不同铁状态下HL-60细胞中IRP_2 mRNA和TfR mRNA的表达

目的探讨不同铁状态下IRP2 mRNA和TfR mRNA在HL-60细胞中的表达以及二者之间的关系。方法将FeCl3或去铁胺(Desferrioxamine,DFO)加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,使HL-60细胞处于缺铁或富铁的状态下进行培养。于细胞培养后第12、24和48小时收集各组细胞,提取总RNA。采用RT-PCR半定量法测定IRP2 mRNA和TfR mRNA的相对表达量。结果①各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大,无明显差异(F组间=1.199,P>0.05)。细胞培养时间对IRP2 mRNA的表达有影响,差异有显著性(F组内=43.418,P<0.05),表现为随时间的延长,IRP2 mRNA的表达降低。②各实验组之间TfR mRNA的差异有显著性(FW-S=7.184,F组间=113.926,P<0.01)。在加入DFO的两个实验组中TfR mRNA表达升高。在加铁的两个实验组中,与对照组相比较,在12h时TfR mRNA的表达量上升,24h时达到高峰,之后迅速下降。结论①铁或去铁胺对HL-60细胞IRP2 mRNA的表达无直接影响。②当细胞内铁降低时,TfR mRNA的基因表达则增加;当细胞内铁增加时,TfR mRNA的基因表达则降低。     

肿瘤细胞铁代谢的分子机制

铁是细胞生长增殖的必需元素,参与了许多重要的生化过程。由于肿瘤细胞对铁的高需求,铁对肿瘤细胞的作用已引起临床医学家们的重视,本文就肿瘤细胞铁代谢的研究状况及进展作一综述。     

甲基丙二酸半胱氨酸在小儿早期VitB12缺乏症诊断中的作用

目的:探讨甲基丙二酸半胱氨酸在小儿早期VitB12缺乏症诊断中的作用.方法:维生素B12缺乏亚临床症状组50例、临床症状组50例及正常健康儿童50例,测定其红细胞平均体积(MCV),红细胞平均血红蛋白(MCH),血清维生素B12、尿中甲基丙二酸(MMA)及血清半胱氨酸(Hcy)浓度.结果:①临床症状组MCV(114.2...     

铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活的实验研究

目的观察铁剥夺诱导K562细胞凋亡与Caspase-3激活间的关系。方法以不同水平的去铁胺(DFO)处理K562细胞。1.用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)对K562细胞进行双标记后,在流式细胞仪下检测细胞凋亡率。2.采用肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测Caspase-3活性。3.用Western blot分析Caspase-3活性蛋白的激活。结果K562细胞经不同浓度DFO处理后,细胞发生明显凋亡,Caspase-3活性渐升高。50、100μmol/L DFO作用于K562细胞24 h后,Caspase-3酶活性升高明显;与对照组比较,有显著性差异(P<0.001);在100μmol/L浓度下14 h可见活性Caspase-3,Caspase-3活性和量为时间-剂量依赖性;10、12 h各浓度组间Caspase-3活性水平比较,差异均无显著性(P均>0.05)。上述作用可被等摩尔浓度的氯化铁(FeCl3)抵消。结论铁剥夺可能通过螯合细胞内铁,激活Caspase-3,诱导K562细胞凋亡。     

缺铁大鼠肠道黏膜铁调节蛋白-2和转铁蛋白受体mRNA的表达

目的　了解缺铁对大鼠肠道黏膜铁调节蛋白 2和转铁蛋白受体 (TfR)mRNA表达的影响。方法　建立大鼠缺铁动物模型。根据血清铁 (SI)、血清铁蛋白 (SF)、Hb结果分隐性、轻度、中度贫血 3个实验组 ,设正常对照组。取各组缺铁大鼠小块十二指肠黏膜组织 ,研磨后常规提取RNA备用。按照 5′端相同 ,3′端互补的原则 ,根据NCBIGeneBank中IRPs 2和TfR蛋白受体的cDNA序列设计引物 ,以 β actin为内参对照 ,做RT PCR。结果　随着缺铁程度加重 ,十二指肠黏膜中IRP2mRNA表达增加。中、轻度贫血组均高于对照组 (P <0 .0 1) ,中度贫血组高于隐性贫血组 (P <0 .0 5 ) ,有显著性差异 ,而相邻两组间比较无差异 (P >0 .0 5 ) ;TfRmRNA表达与IRP2mRNA有相似现象 ,随着缺铁加重表达增加 ,实验组均高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,各试验组之间比较均有差异 (P <0 .0 5 )。IRP2mRNA和TfRmRNA具有显著正相关 (r=0 .80 2　P <0 .0 1)。结论　IRP2在转录后水平通过调控TfRmRNA表达影响肠道铁的吸收 ,是体内铁代谢的重要调节者     

