视交叉上核的结构及其在昼夜节律中的作用

视交叉上核,是哺乳动物最重要的昼夜节律起搏器,它调整着哺乳动物一系列生理行为和活动有“昼夜节律生物钟”之称。近期的研究应用免疫组化,原位杂交,离体培养、移植试验,电生理技术等方法已开始逐步揭示ＳＣＮ的功能性结构以及ＳＣＮ在昼夜节律机制中的作用。     

MKP-1在APP/PS1双转基因小鼠脑内的分布及表达

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)在APP/PS1双转基因小鼠脑中的分布和表达,探索MKP-1与阿尔茨海默病(AD)的关系。方法 选取3、8、12月龄的APP/PS1双转基因雄性小鼠(AD小鼠)各5只,以同窝野生型雄性小鼠作为正常对照(n=5)。采用免疫组化和Western blotting检测MKP-1在小鼠脑内的分布和表达情况。结果 免疫组化检测显示,MKP-1在AD小鼠脑内广泛表达,包括大脑皮质、海马、丘脑等;3月龄AD小鼠脑内MKP-1阳性神经元数目(8824±1397)明显高于8月龄AD小鼠(5278±1764,P=0.008),且8月龄AD小鼠阳性神经元数目明显高于12月龄AD小鼠(2864±1464,P=0.046)。Western blotting结果与免疫组化结果一致(F=18.052,P=0.003)。与8月龄AD小鼠比较,同窝野生型小鼠脑内MKP-1阳性神经元数目(10 121±3657)明显增高(P=0.028)。8月龄AD小鼠脑内MKP-1可以染出斑块,且斑块数目(6.00±4.06)明显低于4G8所染的老年斑数目(25.60±5.86,P=0.000),免疫荧光共聚焦观察到二者有部分共表达现象。结论 MKP-1在AD小鼠脑内的表达随年龄增长而下调,且可能与老年斑的形成及AD的发生相关。     

严重烧伤后大鼠脑组织AQP4的表达变化及其与血浆AVP的相关性

背景：严重烧伤后脑水肿常发生在烧伤后早期,是导致病人死亡的重要原因之一。研究烧伤后脑水肿发生、发展规律,探讨其发生机制,对临床早期诊断、治疗具有十分重要的意义。 目的：研究严重烧伤后脑水肿病理过程中AQP4 及其mRNA表达变化及其与血浆AVP水平的相关性。 设计和实验时间：本实验于2007年在重庆医科大学神经科学试验中心设计,并于2008年在重庆医科大学神经科学研究中心完成。 材料：健康成年wistar大鼠180只,雌雄不拘,体重250g-300g,由重庆医科大学实验动物中心提供。免疫组化试剂盒、原位杂交试剂盒购自北京中山公司和博士德生物公司。 方法：采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型,干湿重法测脑组织含水量,免疫组化、原位杂交、Western blotting、RT-PCR检测AQP4及其 mRNA的表达变化,并用放射免疫分析法（RIA）观察血浆AVP水平的动态变化。 结果：严重烧伤后脑含水量有不同程度增加,AQP4及其 mRNA在视上核、视交叉上核、室旁核、海马、脉络丛、大脑皮质等部位表达上调,Western blotting、RT-PCR结果与免疫组化和原位杂交结果基本一致。血浆AVP水平在烧伤后也有不同程度升高,烧伤后6h达高峰。在整个脑水肿过程中,AQP4及其mRNA的表达分别与血浆AVP水平呈高度正相关（r=0.848,P<0.01;r=0.807, P<0.01）。 结论:严重烧伤后AQP4及其 mRNA表达增强,提示其在烧伤后脑水肿形成过程中起重要作用。血浆AVP水平上调与AQP4及其mRNA表达规律一致,AVP可能对AQP4 及其mRNA在脑组织的表达有一定调节作用。     

对局部解剖学教与学的探索

为促进局部解剖学课程教学的实践和改革,提高教师的教学效果和医学生的学习效率,培养医学生的综合素质,本文着重从教师和学生两个角度,探讨在教学过程中影响教学效果的因素,并结合实际提出解决问题的方法和措施。     

