中对关节疼痛的有关论述，以指导临床实践。综观《金匮》全书，书中论述了关节疼痛的病因病机、伴随症状、治法及饮食宜忌等。感受风寒湿邪是关节疼痛的主要病因病机，饮食失调、正气亏虚亦可导致关节疼痛。其伴随症状有关节肿痛、关节功能障碍及一些全身症状，如头眩、短气、汗出、小便不利、大便反快等。就其治法而言，祛除风寒湿邪是主要治法，祛风湿兼清热是常用治法，扶正祛邪是重要治法。在饮食方面指出不宜过于偏嗜五味。     

《金匮要略》风湿病治法探要

对《金匮要略》关于风湿病的治法进行了探讨。主要有祛风寒湿法，如桂枝芍药知母汤、乌头汤；利小便祛湿法，如麻杏苡甘汤用薏苡仁；微汗法，如麻黄加术汤、麻杏苡甘汤；温阳祛风湿法，如桂枝附子汤、甘草附子汤；温中祛寒湿法，如肾着汤；涌吐风痰法，如藜芦甘草汤；外治法，如纳药鼻中、针刺；补肾法，如八味肾气丸；补气养血法，如防己黄芪汤、薯蓣丸。