两种核酸扩增检测方法用于病毒载体制品支原体检测的比较研究

目的  研究两种支原体快速检测方法在病毒载体制品中的适用性和影响因素。 方法  采用基于PCR技术的两种支原体核酸扩增检测方法,对分别表达Ⅱ型单纯疱疹病毒抗原gD和ICP27的重组仙台病毒载体疫苗（SeV-dF/HSV-2 gD、SeV-dF/HSV-2 ICP27）收获液及纯化液进行支原体检测,探究其的特异性和最低检测限,并对多个批次的收获液及纯化液进行测定。 结果  普通PCR法在对本制品病毒收获液检测时无明显PCR抑制现象,但对病毒纯化液检测时发生明显的PCR抑制,并且未能检出100 CFU/ml限度的口腔支原体和肺炎支原体。实时荧光定量PCR法在对本制品病毒收获液和纯化液的支原体检测中均无PCR抑制发生,且该方法对口腔支原体、肺炎支原体等多种支原体的检测灵敏度可达到10 CFU/ml,其中对口腔和肺炎支原体核酸拷贝数检测灵敏度可达到每毫升50基因组拷贝。 结论  实时荧光定量PCR法具有更高特异性和灵敏性,适用于作为质量内控方法快速检测病毒载体制品,及时发现支原体的污染,保证制品质量。     

右侧双肾动脉变异1例

笔者在局部解剖学解剖1具未成年男性尸体标本时,发现其右肾有双支动脉供应（图1）,报道如下. 右肾形态基本正常,但肾门宽阔,肾蒂粗大.剖开肾蒂发现有双支动脉自肾门入肾：上支肾动脉约在肠系膜上动脉起点下1.5 cm处起始于腹主动脉右壁,水平右行经下腔静脉后方,斜向外下,行经肾静脉前方,并与之伴行入肾门下部,长约5.5 cm;下支肾动脉平肠系膜下动脉稍下方起自腹主动脉右前壁,向右斜经下腔静脉前面,右上行伴肾盂后方入肾门中下部,长约4.5 cm.     

MSCT血管成像对肝移植受体术前血管结构的评价

目的 探讨64排螺旋CT血管成像对肝移植受体术前血管结构评价及对临床决策的影响.方法 对32例拟行肝移植的患者行三期血管成像扫描,重建方法为最大密度投影(MIP)和容积再现(VR),对获得的血管图像结合轴位图像进行分析.结果 32例肝病患者中,无腹腔干1例,腹腔干硬化斑块致其狭窄3例,脾动脉增粗迂曲12例,脾动脉瘤2例,肝动脉(HA)变异7例;肝外门静脉(PV)栓塞3例,肝内门静脉栓塞2例,肠系膜上静脉栓塞1例,肝内外门静脉及肠系膜上静脉多发栓塞1例;32例中,肝静脉(HV)成像有诊断价值25例,其中下组肝静脉1例,HV显影差7例;32例中,显示正常下腔静脉30例,1例下腔静脉肝内段癌栓,1例下腔静脉内癌栓达右心房入口;32例肝病患者中,24例成功行肝移植,8例不适合移植手术,其中肝内癌瘤结节直径总和>8 cm者3例,多发广泛栓子1例,肝外转移4例(其中包括1例肝内癌瘤结节直径总和>8 cm者),1例MichelsⅧ型肝固有动脉纤细,直径＜3 mm.结论 64排螺旋CT三期血管成像可准确、全面显示肝脏血管的结构变化,对筛选适宜手术的病例和对手术方案的制订具有重要的价值.     

契约学习法在护理教学中的应用

目的探讨契约学习法在护理教学中的应用。方法在2008级护理系本科教学中实验组采用契约学习法,对照组采用传统讲授法,教学6个月后对讲课效果和学习效果进行分析比较。结果契约学习法在知识的系统性学习方面,完全能达到讲授法的学习效果。实验组学生自导学习技能提高,学习动力增强,对于以后的发展有更为重要的意义。结论契约学习法较传统讲授法更能提高在校护理系学生自导学习倾向和技能,且可达到更好的学习效果。     

