CACNA1H基因G773D突变对钙通道功能的影响

目的研究儿童失神癫痫（childhood absence epilepsy，CAE）患儿CACNA1H基因G773D突变对钙通道功能的影响。方法用定点突变重叠延伸聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）方法构建G773D突变体，脂质体法将突变体和野生型人Cav3．2a cDNA分别转染HEK-293细胞，获得稳定表达细胞株，全细胞膜片钳法研究其电生理变化。结果突变体和野生型细胞钙通道激活和失活动力学差异无统计学意义，但突变体G773D钙电流密度明显高于野生型。结论CACNA1H基因G773D突变可使其编码通道电流增加，并可能引起神经元兴奋性增加。     

神经元保护蛋白TAT-Bcl-XL的体外高效表达及其功能的初步研究

目的：在原核表达系统中表达对凋亡神经元具有保护作用的重要蛋白Bcl-XL与蛋白质转导序列（PTD）的融合蛋白，并检测重组蛋白对重金属离子所诱导的细胞凋亡的保护作用。方法：通过RT-PCR的方法，用Bcl-XL特异引物从乳腺癌细胞系MCF-7细胞的总RNA中扩增出Bcl-XL基因，构建相应的原核表达载体，体外表达的TAT-Bcl-XL融合蛋白经镍亲和层析介质纯化后，通过免疫荧光方法检测其转导293T细胞的能力；并用流式细胞仪检测融合蛋白抑制细胞凋亡的能力。结果：经RT-PCR从MCF-7细胞总RNA中得到相应的TAT-Bcl-XL基因片段，并将其克隆入pCRT7/CT-TOPO载体中，重组质粒pTBTOPO转化大肠杆菌后，在SDS-PAGE和Western blot的结果中出现了与预期分子量相同的蛋白条带和阳性信号，纯化的TAT-Bcl-XL重组蛋白经免疫荧光检测，主要分布于细胞的细胞质中。流式细胞仪的检测结果显示融合表达蛋白可以有效地抑制Zn2＋离子所诱导的细胞凋亡，使细胞的存活率提高40%。结论：TAT-Bcl-XL融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，初步的功能性检测表明融合蛋白具有抑制细胞凋亡的功能。     

中国广东人CYP2F1基因遗传多态性研究

目的检测广东地区正常人群和鼻咽癌患者中细胞色素P450酶系CYP2F1基因的多态性，并分析该基因遗传多态性与鼻咽癌易感性的关联。方法采用直接测序法检测40例鼻咽癌患者全血标本中CYP2F1基因全部10个外显子的多态性变化。对于等位基因频率较高的多态性位点，进一步采用错配聚合酶链反应．限制性片段长度多态性检测368例鼻咽癌患者和344名正常对照人群中该位点的等位基因频率。结果在40例鼻咽癌样本中，共检测到CYP2F1基因的35个单核苷酸多态性。其中，10个单核甘酸引起编码的氨基酸改变，1个移码突变，15～16bp之间插入C引起移码突变（15-16ins C），该等位基因频率为25％。但病例-对照分析却未能显示该位点突变与鼻咽癌易感的相关性（P〉0．05）。结论中国广东人的CYP2F1基因遗传多态性位点较多，但暂未发现与鼻咽癌的易感性关联的单一多态位点，多个多态性位点或不同基因多态性位点的协同互补作用可能才是鼻咽癌发生发展的关键影响因素。     

氟尿嘧啶引起大鼠气管损伤修复过程中干细胞的定位

目的 气管干细胞的原位观察。方法 使用5-氟尿嘧啶(5-FU)造成大鼠离体气管环的严重损伤，采用光镜、PCNA免疫组织化学，以及Hoechst33342染色观察气管黏膜的修复过程。结果 5-Fu作用12h后，气管上皮脱落，可见少量间隔分布的类似裸核的细胞呈钉状位于基底膜上，PCNA染色阴性(Go期细胞)，其中少数细胞Hoechst33342染色阴性。去除5-FU6h后，气管黏膜由扁平上皮覆盖；48h后，气管环恢复假复层纤毛柱状上皮。结论 5-Fu能杀死处于细胞周期的气管上皮细胞，对Go期细胞作用很小，残留于基底膜上的裸核样的Go期细胞中含有干细胞，其Hoechst33342染色阴性，并具有排出荧光染料的能力，正是这些细胞的增殖分化，修复了损伤的气管环。     

MTT法评价医用高分子材料的细胞毒性

为研究医用高分子材料的细胞毒性，采用能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法-MTT比色法，分别检测三类医用高分子材料的浸提液对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响，评价其细胞毒性。参照美国药典的评价标准，三类医用高分子材料均呈现出高的细胞相对增殖率，其细胞毒性为l级，即无细胞毒性。     