铁超载与铁剥夺对VP-16诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载与铁剥夺对依托泊甙 (VP 1 6)诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :选择 1 0 0 μmol/LFeCl3和 1 0 μmol/L去铁胺 (DFO)与VP 1 6共同作用于HL 60细胞 ,并以单用VP 1 6作对照。光镜观察HL 60细胞形态学变化、DNA琼脂糖电泳及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察铁超载与铁剥夺对VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡的影响。结果 :①FeCl3(1 0 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L) 6h ,1 2h ,2 4h ,细胞凋亡率(APO % )和亚二倍体峰 (Sub G1 ) ,低于单用VP 1 6(1 0 0mg/L)组 ,2组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 5)。DNA电泳显示ladder出现时间滞后、数目减少。②DFO(1 0 μmol/L) +VP 1 6 (1 0 0mg/L )组APO %、DNA电泳ladder数目、Sub G1均比单用VP 1 6高 (P <0 .0 1 )。③等量的DFO与FeCl3和VP 1 6(1 0 0mg/L)与单用VP 1 6(1 0 0mg/L)结果相同。结论 :铁超载抑制化疗药物VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺可促进VP 1 6诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 ,白血病患者补铁应慎重     

铁超载与铁剥夺对Ara-C诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁超载对铁剥夺对Ara C诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :细胞培养法、台盼蓝活细胞拒染实验、细胞活力测定、光镜形态学观察、DNA琼脂糖电脉及流式细胞仪 (FCM )等方法检测HL 60细胞凋亡。观察不同浓度的三氯化铁 (FeCl3 )、铁剥夺剂 去铁胺 (DFO)等对HL 60细胞的作用 ,选择 10 0 μmol/LFeCl3 和 10 μmol/LDFO与Ara C共同作用于HL 60细胞 ,并以单用Ara C及生理盐水作对照。结果 :①FeCl3 (10 0 μmol/L) +Ara C(10 0 μg/ml) 6h ,12h ,2 4h ,APO %和Sub -G1%低于单用Ara C(10 0 μg/ml)组 ,两组相比有显著差异性 (P <0 0 5 )。②DFO(10 μmol/L) +Ara C(10 0 μg/ml)组APO %、DNA电泳ladder数目 ,FCM检测Sub -G1%均比单用Ara C高 (P <0 0 1)。③等摩尔的DFO与等摩尔FeCl3 共同作用于HL 60细胞 ,结果与生理盐水组相同 ;等摩尔DFO加等摩尔FeCl3 和Ara C(10 0 μg/ml)与单用Ara C(10 0 μg/ml)结果相同。 结论 :铁超载抑制化疗药物Ara C诱导HL 60细胞凋亡作用 ,铁剥夺 (DFO)可促进化疗药物Ara C诱导HL 60细胞凋亡作用。临床上可采用铁剥夺的方法协同治疗白血病 ,白血病患者补铁应慎重     

铁剥夺对白血病细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨去铁胺 (DFO)对白血病细胞K562凋亡相关基因表达的影响及其可能分子机制。方法　采用RT PCR法分析Rb及c myc基因在RNA水平变化。结果　DFO 50 μmol/L及 1 0 0 μmol/L作用于K562细胞 2 4h及 48h ,Rb及c mycmRNA水平较空白对照组增加 (P <0 .0 5) ,且以 1 0 0 μmol/L组增加明显。 结论　铁剥夺剂使K562细胞Rb及c mycmRNA表达增加可能是其诱导白血病细胞凋亡的机制之一。     

铁剥夺对K562细胞动态铁池的改变及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨去铁胺(DFO)对白血病细胞K562动态铁池(LIP)、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法实验分为DFO组、DFO 三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测K562细胞LIP改变、流式细胞术观察K562细胞凋亡和RT-PCR测定K562细胞c-myc、Rbb、ax mRNA表达。结果1.不同浓度的DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度增加,LIP降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性。2.不同浓度的DFO作用于K562不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P<0.05);3.RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、Rb和bax mRNA表达(P<0.05)。结论DFO可诱导K562细胞凋亡;其诱导K562细胞凋亡作用可能与其螯合细胞内铁,降低细胞LIP,上调细胞凋亡相关基因c-myc、Rb、bax mRNA表达密切相关。     

肿瘤细胞铁代谢的分子机制

铁是细胞生长增殖的必需元素，参与了许多重要的生化过程。由于肿瘤细胞对铁的高需求，铁对肿瘤细胞的作用已引起临床医学家们的重视，本文就肿瘤细胞铁代谢的研究状况及进展作一综述。