糖肾方对2型糖尿病肾病模型OLETF大鼠IL-10、TNF-α、DA调控作用观察

目的：探讨糖肾方对自发性2型糖尿病模型OLETF大鼠肾脏的保护作用以及对血中白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α和多巴胺的影响。方法：OLETF大鼠随机分为模型组、糖肾方组（1.6g/kg）、蒙诺组（1.0mg/kg）、LETO大鼠为正常对照组。各组动物从12周龄起进行灌胃给药,连续给药44周。实验结束,大鼠56周龄时,测定血糖和24h尿蛋白水平、血清中白细胞介素-10、肿瘤坏死因子-α、多巴胺。取肾组织观察肾组织形态学改变,并对肾损害进行半定量评分。结果：糖肾方可降低模型组大鼠血中TNF-α、DA水平,升高IL-10水平。降低肾小球硬化指数和肾小管间质纤维化指数,改善肾组织形态学异常。结论：糖肾方对2型糖尿病模型OLETF大鼠肾脏具有保护作用,延缓其病理进展,其作用机制可能与调节体内炎症因子水平有关。     

我国不同地区天门冬核DNA ITS序列分析

目的 研究我国不同地区天门冬核DNA ITS序列差异及其与地理位置的关系,为不同居群天门冬的鉴定和道地产区的确定提供理论依据。方法 运用PCR法对25个地区的75个样本ITS序列扩增后双向测序,用软件DNAMAN和MEGA 4分析测序结果。结果 每个地区的3个样本的ITS序列基本相同,不同地区样本间的ITS全序列存在一定差异,ITS2片段变异高于ITS1。贵州产天门冬遗传分化度较大,变异位点和信息位点较多。ITS序列构建的系统树表明,同一个地区的3个样本优先聚类,然后是同省的样本聚类,位于北纬24.6°～36.6°和22.2°～24.4°的样本分别聚为1大支;第1大支中包括青海、湖南和贵州省的样本,第2大支则包括浙江、广东、云南和广西4省的样本。结论 ITS序列可鉴定不同产地的天门冬,贵州省是天门冬药材道地产区之一,不同地区天门冬的亲缘聚类主要与纬度相关,与经度关系不大。     

髋骨截骨矫形术配合髋人字石膏固定治疗先天性髋关节脱位的护理

目的：探讨髋骨截骨矫形术配合髋人字石膏固定治疗先天性髋关节脱位的围手术期护理措施及效果。方法：回顾性分析21例行髋骨截骨矫形术配合髋人字石膏固定的先天性髋关节脱位患儿的护理要点。结果：所有患儿手术均顺利进行,术后康复过程顺利,能够配合功能锻炼,除2例术后髋关节功能恢复较差外,其余患儿均获满意复位,可进行正常的功能活动。结论：做好患儿的沟通、疏导,取得患儿与家长的配合,可提高先天性髋关节脱位的手术成功率,减少并发症,降低残疾率。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

Decorin基因过表达对HEK293T细胞微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)重组质粒,研究其对微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达的影响.方法:从人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)提取总RNA,经RT-PCR获得decorin的全长cDNA,克隆至T-载体pUM-T并测序,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,再次测序正确后以磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,利用RT-PCR、Western Blot方法检测空载体组和重组质粒转染组微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1转录水平及翻译水平的表达.结果:经DNA测序证实人DCN cDNA片段正确插入真核表达载体中.Western Blot结果显示经磷酸钙共沉淀法转染的HEK 293T细胞中目的基因高表达.RT-PCR和Western Blot结果显示,与空载体组相比,重组质粒转染组LC3转录水平显著降低,beclin1和LC3-Ⅱ的翻译水平均显著降低.结论:成功构建人DCN重组质粒,其在HEK 293T中过表达可以显著降低微管相关蛋白LC3和自噬基因beclin1表达,为进一步研究DCN与自噬的相互作用奠定了基础.     

胸膜黏液性软骨肉瘤1例

1 病例摘要 患者女,47岁,主因“活动后胸憋、呼吸困难1个月”来本院就诊,胸部超声示:左侧胸腔第7肋骨以下可见液性暗区,左侧包裹性胸腔积液、左侧部分肺组织实变.胸部X线片示:左侧胸腔积液.CT示:左侧胸腔积液并部分肺组织实变、不张.血生化检查未见异常,血常规检查:白细胞为5.48×109/L,红细胞4.2 × 1012/L,血红蛋白7.4g/L.