不同铁状态下HL-60细胞中IRP2 mRNA的表达

目的 本研究通过加铁和去铁干预试验,了解不同铁状态下IRP2在人白血病HL-60细胞中的表达情况.方法 将FeCl3或去铁胺(Desferrioxamine,DFO)加入含有体积分数10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下培养.于细胞培养后第12、24和48 h收集各组细胞,提取细胞总RNA.采用RT-PCR半定量法测定IRP2 mRNA的相对表达量.结果 各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大,组间差异无统计学意义(F=1.199,P＞0.05),但随细胞培养时间的延长,IRP2 mRNA的表达降低,组内差异有统计学意义(F=43.418,P＜0.05).结论 细胞内铁水平状态可能不影响IRP2 mRNA的表达.     

不同载铁状态下HL-60细胞转铁蛋白受体和铁蛋白mRNA的表达

目的:探讨不同载铁情况下HL-60细胞中转铁蛋白受体(TfR)mRNA和铁蛋白(Fn)mRNA的表达情况.方法:取HL-60细胞分5组培养.FeCl3-20组和FeCl3-40组培养液中加入FeCl3,终浓度分别为20 μmol/L,40 μmol/L;DFO-50和DFO-100组培养液中分别加入去铁胺(DFO)50 μmol/L,100 μmol/L;对照组用单纯培养液,不加FeCl3或DFO.分别于细胞培养12 h、24 h和48 h收集细胞,采用RT-PCR半定量法测定TfR mRNA和Fn mRNA的相对表达量.结果:与对照组比较,DFO-50和DFO-100组TfR mRNA表达量随培养时间的延长而升高,Fn mRNA表达量变化不大(P＞0.05).FeCl3-20和FeCl3-40组TfR mRNA的表达随培养时间的延长,先增高后降低,Fn mRNA的表达则逐渐降低.结论:TfR 和Fn 不同程度地参与了HL-60细胞铁代谢过程.     

富铁对HL-60细胞增生及化疗药物诱HL-60细胞凋亡的影响

探讨铁对 ＨＬ－６０细胞增生及化疗药物诱导 ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,采用ＨＬ－６０细胞与不同浓度的三氯化铁、三氯化铁加阿糖胞苷、三氯化铁加足叶乙甙、阿糖胞苷、足叶乙甙共同体外培养６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ,用细胞生长、活力测定、形态学观察、流式细胞学检测分析和ＤＮＡ电泳,免疫组化方法检测ｂｃｌ－２基因等细胞凋亡指标观察三氯化铁的作用。结果显示,１００μｍｏｌ／Ｌ三氯化铁促ＨＬ－６０细胞增生最明显,凋亡率最低,ｂｃｌ－２阳性表达率最高,１００μｍｏｌ／Ｌ三氯化铁分别加用阿糖胞苷、足叶乙甙与 ＨＬ－６０细胞共同培养时凋亡率比单用阿糖胞苷、足叶乙甙低（Ｐ＜０．０５）。可以认为一定量的铁有促进 ＨＬ－６０细胞增生、抑制 ＨＬ－６０细胞凋亡的作用,对于白血病患者,不适当的铁剂补充可能带来不利的影响。     

铁剥夺对柔红霉素诱导K562细胞多药耐药基因1表达及NFKB活化的影响

目的:探讨铁剥夺对柔红霉素(DNR)诱导K562细胞多药耐药基因1(MDR1)表达及核因子κB(NFκB)活 化的影响。方法:以1.0μmol/LDNR单用或联合应用25μmol/L去铁胺(DFO)作用于人红白血病细胞株K56224h 后,应用RT -PCR法、流式细胞仪分别检测对照组、DNR组和DNR+DFO组K562细胞MDR1mRNA和P糖蛋白 (Pgp)的表达情况,同时采用凝胶滞留试验检测NFκB的转录活性水平。结果:与对照组相比,DNR可同时诱导MDR1 mRNA、Pgp表达上调和NFκB活化增强(P<0.05);DFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDR1mRNA、Pgp表达及 NFκB活化(P<0.05)。结论:铁剥夺可减少DNR诱导的MDR1、Pgp表达,其机制可能与抑制NFκB活化有关。     

