外周血CTL活化基因在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的：探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocyte，PBL）穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA表达与急性排斥反应（acute reiection，AR）的关系。方法：采用TdT介导的脱氧核苷酸原位末端标记法（TUNEL）检测移植肾脏中的凋亡细胞。另外同时检测血清肌酐水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测移植肾和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达。并以同基因肾移植为对照。结果：病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9～11天分别发生轻、中、重度排斥。对照组无明显排斥现象。实验组于手术后第5、7、9～11天细胞凋亡数明显高于对照组（P〈0．01）：肾小管上皮细胞凋亡程度与血清肌酐水平、病理学检查结果一致。RT-PCR结果显示实验组于术后3～5天起，肾组织和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达水平即显著升高，于术后7-9天达到高峰。与对照组相比差异有显著性（P〈0．01）。外周血和肾组织中FasL、穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3～5天开始明显上升，其变化趋势早于血清肌酐。结论：定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生，具有临床诊断参考价值。     

miR-148a对肝癌细胞株侵袭和迁移的抑制作用及机制

背景与目的：原发性肝癌是肝细胞或肝内胆管上皮发生的恶性肿瘤,其复发和转移十分常见。本实验以慢病毒介导miR-148a,感染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：选用SMMC-7721肝癌细胞株,进行miR-148a慢病毒载体的构建,筛选稳定表达miR-148a肝癌细胞株。RTPCR检测细胞中miR-148a的表达水平。划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。采用明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9的活性。蛋白质印迹法(Western blot)检测MMP-2、MMP-9和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达情况。结果：RT-PCR结果显示,和对照组相比,LV-miR-148a肝癌细胞感染组表达miR-148a明显增高,体外侵袭实验细胞划痕实验显示过表达miR-148a后SMMC-7721的侵袭和迁移能力明显下降。明胶酶谱法结果显示过表达miR-148a的肝癌细胞,MMP-2和MMP-9降解明胶的能力下降(P<0.05)。过表达miR-148a同时能降低肝癌细胞SMMC-7721中vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白的表达,但并未影响E-cadherin的表达。结论：miR-148a在体外能抑制肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9和vimentin的表达水平有关。     

从小鼠胚胎干细胞文库中筛选PIASx相互作用蛋白

目的应用酵母双杂交系统,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选与PIASx(protein inhibitor ofactivated STAT x,PIASx)相互作用的蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,探讨PIASx在干细胞分化中的作用机制。方法以pGBKT7-PIASx为诱饵质粒,从小鼠胚胎干细胞cDNA文库中筛选出与PIASx相互作用的阳性克隆,对验证后的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,进一步采用直接酵母双杂交进行相互作用验证。结果经过筛选、测序、同源性分析及直接酵母双杂交验证,发现了6种与PIASx相互作用的蛋白。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到了6种不同的基因,其编码蛋白与PIASx相互作用,可能与小鼠胚胎干细胞的增殖与分化相关。对PIASx相互作用蛋白的筛选有助于揭示PIASx在胚胎干细胞中的作用机制。     

肿瘤相关巨噬细胞在肝癌中的研究进展

近年来肿瘤相关巨噬细胞（ tumor-associated macrophages, TAMs）与肿瘤的关系成为研究热点,尤其是肝癌等实体肿瘤。肿瘤微环境中的TAMs释放多种细胞因子和趋化因子介导免疫反应,通过参与上皮细胞间质转化（ epithelial-mesenchymaltransitions, EMT）,血管生成等过程促进肝癌的侵袭和转移。本文将从TAMs的募集和分化、与肿瘤微环境的关系、促进转移的机制、与肝癌之间的通路以及靶向TAMs治疗肝癌的新方法等方面对TAMs在肝癌中的研究进展进行综述。     

重组TRAIL对2种不同癌株凋亡效应的研究

目的观察重组TRAIL对7402肝癌细胞和HeLa宫颈癌细胞的抑癌活性。方法采用MTT法和AnnexinV-FITC法及流式细胞仪技术测定重组TRAIL对7402肝癌细胞和HeLa宫颈癌细胞的抑制活性。结果 MTT和流式细胞仪检测结果显示,重组TRAIL在体外可抑制7402肝癌细胞的生长,凋亡率可达31%,而对HeLa宫颈癌细胞无明显抑制作用。结论不同癌株对TRAIL的敏感性不同,7402肝癌细胞对TRAIL非常敏感,可为后续肿瘤治疗提供更多的实证材料。     

人RUVBL2真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

目的:构建带有绿色荧光蛋白的RUVBL2真核表达载体pEGFP-N1-RUVBL2,并鉴定其在HeLa细胞中的表达。方法:以pGADT7-RUVBL2质粒为模板,PCR扩增RUVBL2基因,首先克隆至T载体中,进一步亚克隆至p-EGFP-N1,并对重组表达载体进行酶切及测序鉴定。采用脂质体转染法将重组质粒瞬时转染HeLa细胞系,应用荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达,并用Western blot法检测RUVBL2-GFP融合蛋白的表达。结果:经限制性酶切鉴定及测序分析证实pEGFP-N1-RUVBL2载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的HeLa细胞中有绿色荧光蛋白的表达,Western blot法证实转染细胞中能表达RUVBL2-GFP融合蛋白。结论:pEGFP-N1-RU-VBL2表达载体构建成功,并在HeLa细胞内成功表达。     

运用原位杂交和二步法技术检测乳腺癌PTTG基因表达

目的　研究PTTG基因在乳腺癌组织中表达的临床意义。方法　应用原位杂交和二步法 ,检测 66例乳腺癌、2 7例乳腺小叶增生及 5 4例乳腺正常组织中PTTGmRNA和PTTG蛋白的表达。结果　PTTGmRNA在乳腺癌、乳腺小叶增生和乳腺正常组织中表达阳性率分别为 71.2 % (4 7/66)、5 1.9% (14 /2 7)和 11.1% (6/5 4) ,而PTTG蛋白表达阳性率分别为 63 .6% (4 2 /66)、48.1% (13 /2 7)和 7.4% (4 /5 4)。乳腺癌、乳腺小叶增生与乳腺正常组织之间的PTTGmRNA及PTTG蛋白阳性率比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;PTTGmRNA的表达与PTTG蛋白表达呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,而与淋巴结转移无关 (P >0 .0 5 )。结论　PTTG基因的过度表达可能参与了人乳腺癌的发生发展过程     

应用循证医学理论 提高临床教学质量

传统的医学教育模式已日益显示出不能适应现代教育要求的弊端，循证医学的教育观念和教育模式已成为当今医学教育的重要发展方向。应用循证医学理念改变传统的临床教学方法，可以提高临床教学质量，提高学生的能力和素质。     

失血性休克家兔血液粘度变化及β-七叶皂甙钠的保护作用

目的 :研究失血性休克时的血液粘度变化 ,寻求起保护作用的药物。方法 :采用家兔失血性休克模型 ,测定休克前后的血液粘度、血浆粘度、红细胞压积。结果 :单纯休克组休克后 1 0min、30min、60min家兔血液粘度逐渐升高 (P <0 .0 5 ) ,而 β -七叶皂甙钠组在休克后 1 0min、30min的血液粘度无明显升高 (P >0 .0 5 ) ,休克后 60min其血液粘度亦明显低于单纯休克组 (P <0 .0 5 )。结论 :失血性休克后家兔血液粘度明显升高 ,而 β -七叶皂甙钠能明显降低血液粘度 ,对综合治疗失血性休克有临床意义。