链置换扩增技术的影响因素研究

目的：探讨限制酶，聚合酶，缓冲体系和DTT等对链置换扩增（SDA）实验的影响，以期在商品化试剂条件下组建SDA系统。方法：以结核菌IS6110序列为扩增对象设计SDA引物，利用商品化的BsoBI和exo-Bst为实验用酶建立SDA实验系统，对比在不同BsoBI,exo-Bst浓度条件下SDA产物的电泳条带亮度来观察限制酶，聚合酶对SDA效率影响；对比SDA在pH7.6的磷酸盐缓冲液和以Tris-HCl为缓冲体系的NF Buffer2,ThermoPol Buffer和EcoPol Buffer中的产物电泳条带的方法来观察不同缓冲体系对SDA的效率影响。对比加入DTT和不同DTT时SDA产物的电泳条带亮度来观察DTT对SDA效率的影响。结果：（1）在0．1－0．4U／ul浓度范围内，SDA的扩增率与BsoBI含量正相关，而0．8U/ul BsoBI反而使SDA受到抑制。（2）在0．08－0．32U／ul浓度范围内exo-Bst用量对SDA的扩增能力没有显著影响；（3）SDA可以在pH7.6的磷酸盐缓冲液和ThermoPol Buffer中进行，而不能在NE Buffer2和EcoPol Buffer中进行；（4）DTT对SDA的扩增率和特异性都没有显著影响。结论：以上实验结果表明在商品化试剂条件下可以构建SDA系统，并得到良好的扩增效果。     

Determination of guanidino compounds in serum and urine in rabbits with cadmium chloride－induced renal tubular injury

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｕａｎｉｄｉｎｏｃｏｍｐｏｕｎｄｓｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｕｒｉｎｅｉｎｒａｂｂｉｔｓｗｉｔｈｃａｄｍｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｎａｌｔｕｂｕｌａｒｉｎｊｕｒｙＺｈａｏＳｈｕｍｉｎｇ（赵树铭）；ＨｕａｎｇＪ...     

检验医学五年制本科学生临床输血学教学体会

随着高等教育改革的深化,高校培养了越来越多的检验医学高等人才进入临床工作.目前在各级医院输血科工作的人员绝大部分是检验专业毕业生.检验五年制本科教学在完善检验医学教学的基础上又强化临床医学教学,培养了具有较全面和扎实的临床医学和检验医学理论知识的高级检验医生.输血是临床各科,尤其是外科治疗的重要措施之一.在临床实施输血治疗时,必须根据患者病情权衡输血的治疗作用和风险,掌握输血适应证,为患者选择适宜的血液成分或制品和输血方法,最大限度的发挥输血的治疗作用.输血科医生应担负指导临床用血和具备这样的能力.检验五年制本科学生通过本课程的学习,应初步做到正确、安全、有效地应用临床输血检验知识为患者服务,胜任输血科、血站实验室的各项工作,成为合格的输血工作者[1].针对检验五年制本科学生的特点,对于临床输血学教学作者有以下思考.     

3种血小板生成的关键因子共转染人骨髓基质细胞的研究

目的构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,并观察其在共转染的人骨髓基质细胞中的表达情况。方法应用基因重组技术,构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,在脂质体介导下将其导入体外培养的人骨髓基质细胞内,24 h后观察TPO、IL-6、IL-11瞬时表达情况、蛋白含量及表达,并与未转染组、空载体转染组做对比。结果 1)酶切及测序结果均可证实TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体的正确性。2)细胞转染24 h后,荧光显微镜下可观察到pEGFP-N1的表达,25%细胞发出绿色荧光;免疫细胞化学染色检测出IL-6及IL-11转染后能在细胞内表达。3)转染48 h后,Western blot检测出骨髓基质细胞内TPO、IL-6及IL-11的蛋白表达量。结论 TPO、IL-6、IL-11这3个基因可共转染人骨髓基质细胞,并在细胞内有效表达。     

全血放置4℃制备24h冰冻血浆的质量研究

目的探讨24h冰冻血浆(FP24)质量及其制备程序。方法 24份(400ml/份)全血于采后<6h用无菌接驳机一分为二:1份6h内过滤去除白细胞(简称滤白),在其中设对照组[12份滤白后立即制备血浆(FFP)]、实验组1[12份滤白后置4℃过夜(18～24h)后制备血浆(Ⅰ-FP24)];另1份作为实验组2,置4℃过夜后滤白并立即制备血浆(Ⅱ-FP24)。所有血浆分别制备好后立即保存至-30℃冰箱,并于采血后d337℃解冻后做体外质量评估:观察外观、检测FⅤ、FⅦ、FⅧ及Fib,以及主要生化指标含量。结果对照组FFPFib、FⅤ、FⅦ及FⅧ依次为(2.08±0.16)g/L、(86.57±18.73)%、(91.71±25.53)%和(97.65±25.99)%,与之相比,实验组1依次下降22.6%、29.38%、32.89%和40.71%,实验组2相应下降1.9%、-2.09%、14.91%和32.86%。实验组2与对照组的FⅧ分别为(65.56±13.93)%和(97.65±25.99)%(P<0.05),实验组2与实验组1的FⅤ分别为(88.38±15.97)%和(61.14±13.76)%(P<0.05);实验组2的K+、LDH、FHb分别为(4.33±0.28)mmol/L、(145.70±26.00)mmol/L和(129.96±34.33)mg/L,较对照组和实验组1明显增高(P<0.05)。结论全血采后<6h滤白并置4℃过夜再制备的冰冻血浆,凝血因子损失较多;全血采后置4℃过夜(18～24h)后滤白并随后制备的冰冻血浆,则能很大程度地保持凝血因子的效果。     

