组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经TSA, ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长和增殖状态,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b,CD64,CD14等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.TSA (30 μg/L)联合ATRA (1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,生长增殖受抑,S期细胞减少,CD11b表达增高,PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主,细胞功能上的分化可能尚不成熟.结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937/PLZF细胞发生部分分化.     

异基因外周血造血干细胞移植后细胞免疫的重建

目的 研究异基因外周血造血干细胞移植后细胞免疫的重建，探讨免疫治疗应用于造血干细胞移植后的残留病灶清除，并将其与化疗有机结合，以延长患者无病生存率的方法。方法 采用流式细胞仪，检测14例异基因外周血造血干细胞移植患者移植前后外周血中T、B、NK细胞的含量。结果 异基因外周血造血干细胞移植后1月内，患者血循环中CD3^＋细胞明显减少，至移植后3月逐渐恢复至正常；CD3^＋CD4^＋细胞移植后持续减少，至移植后6月甚至更长时间后才逐渐恢复；CD3^＋CD8^＋细胞于移植后1月内很快恢复。CD19^＋细胞于移植后l～3月降低，移植后3～6月逐渐恢复。NK细胞于移植后2月恢复，较T或B淋巴细胞恢复速度快。结论 异基因外周血造血干细胞移植后3月T细胞才逐渐恢复至正常水平；B细胞于移植后1～3月绝对及相对计数降低，移植后3～6月逐渐恢复；NK细胞于移植后2月恢复，较T或B淋巴细胞恢复速度快。     

阿糖胞苷诱导白血病细胞株U937自噬作用的实验观察

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)诱导白血病细胞株U937自噬作用,并探讨其可能的机制。方法:采用细胞计数仪计数,测得不同浓度Ara-C处理U937细胞后24 h和48 h的生长抑制率;用透射电镜观察细胞的超微结构变化,并应用蛋白印迹法检测自噬相关蛋白LC3、p62及PI3K-Akt-mTOR通路的蛋白水平。结果:细胞计数发现,不同浓度Ara-C作用的各组细胞生长均受到明显抑制。Ara-C处理细胞24 h后,在透射电镜下观察,可见细胞质中出现大量双层膜包裹形成的自噬体,内含细胞器或细胞质;蛋白印迹法检测结果显示,LC3-Ⅱ表达水平明显增高;同时Akt-mTOR通路受到明显抑制。结论:Ara-C能够抑制白血病细胞株U937细胞增殖,其通过抑制Akt-mTOR信号通路诱导细胞发生自噬,为Ara-C抗肿瘤机制提供了新思路。     

PML-RARα对环腺苷酸诱导急性髓系白血病细胞分化的影响

为了进一步探讨环腺苷酸cAMP协同低剂量氧化砷诱导急性早幼粒白血病细胞分化的分子机制，以稳定转染了PML—RARα融合基因的PR9细胞为实验对象，通过观察细胞的生长，并利用形态学实验、流式细胞技术和荧光素酶报告基因转染实验等检测cAMP和／或氧化砷处理前后细胞相关指标的变化，研究PML-RARα在cAMP诱导AML细胞分化过程中的作用。结果显示，虽然cAMP单独能使表达PML-RARα的PR9细胞表面分化抗原CD11b的阳性率有所升高；但细胞形态学分析表明，cAMP单用无法诱导表达PML—RARα融合蛋白的PR9细胞分化，只有联合氧化砷才能使细胞表现出完全分化的特征，并伴有CD11b表达的显著升高。此外，PML—RARα还可以明显抑制含有cAMP反应元件的报告基因的转录。结论：PML—RARα融合蛋白对cAMP诱导AML细胞分化的信号转导途径具有显著的抑制作用。     

三氧化二砷联合8-CPT-cAMP诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞分化的实验研究

目的 了解三氧化二砷（As2O3)联合8-对氯苯硫基环腺苷酸（8-CPT-cAMP)对维甲酸（RA）耐药、的急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞的作用。方法 以RA耐药的APL细胞株NB4-R1和NB4-R2为模型。通过观察细胞生长，形态，表面分化抗原以及对四氮唑蓝的还原能力的改变来研究As2O3,8-CPT-cAMP单独和联合对细胞增殖及分化的影响；并应用免疫荧光和Western blot检测药物处理前后细胞内PML-RARα融合蛋白以及细胞周期调控蛋白的变化。结果 低剂量As2O3(0.25μmol/L）与8-CPT-cAMP(200μmol/L）可协同促进NB4-R1和NB4-R2细胞分化。8-CPT-cAMP可通过影响细胞周期调控蛋白E2F和P21的表达而抑制细胞增殖，并促进As2O3介导的PML-RARα融合蛋白降解。结论 As2O3联合8-CPT-cAMP能够诱导RA耐药的APL细胞分化。     