慢性脑缺血对APP/PS1双转基因小鼠行为学及脑组织形态学的影响

目的:探讨慢性脑缺血对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠的行为学以及脑组织形态学的影响。方法:将20只3月龄APP/PS1 AD模型小鼠随机分成2组,每组10只,对其中一组采用改良的双侧颈总动脉狭窄术,另一组双侧颈总动脉未结扎小鼠为假手术对照组。术后1个月分别采用Morris水迷宫、组织学和免疫组化染色,检测模型组和假手术组小鼠行为学的改变、海马区神经细胞形态学的改变、海马区神经细胞内Neu N和APP及Aβ的表达变化。结果:行为学实验结果:(1)可视平台下,2组小鼠找到平台的时间(t=1.31,P=0.19)及搜索的平均路程(t=0.04,P=0.97)无显著差异;(2)隐蔽平台下,脑缺血模型组小鼠(26.39±1.37)找到平台的时间较假手术对照组(20.19±1.19)明显延长(t=3.44,P=0.00);(3)空间探索实验中,经过平台的次数,脑缺血模型组小鼠(3.11±0.37)较对照组(4.25±0.34)明显减少(t=2.24,P=0.03)。HE染色:脑缺血模型组小鼠海马内神经细胞明显肿胀、细胞排列紊乱。免疫组化结果:脑缺血模型组小鼠海马内Neu N阳性神经元数量(93.40±10.44)较对照组(156.20±24.16)显著减少(t=2.39,P=0.04);而APP-阳性神经元(t=2.35,P=0.047)、Aβ40-阳性神经元(t=2.54,P=0.04)以及Aβ42-阳性神经元(t=2.476,P=0.04)较假手术组明显增加。结论:本实验新建立的改良双侧颈总动脉狭窄术能导致小鼠慢性脑缺血;慢性脑缺血可加速APP/PS1双转基因AD模型小鼠的病理进程。     

数字化解剖实验平台在医学整合课程中的应用

为深化院校医学教育改革,重庆医科大学对临床医学专业五年制本科学生全面实施以器官系统为中心的临床医学整合课程教学模式。随着各年级学生不同器官系统整合课程的同时开展,实验室和授课教师出现周期性、暂时性紧缺现象,实验室存在尸体堆积、福尔马林超标等问题,学生反映学习困难等情况。文章就将数字化解剖操作实验教学平台配合重庆医科大学教学模式改革的实施,从平台构建和特点、应用体会和思考等两方面进行探讨,探索解剖教学新模式,以期进一步满足21世纪医学教育对复合性人才、高素质人才培养的要求。     

蛋白酶体抑制剂对神经细胞nicastrin表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂能否引起神经细胞内nicastrin(NCT)蛋白表达及分布的变化,以明确NCT的蛋白降解是否与蛋白酶体有关。方法:在用人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)建立稳定表达NCT细胞株的基础上,应用蛋白酶体抑制剂处理NCT细胞株,并结合Western blotting、放射性同位素脉冲示踪技术、免疫荧光双标技术,检测蛋白酶体抑制剂处理后神经细胞内NCT的蛋白表达变化。结果:Western blotting结果显示,特异性蛋白酶体抑制剂处理后,神经细胞内源性和外源性转染的NCT的表达显著增强,高度特异的蛋白酶体抑制剂lacta-cystin对NCT蛋白的增强效应呈剂量依赖性和时间依赖性;放射性同位素脉冲示踪结果显示,蛋白酶体抑制剂可显著增强细胞内新合成的NCT蛋白的表达水平,其增强作用是通过阻止[35S]-NCT的蛋白降解来实现的;免疫荧光双标结果提示,NCT与泛素在细胞内共存。结论:神经细胞内NCT的降解由蛋白酶体途径介导;NCT在降解之前经泛素化修饰。     

人体解剖标本考试评价方法的实践与探索

医学是一门实践性很强的应用学科,医学生动手操作及临床实践能力的高低是评价医学教育质量的重要指标之一。人体解剖学不仅是重要的基础学科,也是基础医学向临床医学过渡的桥梁学科,采用恰当的教学手段提高学生实践和动手能力对于其他基础医学和临床医学课程的学习具有举足轻重的作用,而人体解剖标本的学习和考试是实现这一教学目标极其重要的方式[1]。本文现将人体解剖标本考试评价方法的实践与探索报告如下。     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

实验性早期糖尿病大鼠视网膜水通道蛋白4及其mRNA的表达变化

目的:探讨实验性早期糖尿病鼠视网膜水通道蛋白4(AQP4)及其mRNA的表达变化及其意义.方法:用链脲菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射的方法建立大鼠糖尿病模型,运用墨汁灌注实验检测视网膜微血管渗漏情况;用免疫荧光组织化学检测AQP4存视网膜内的分布和表达变化;用原位杂交和RT-PCR检测AQP4 mRNA在视网膜内的分布及表达变化.结果:与同龄正常对照组大鼠相比,早期糖尿病鼠视网膜末见明显血管渗漏现象,但存在部分细胞水肿、节细胞数目减少、感光细胞外节排列紊乱等病理改变;免疫组织化学、原位朵交和RT-PCR结果显示.模型鼠视网膜内AQP4及其mR-NA的表达明显增强.结论:实验性早期糖尿病鼠视网膜.在微血管病变发生前,已存存细胞水肿等病理改变;AQP4及其mRNA的表达明显上调.AQP4表达上调可能是糖尿病早期视网膜水肿形成、视功能下降的重要原因.