单采与手工制备的新鲜冰冻血浆的质量比较

目的探讨单采和手工新鲜冰冻血浆(FFP)的质量差异。方法运用常规检验方法测定单采和手工FFP(各20份)的凝血因子(Fib及FⅧ)、部分生化指标(TP、LDH、K+、Na+及Cl-)、游离血红蛋白(FHb)及pH,并进行对比分析。结果 2种冰冻血浆FHb、K+、Na+、Cl-及Plt含量差异具统计学意义,其他检测指标在两者间差异不具统计学意义,单采FFPFⅧ活性比手工FFP略高。结论单采与手工FFP具有相同的质量,单采FFP的凝血因子活性略优于手工FFP。     

血小板去除术联合药物治疗原发性血小板增多症的疗效分析

目的探讨血小板去除术联合羟基脲、a-干扰素等药物治疗原发性血小板增多症的临床疗效及预后评价。方法对43名血小板增多症患者采用血小板去除术1—4次后,立即给予羟基脲和a-干扰素等药物治疗。结果血小板去除术后,患者外周血中血小板计数明显下降,临床症状好转,再经羟基脲、a-干扰素等药物联合治疗,所有患者病情均得到明显改善。结论血小板去除术联合羟基脲、a-干扰素治疗血小板增多症有显著疗效。     

血小板活化对单采血小板制剂中VEGF、TGF-β_1和PDGF含量的影响

目的了解血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)在单采血小板制剂中血小板活化过程中的含量变化。方法选取10名单采(双份)血小板献血者,分别留取血浆(3ml/人,作为对照组)、新鲜单采血小板(采集当日的血小板,5ml/人,作为实验1组)和常规保存单采血小板(22℃振荡箱中保存5d的血小板,5ml/人,作为实验2组);用血细胞分析仪分别测定各组血小板计数(Plt),用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定这3组样本中VEGF、TGF-β1、PDGF的含量,用流式细胞术测定2个实验组的CD62p表达,并比较分析检测结果。结果新鲜单采血小板中的VEGF、TGF-β1、PDGF含量[分别为(410.95±95.07)pg/ml、(91.15±19.50)ng/ml和(12.60±2.06)ng/ml]明显高于新鲜血浆中相对应的各生长因子水平[分别为(149.09±28.11)pg/ml、(37.38±10.73)和(3.28±0.79)ng/ml],差异具统计学意义(P<0.01);常规保存血小板中VEGF、TGF-β1和PDGF含量[分别为(495.16±63.49)pg/ml、(110.33±19.06)和(16.96±2.71)ng/ml]又高于新鲜单采血小板中相应的各生长因子水平,差异也有统计学意义(P<0.05)。Plt与VEGF、TGF-β1、PDGF呈一定程度的正相关,Plt及其活化均影响生长因子含量。结论单采血小板中VEGF、TGF-β1和PDGF水平呈高表达,血小板活化可促进这些因子的产生和释放。     

改良血小板添加液低温(10℃)保存血小板的动物实验研究

目的对添加海藻糖的血小板添加液替代70%血浆冷藏的血小板进行动物体内输注效果评价。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板,将浓缩血小板分3组保存。血浆常温组:添加100%血浆,22℃保存;添加液低温组:添加70%PAS-ⅢM/30%血浆,10℃保存;冰冻保存组:添加100%血浆,-85℃保存。以新鲜血小板为对照,常温血浆保存组在d 3,添加液低温保存组在d 3、7、9,冰冻保存组在d 20复苏后分别检测血小板缺乏兔模型的血小板24 h回收率和生存率。结果除保存9 d的添加液低温组血小板存活率明显低于新鲜血小板存活率(P<0.05)外,血浆常温组、添加液低温组以及新鲜血小板的24 h回收率和存活率相互比较差异均无显著统计学意义(P>0.05)。冰冻保存组血小板24 h回收率和存活率均低于其他各组(P<0.05)。结论改良的PAS-ⅢM能够替代血浆在低温条件下用于血小板的保存,能维持血小板的体内功能。     

去白细胞输血预防非溶血性发热性输血反应的临床应用

目的：评价临床输注法去白细胞红细胞悬液和浓缩血小板预防非溶血性发热性输血反应（FNHTR）的效果。方法：选择100例肝硬化、胃溃疡和胃癌等病人输注去白细胞红细胞悬液，对照组相类似50例病人输注普通红细胞悬液。240例急慢性白血病、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤、血小板减少性紫癜、糖尿病、肝硬化、上消化道出血、重症肝炎、烧伤、癌症放、化疗等患者分为两组，各组120例随机接受去白细胞血小板或未去白细胞血小板悬液。观察这些患者FNHTR的发生率。结果：在100例接受去白细胞红细胞悬液的患者中未发生FNHTR，对照组50例患者中有8例发生FNHTR，发生率为16%；血小板输注的患者中，去白细胞和未去白细胞的FNHTR发生7例和25例，发生率分别为5.83%和20.83%。结论：去白细胞输血可防止或减低FNHTR的发生。