氧化砷诱导维甲酸耐药早幼粒细胞白血病细胞（MR—2）凋亡的体外 …

目的：深入了解氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以对全反式维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ－２为模型，用细胞生长，活力测定，形态学观察和流式细胞仪分析，四氮唑蓝还原反应及免疫荧光等指标观察Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径。结果：１．０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３可诱导ＭＲ－２细胞凋亡，并能降解ＡＰＬ特异蛋白ＰＭＬ－ＲＡＲα融合蛋白。结论：Ａｓ２Ｏ３治疗ＡＰＬ的效应途径可能不同     

尿多酸肽联合环腺苷酸诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的实验研究

目的 探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)单独和联合环腺苷酸(cAMP)对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞的作用.方法 以维甲酸耐药的APL细胞株NB4-R2为体外模型,观察使用CDA-Ⅱ单独和联合cAMP处理前后细胞生长和形态的改变;同时利用流式细胞术检测细胞的凋亡特征,包括细胞内DNA含量的分布、亚二倍体(sub-G1)细胞群所占比例、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平等;并通过电泳鉴定因基因组DNA非随机性降解导致的梯状DNA.结果 CDA-Ⅱ可以通过降低细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,诱导NB4-R2细胞发生凋亡;cAMP则能显著加强CDA-Ⅱ的这一促凋亡作用1 g/L CDA-Ⅱ联合100 μmol/L cAMP共同处理NB4-R2细胞48 h和72 h时Bcl-2阳性细胞比例分别下降至(15.1±4.8)%和(7.3±2.9)%.100 μmol/L cAMP单独作用可使MB4-R2细胞的Bcl-2阳性率由(92.0±0.6)%下降至(75.3±2.0)%.结论 尿多酸肽CDA-Ⅱ联合cAMP对于维甲酸耐药的APL细胞株具有强烈的诱导凋亡效应.     

基因ifi56在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中的表达及其真核表达质粒的构建

本研究探讨ifi56基因在全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的表达,构建人ifi56真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位情况。用RT-PCR技术检测APL细胞NB4经维甲酸处理不同时间后ifi56的表达,并从白血病细胞NB4中扩增ifi56全长编码序列,将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,转染到293T细胞中,提取细胞蛋白,用Western blot方法检测蛋白表达情况,荧光显微镜检测IFI56的定位。结果表明,ifi56在未经处理的NB4细胞中几乎检测不到,当用维甲酸处理72小时后明显升高,并成功将ifi56插入到质粒pEGFP-C1中,Western blot检测到融合蛋白表达,分子量约为83 kD。IFI56重组蛋白在293T细胞内主要定位于细胞胞浆中。结论:ifi56表达随着APL细胞分化明显升高,成功构建ifi56基因真核表达载体,IFI56蛋白主要定位于细胞浆。     

氧化酚砷诱导急性早幼粒细胞性白血病细胞凋亡的研究

目的：了解氧化酚砷（ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅ ｏｘｉｄｅ,ＰＡＯ）对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４细胞的可能作用。方法：在台盼蓝排除法计数活细胞和细胞活力的基础上,通过细胞形态不和流式细胞仪检测细胞凋亡。通过对细胞进行Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ（Ｒｈ）１２３和碘化丙啶双重染色,并应用流式细胞仪检测其荧光强度,以反映细胞线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）。结果和结论：低浓度（０．０５和０．０１μｍｏｌ／     

氧化酚砷对血液肿瘤细胞系的体外效应

目的：了解氧化酚砷（ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅ ｏｘｉｄｅ,ＰＡＯ）对血液肿瘤细胞系的影响。方法：８种血液肿瘤系经０．０１ｕｍｏｌ／Ｌ、０．０５ｕｍｏｌ／Ｌ和０．１ｕｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＯ处理达一定时间后,经台盼蓝排除法计数细胞活力的应用流式细胞仪检测细胞ＤＮＡ含量分布。结果和结论：在生长抑制和诱导凋亡方面,ＰＡＯ对血液肿瘤细胞的效庆谱相对较广,０．０５ｕｍｏｌ／Ｌ和０．１ｕｍｏｌ／Ｌ的ＰＡＯ能抑制某些