富铁对HL-60细胞增殖及化疗药物诱导其凋亡的影响

铁是细胞生长所必需的元素之一 ,是细胞代谢酶的必需成分 ,同时 ,铁还可激活催化ＤＮＡ合成的核糖核酸还原酶。动物实验表明富铁饲料可促进肿瘤的生长[1,2 ] ,肝癌细胞在富铁的培养基中生长更快 ,细胞团更大[3 ] 。因而 ,研究富铁对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响 ,对防止医源性铁过多和肿瘤治疗有重要的意义。新近我们探讨了富铁对白血病细胞株ＨＬ 6 0的增殖及对化疗药物诱导凋亡作用的影响 ,现报道如下。材料和方法1　细胞株　白血病细胞株ＨＬ 6 0引自华西医科大学细胞分子生物学实验室。2　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞培养于含体积分数为 10 %灭…     

耐乙胺丁醇结核杆菌embB基因突变检测及意义

目的探讨应用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)技术检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇(EMB)分离株embB基因突变情况，研究其应用价值。方法采用PCR—SSCP分析68例结核菌株embB。结果以H37Rv标准株为对照，30株药物敏感株的embB基因SSCP泳动均正常，38株耐EMB分离株中25株embB基因SSCP泳动异常，异常检出率占66％。结论部分分枝结核杆菌耐EMB是由于其embB基因突变引起，PCR—SSCP可成为检测部分结核杆菌耐EMB耐药基因的有效方法。     

铁剥夺对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁剥夺诱导HL 60细胞及对化疗药物诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :HL 60细胞与不同浓度的铁螯合剂 去铁胺 (DFO)、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养 6h、12h、2 4h、48h。通过测定细胞活力 ,观察细胞形态学变化 ,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡 ;通过亲和免疫组化方法检测c myc基因表达 ,从而确定DFO及DFO与化疗药物联合应用对HL 60细胞的作用。结果 :DFO单用可降低HL 60细胞活力 ,抑制HL 60细胞增殖 ,诱导HL 60凋亡 ,并可使c myc基因表达增加 ,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加 ;DFO与化疗药物联合时 ,可增加化疗药物HL 60细胞凋亡的作用 ,该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消。结论 :铁剥夺可影响HL 60细胞DNA的合成 ,诱导其凋亡 ,并提高HL 60细胞对化疗药物的敏感性。因此 ,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一 ,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效     

米力农治疗先天性心脏病合并肺炎及心力衰竭临床观察

目的观察米力农在先天性心脏病合并肺炎及心力衰竭的临床疗效。方法将45例符合先天性心脏病合并肺炎及心力衰竭的患者,随机分为治疗组24例对照组21例。治疗组在常规治疗基础上应用米力农,对照组采用常规治疗 地高辛治疗。结果治疗组在烦躁消除、呼吸平稳、肺啰音消失时间、心率好转时间、肺脏回缩等时间均优于对照组,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论米力农治疗先心病合并肺炎及心衰疗效优于常规药物,短期应用较为安全,未见明显不良反应,疗效可靠,值得推广。     

去铁胺诱导K562细胞凋亡研究

目的：探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）诱导白血病细胞凋亡的分子机制。方法：实验分为DFO组(终浓度分别为10、50、100 μM)、DFO+FeCl3（各10 μmol/L）组及空白对照组。用钙黄绿素检测K562细胞可变铁池。锥虫蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪方法检测K562细胞凋亡;比色法检测caspase-3活性。结果：（1）DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性;而DFO+FeCl3组细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义。（2）50 μmo/L、100 μmol/L DFO作用于K562细胞24 h时,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);相关分析结果显示,K562细胞铁池的荧光改变与caspase-3活性变化呈负相关(r=-0.894, P<0.05)。结论：DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞可变铁池,激活caspase-3有关。     

铁螯合剂诱导白血病细胞凋亡中caspase-3的变化

目的探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）对诱导白血病细胞HL-60的分子机制。方法 2003年712月用钙黄绿素（calcein）检测HL-60细胞LIP。台盼蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪（FCM）等方法检测HL-60细胞凋亡;比色法检测caspase-3（基于pNA标记底物的比色法）活性。结果①不同浓度的DFO作用于HL-60细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性。②HL-60细胞在不同浓度的DFO作用下,caspase-3的活性逐渐升高。50、100μmol/LDFO作用于HL-60细胞24h,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,有统计学意义（P〈0.001）;相关分析结果显示,HL-60细胞LIP的改变与caspase-3活性变化呈负相关系（r=-0.887,P〈0.05）。结论 DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞LIP,激活caspase-3,最终实施细胞凋亡密切相关。