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TRAIL真核表达质粒的构建及抑制肝癌生长的实验研究 总被引:3,自引:1,他引:3
目的构建TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的真核表达质粒,观察其对BALB/c裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤模型的抑瘤作用。方法提取U937细胞总RNA.用RT-PCR方法扩增出胞外区(114—281aa),连入溶菌酶信号肽序列,构建分泌型TRAIL重组质粒;建立裸鼠7402肝癌细胞皮下移植瘤模型,纯化后的质粒DNA与脂质体聚乙烯胺混合后经肌肉注射进行基因转染,体内验证重组蛋白的抑瘤活性,采用TUNEL法进行肿瘤组织细胞凋亡检测。结果肿瘤体积测定结果显示.TRAIL对肝癌细胞生长有抑制作用;凋亡检测光镜下可见有棕褐色凋亡细胞,细胞凋亡指数增高。结论重组TRAIL质粒能引起肿瘤细胞的凋亡,抑制7402肝癌细胞的生长。 相似文献
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目的:构建PIAS-NY基因慢病毒质粒,并将包装所得慢病毒感染小鼠精母细胞,获得稳定过表达PIAS-NY的细胞株。方法:应用PCR技术扩增目的基因,并将扩增产物插入慢病毒载体质粒pGC-FU上,对阳性克隆进行PCR筛选及测序鉴定。将重组质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,获得含慢病毒颗粒的细胞上清,用慢病毒感染小鼠精母细胞,并用Western印迹方法检测细胞中PIAS-NY蛋白的表达。结果:成功构建了pGC-FU-PIAS-NY慢病毒表达质粒,获得了稳定过表达PIAS-NY的小鼠精母细胞株。结论:PIAS-NY过表达慢病毒质粒及稳定转染小鼠精母细胞株的构建,为进一步体外研究PIAS-NY基因在精子发生中的功能奠定了基础。 相似文献
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重组TRAIL抑制7402肝癌细胞生长的实验研究 总被引:5,自引:2,他引:3
目的 重组TRAIL对BALB/c裸鼠肝癌细胞皮下移植模型的抑瘤作用。方法 建立裸鼠 740 2肝癌细胞皮下移植瘤模型 ,纯化后的质粒DNA与PEI混合后经肌肉注射进行基因转染 ,体内验证重组蛋白的抑瘤活性 ,采用原位缺如末端标记 (TUNEL)法 ,进行肿瘤组织凋亡检测。结果 肿瘤体积测定显示TRAIL对肝癌生长有明显抑制作用 ,凋亡检测表明实验组镜下有蓝紫色凋亡细胞。结论 荷瘤小鼠经肌肉注射TRAIL质粒DNA后 ,能引起肿瘤细胞的凋亡 ,有效抑制 740 2肝癌细胞在裸鼠体内的生长。 相似文献
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先天性白内障是儿童的常见眼病 ,也是儿童弱视和失明的主要原因。有动物实验结果表明 ,小鼠先天性白内障的形成与Na 、K 、Ca2 等有一定的关系[1 ,2 ] 。作者对先天性遗传性BALB/c小鼠白内障晶体内多种元素进行了检测 ,现将结果报告如下。1 材料和方法BALB/c小鼠均由扬州大学农学院实验动物中心提供 ,BALB/c小鼠先天性白内障模型的建立方法见文献[3] 。随机选取正常与患先天性白内障小鼠各 32只 ,脱颈椎法迅速处死 ,剥离眼球 ,在解剖显微镜下迅速自后路将小白鼠双侧晶状体取出。将晶状体置于高温消解器内套 (聚四氟乙… 相似文献
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目的:构建CTGF特异性siRNA慢病毒表达载体并观察其介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对人肝癌细胞CTGF(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响?方法:针对已经筛选确定的人CTGF基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与Plk0.1-GFP-SP6载体连接产生shRNA 慢病毒载体,经PCR筛选阳性克隆进行DNA测序鉴定?用脂质体转染法将质粒共转染293T 细胞,将包装产生的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,Real-time PCR?Western-blot检测CTGF mRNA和蛋白的表达?结果:PCR与DNA测序证实合成的含CTGF shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确?经RNA干扰后的靶细胞CTGF mRNA以及蛋白表达水平明显降低?结论:成功构建人CTGF基因RNA干扰慢病毒载体,体外感染HepG2细胞可有效降低CTGF mRNA和蛋白的表达,为以CTGF基因为靶点的肝癌基因治疗研究奠定了基础? 相似文献
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目的探讨慢病毒介导的miR-16对THP-1巨噬细胞表达白细胞介素10(IL-10)和精氨酸酶1(Arg1)的影响。方法利用重组人IL-4(rh IL-4)将THP-1细胞诱导分化为M2型巨噬细胞,利用ELISA检测诱导前后细胞IL-10的分泌,实时荧光定量PCR检测THP-1巨噬细胞诱导前后miR-16的表达;通过慢病毒感染获得miR-16过表达细胞;ELISA检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的分泌;流式细胞术检测miR-16过表达细胞和对照细胞IL-10的表达;Western blot法检测miR-16过表达细胞和对照细胞Arg1的表达。结果 THP-1细胞经IL-4诱导后,培养上清中IL-10的分泌逐渐增加,并在第6天达峰值。IL-4将THP-1细胞诱导为M2型巨噬细胞后,miR-16表达下调;慢病毒感染M2型巨噬细胞经嘌呤霉素筛选后GFP表达率提高至97.7%;ELISA检测M2型巨噬细胞miR-16过表达组上清液中IL-10的分泌量为(72.15±0.16)pg/m L,较对照组(103.47±0.14)pg/m L低。流式细胞术检测显示miR-16过表达细胞IL-10的平均荧光强度(Gm)为3.47,胞内IL-10的表达水平较对照组(Gm=12.40)低。过表达miR-16后,M2型巨噬细胞中Arg1表达降低。结论慢病毒介导的miR-16能够抑制IL-4诱导分化的THP-1巨噬细胞中IL-10和Arg1的表达。 相似文献
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