逆转录酶活性检测方法在金黄仓鼠中的应用

目的应用逆转录酶活性检测方法对金黄仓鼠及其它动物血清、细胞进行检测。方法根据雀麦草花叶病毒RNA序列设计一对引物,加入样品对RNA进行逆转录PCR,电泳观察有无特异条带以确定样品中是否含有逆转录酶。结果在兔、豚鼠、大鼠以及仓鼠血清中检出逆转录酶活性阳性样本。结论该方法具有良好的敏感性和特异性,可以应用于动物血清中逆转录酶活性的检测。     

乙型脑炎病毒结构蛋白C＋pre M和E基因的克隆与序列分析

目的 对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)结构蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定.方法 根据GenBank中发表的乙脑病毒结构蛋白基因C + pre M基因和E 序列,设计合成两对引物,以JEV Nakayama-NIH株RNA为模板,反转录并扩增目的 cDNA,然后与 pGEM-T easy载体连接并转化大肠杆菌DH5α菌株,提取的重组质粒用电泳、PCR和酶切鉴定后并进行测序.将JEV Nakayama-NIH与GenBank中报道的多株JEV结构蛋白C + pre M 基因和E基因序列进行了比较.结果 Nakayama-NIH与其他参考株C + pre M和E基因的核苷酸同源性为99%,证实扩增克隆的是JEV的结构蛋白C + pre M和E基因.结论 对JEV分子生物学特征进行了分析,为JEV特异性核酸探针的研制奠定了基础.     

生物净化前后长爪沙鼠微生物和寄生虫携带情况的比较

目的 比较生物净化前后长爪沙鼠微生物携带情况.方法 采集生物净化前后长爪沙鼠的气管、回盲部样本,经血平皿培养后,分离菌落进行纯培养,利用细菌鉴定仪进行菌种鉴定;气管经研磨后,转入选择性培养基鉴别培养;分离血清进行泰泽病原体抗体检测.结果 生物净化后F1代、F2代和F3代长爪沙鼠泰泽病原体血清抗体检测均为阴性,生物净化后的其他微生物和寄生虫普查结果也表明,各项检测中均未发现清洁级啮齿类动物中需排除的病原微生物和寄生虫.结论 剖宫产和代乳技术能有效减少长爪沙鼠携带的微生物和寄生虫.     

五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。     

试论我国实验动物质量监测网络建设与发展策略

阐述和分析我国实验动物质量监测网络建设及现存问题，针对检测市场开放而带来的国内、外检测资源之间竞争加剧这一新形势，提出我国实验动物质量监测网络发展的主要方向和对策。     

实验小鼠Sendai病毒抗体ELISA方法标准化的研究

在建立Sendai病毒抗体ELISA检测方法的基础上,我们开展了对其敏感性、特异性、重复性等方面的研究,并应用于对不同等级实验小鼠群Sendai病毒抗体的检测中。通过对ELISA系统的测试和改进,使之达到标准化,提高了实验结果的准确性。     

嗜血杆菌属CODEHOP PCR检测方法的建立及在树鼩检测中的应用北大核心CSCD

目的建立树鼩中嗜血杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为树鼩微生物质量控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对NCBI中6株嗜血杆菌的外膜蛋白序列设计简并引物。通过4株嗜血杆菌标准菌株和24株它属菌株进行特异性和敏感性评价,将建立CODEHOP PCR检测方法,应用于树鼩嗜血杆菌的检测。结果简并引物HF1/HR8和HF3/HR3扩增标准菌株副鸡嗜血杆菌(ATCC 29545)、溶血嗜血杆菌(ATCC 33390)、流感嗜血杆菌(ATCC33391)、副流感嗜血杆菌(ATCC 33392)的目的片段分别为506bp^535bp和344bp^390bp,经测序和NCBI Blast比对,结果准确。两对引物组合,能够有效的区分嗜血杆菌属菌株与它属菌株,检测限最低可达2.1pg/μL。在受试的野生树鼩呼吸道样本中嗜血杆菌阳性率为33.3%(20/60)。结论所建立的方法具有较好的特异性和敏感性,操作简便,能够用于动物样品的嗜血杆菌检测。     

屏障内独立通风笼与敞口笼饲养雄性Balb/c小鼠的比较

目的：采用独立通风笼（individually ventilated cage, IVC）饲养实验小鼠,积累运行经验和背景数据。方法80只5周龄 SPF 级雄性 Balb/c 小鼠,在屏障内同室分别饲养在换气参数为70、50和30次/h 的 IVC 系统及敞口笼内8周,各设置5只/笼和10只/笼2种饲养密度;每周逐只称重、第8周进行大体剖检,主要脏器称重;以Excel 软件绘制体重曲线,以 SPSS 软件统计各饲养组两两间差异。结果①5只/笼饲养的动物体重曲线优于10只/笼;②与设置为30和70次/h 换气的 IVC 相比,无论是5只/笼或10只/笼饲养,换气50次/h 的 IVC 饲养动物体重曲线平滑度及趋势均更加接近5只/笼传统敞口饲养;③组间体重未因饲养设施或密度因素造成显著差异（P＞0.05）;④IVC 在30次/h 换气5只/笼饲养比敞口10只/笼饲养时的肝脏系数显著高（P ＜0.05）,该参数的其它组间、及其它脏器系数值均未见组间差异显著（P ＞0.05）。结论根据实验结果,推荐该型号 IVC 换气次数设置为50次/h,饲养 Balb/c 小鼠密度5只/笼为佳。     

嗜肺巴斯德杆菌研究进展

嗜肺巴斯德杆菌(Pasteurella pneumotropica)是一种条件致病菌,人兽共患。主要危害啮齿类动物,特别是免疫缺陷或抑制的动物,可引起炎症和脓肿等症状。该菌是实验动物中感染率最高的病原菌之一,多呈隐性感染,给动物实验带来了极大的干扰。本文针对嗜肺巴斯德杆菌的流行病学、检测和鉴定、分子分型和防治等方面进行综述。     

小鼠腺病毒PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立小鼠腺病毒（MAdV） PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MAdV的检测.方法 根据已发表的小鼠腺病毒（MAdV） E1B基因序列,设计合成引物.建立RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证.用建立的方法对65只长爪沙鼠、12只小鼠进行检测.结果 建立的MAdV PCR检测方法与小鼠微小病毒、多瘤病毒无交叉反应;以MAdVDNA为模板,所能检测DNA最小模板浓度为1.67 pg/μl,可检测病毒最小滴度为10-7/ml; MAdVDNA在-30℃冰箱放置12个月,仍能扩增出大小约606 bp的可见目条带.经PCR检测,65只沙鼠和12只小鼠均为阴性.结论 建立的小鼠腺病毒（MAdV） PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于小鼠、长爪沙鼠等实验动物MAdV的检测.