去势大鼠骨质疏松的研究

1　材料和方法1. 1　材料　 Sprague- Dawley(SD)大鼠 ,体质量 (184.1±18.6 ) g,雌雄各半 ,由本校实验动物中心提供 .药品 :戊巴比妥钠 .仪器用美国产 QDR- 2 0 0 0型骨密度仪 ,意大利产 BPC生化分析仪 ,美国 16探头 γ记数仪 (CAPINTEC,INC) ,WDW- 10 0微机控制电子万能试验机 .1.2　方法　 SD大鼠 6 0只 ,雌雄各半 ,体质量随机分成 3组 :正常组 ,假手术组 ,去势模型组 .假手术组行开腹手术后 ,立即关闭腹腔 .去势模型组行开腹手术 ,摘除卵巢或睾丸后 ,立即关闭腹腔 .喂养 6 0 d后 ,每组 10只大鼠摘眼球取血 ,然后断头处死动物…     

肝细胞肝癌中血管内皮生长因子及其受体表达的意义及p5 …

目的 探讨ＶＥＧＦ及其受体ＫＤＲ在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的血管生成、生长及转移中的作用及Ｐ５３、ｒａｓ对ＶＥＧＦ表达的调控。方法 用免疫组织化学、原位杂交图像分析的方法研究肝细胞肝癌４５例、肝硬化２１例及正常肝８例的石蜡标本切片，从而探讨ＶＥＧＦ、ＫＤ直癌病理学特点的关系及Ｐ５３、ｒａｓ对其表达的影响。结果 肝癌组中ＶＥＧＦ的表达明显闹于肝硬化组和正常肝组，３组的表达率分别为６４％（２９／４５）、１     

p53, p73, nm23-H1基因在肝细胞肝癌中的表达与临床病理的关系

目的：研究p53,p73,nm23-H1基因在肝细胞肝癌中的表达与临床病理学关系。方法：应用免疫组织化学方法（SABC法）研究18例正常肝、12例肝硬化、78例肝细胞肝癌的p53,p73,nm23-H1基因的表达情况。结果：18例正常肝，12例肝硬化中p53和p73基因表达阴性和弱阳性；p53,p73,nm23-H1基因在肝细胞肝癌中表达率分别为55．13％，52．56％，66．66％；p53的表达在不同的临床分期、 病理学分级、有无转移和是否乙型肝炎之间差异有显著性意义（P＜0．05或P＜0．01），而与AFP含量间无显著意义；p73基因表达与病理学分级，是否乙型肝炎和有无肝内或门静脉转移之间差异显著（P＜0．01），与临床分期、AFP含量间无显著意义；nm23-H1的表达与临床分期、AFP含量间有显著性意义（P＜0．05），和肝内或门静脉转移呈负相关（P＜0．01），而与病理学分级、是否乙型肝炎无差异性。结论：p53,p73和nm23-H1可作为肝细胞肝癌发生、发展和预后的主要参考指标之一。     

肝血管瘤中血管内皮生长因子的表达意义

目的 研究肝血管瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其临床意义。方法 用链霉亲和素－生物素－过氧化物酶免疫组织化学染色（SABC法）和核仁组成相关嗜银蛋白（AgNOR)计数方法，研究64例肝血管瘤标本。结果 肝血管瘤标本中，VEGF阳性表达率为78．1％，其中（＋）者11例，（＋＋）者17例，（＋＋＋）者22例，且VEGF表达强度在不同的组别间AgNOR计数差异显著（P＜0．01）结论 VEGF的表达在肝血管瘤的成因中具有重要意义。     

全人源肝癌噬菌体单链抗体的筛选及特异性鉴定

目的：对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定，筛选肝癌抗体，同时对抗体的活性及特异性进行鉴定。方法：PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率。先以人成纤维细胞吸附后再以体外培养的肝癌细胞SMMC-7721为抗原对所建抗体库进行3轮“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选。将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定；通过ELISA法及FCM鉴定其与人肝癌细胞及正常细胞的结合活性。结果：ScFv基因插入率为70％。在亲和筛选过程中，肝癌噬菌体单链抗体得到富集，收获率逐轮得到提高，第3轮为第1轮的214倍。筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定，均可检测到目的基因。ELISA分析结果显示18个克隆与SMMC-7721呈阳性反应，阳性率为90％，15个克隆与成纤维细胞有交叉反应。得到3株肝癌单链抗体。ScFv的FCM鉴定表明，以正常胎肝细胞L-02为对照，ScFv与肝癌结合比率为41．3％。特异性鉴定表明，其与肝癌细胞结合活性明显高于正常细胞。结论：利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因，且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性。     

原发性肝癌患者血清高水平VEGF的意义

目的:研究血清血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)水平与肝癌临床病理及肿瘤病理学之间的关系。方法:应用VEGF 165定量夹心ELISA法测定30 例正常人、30 例肝硬化和45例肝癌患者外周血清中VEGF的水平,并结合临床及肿瘤病理学的特点进行统计学分析。结果:正常人血清VEGF水平为(153±71)pg/mL,分布范围为(6~371) pg/mL;肝硬化患者血清VEGF水平为(158±67)pg/mL,分布范围为(4~352) pg/mL;45例肝癌患者血清VEGF为(312±206) pg/mL,分布范围为(34~968)pg/mL。肝癌患者的外周血VEGF水平显著高于正常人和肝硬化患者,P<0. 01。高水平的血清VEGF与肝癌的大小、包膜的不完整以及转移与复发有关, P<0. 01,而与肿瘤的分化程度无关, P>0 .01。当肿瘤发展到第Ⅳ期,血清VEGF水平显著升高, P<0. 01。结论:血清VEGF高水平是肝细胞肝癌具有血管侵犯和转移潜在危险的指标,预示不良的预后。     

人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义

本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库 ,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。提取U937细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ;XhoⅠ酶切后 ,丙烯葡聚糖凝胶 S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与λZAP表达载体连接 ,包装蛋白包装后建成cDNA文库 ;取出 1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1 Blue MRF′ ,测定文库大小、重组率 ;随机挑取 10个噬斑 ,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下 ,释放出PBK CMV噬菌粒 ;感染大肠杆菌XLOLR ,铺于卡那霉素抗性的LB平板 ;挑取克隆 ,37℃震摇过夜 ;抽提质粒 ,经EcoRI和XhoI酶切后 ,初步确定片段的大小及多样性。结果 :构建成含 2 .87× 10 6重组子的U937细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.7kb。结论 :所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。