睾酮对雄性家兔血管损伤后内皮功能及内膜增生的影响

目的:探讨睾酮对雄性家兔腹主动脉球囊损伤后内皮功能及内膜增生的影响。方法:选择健康雄性新西兰白兔24只随机分成3组:对照组(假去势)、低睾酮血症组(去势)及睾酮替代组(去势1周后加用长效十一酸睾酮单次肌注,14mg/kg),每组8只。去势10d后对所有动物行腹主动脉球囊损伤术。损伤后两周测血浆睾酮、血脂、一氧化氮代谢产物(NO₂^-/NO₃^-)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平,并截取腹主动脉进行图像分析。结果:睾酮替代组和对照组的血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白及MDA水平和新生内膜面积明显低于低睾酮血症组(P＜0.01或P＜0.05),睾酮替代组和对照组的NO₂^-/NO₃^-及对照组的SOD水平高于低睾酮血症组(P均＜0.05),替代组和对照组两组间比较各数据无差异。结论:生理水平的睾酮(内源性或外源性替代)具有保护雄性家兔血管内皮,抑制动脉损伤后内膜增生的作用。     

兔在体左室肥厚心肌跨室壁电异质性的实验研究

目的：探讨兔在体左室肥厚心肌单相动作电位跨室壁的不均一性变化。方法：以腹主动脉缩窄术制备家兔高血压左室肥厚模型，并设假手术组（仅游离腹主动脉未缩窄）作为对照。采用自制复合式电极在兔左心室前壁同步记录心内膜、心肌中层、心外膜在体3层心肌单相动作电位（MAP），比较两组间跨室壁复极离散度(TDR)等各项参数的差异。结果：腹主动脉缩窄组平均动脉压、全心重量及其与体重比率、左心室游离壁厚度均大于假手术组。缩窄组3层心肌MAPD100［内膜：(191±19)ms；中层：(244±24)ms;外膜：(196±15)ms］均长于对照组［内膜：(170±18)ms ;中层：(172±15)ms;外膜：(168±16)ms，P<0.01］，以中层心肌MAPD100延长最为明显，缩窄组TDR（65±10)ms较对照组（4±3)ms明显增大（P<0.01）。结论：兔在体左室肥厚心肌跨室壁电不均一性明显增大，可能是肥厚心肌心律失常发生增多的原因之一。     

脊柱侧凸患者椎弓根形态变化与椎弓根外固定术的应用

目的：观测脊柱侧凸患者胸椎弓根等结构的形态变化，于脊柱侧凸矫形术中应用自行设计的胸椎椎弓根外内固定技术，探讨其临床意义。方法：对30例脊柱侧凸患者行术前CT扫描，观测椎弓根形态变化及椎体旋转程度，主动脉位置变化等；对过窄或变形严重的椎弓根行胸椎椎弓根根外内固定，观察效果。结果：CT扫描发现，侧凸患者凹侧椎弓根直径明显窄于凸侧椎弓根直径，差异具有显著统计学意义（P〈0．05）。凹侧及凸侧椎弓根直径都明显小于相应肋骨．椎弓根单元直径，差异具有显著统计学意义（P〈0．05）。椎体呈楔形变，主动脉位置相对向后外侧移位；临床选择5例侧凸病人共24个胸椎弓根过细（小于2mm）或变形严重不适合经椎弓根内固定，而对这部分椎弓根行椎弓根根外内固定取得满意效果，无神经血管并发症发生，经3，6及12个月随访无螺钉拔出或松动，无矫正度丢失。结论：脊柱侧凸病人椎弓根等结构的形态发生了改变；在脊柱侧凸病人中应用胸椎椎弓根根外内固定技术具有操作简单安全、固定牢固可靠等优点，具有临床实用价值。     

MCI-154抗休克作用及其改善心功能的机理

ＭＣＩ－１５４抗休克作用及其改善心功能的机理第三军医大学大坪医院野战外科研究所（重庆４０００４２）胡德耀梅建民殷作明刘良明卢儒权陈惠孙一、ＭＣＩ－１５４抗休克作用：家兔内毒素休克低排期模型在充分容量复苏的前提下，静脉给予ＭＣＩ－１５４０２ｍｇ／ｋｇ...     

焦虑敏感问卷中文版的信度和效度

目的:翻译和修订焦虑敏感问卷,测试中文版的信效度。方法:翻译焦虑敏感量表,通过对中学生的三次测试,对量表的因素结构、信度和效度进行了检验。结果:修编的焦虑敏感问卷中文版通过探索性因素分析将原量表由36题缩减为15题,共包括三个因素:对生理唤醒的恐惧;对认知失控的恐惧;对社会评价的恐惧;三个因素的累积贡献率为52．29％,项目的因素负荷率在0．63～0．98之间;因素彼此之间的相关在0.37～0．53之间,因素与问卷总分之问的相关在0．72～0．84之间,因素内部的相关在0．68～0．78之间。问卷在各个因素上的内部一致性系数在0.73～0．78之间．分半信度在0．71～0．76之间,重测信度在0．70～0．78之间。结论:问卷的中文简化版在中学生中具有良好的信度和效度。