应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

实验鼠群的健康监测管理

虽然实验鼠种群的总体健康水平得到了显著的提高,但还是有很多重要的传染性病原体在实验鼠群中流行.实验鼠群的健康状况对于动物福利、科学研究甚或人类健康都很重要.所以必须要对实验鼠群进行健康监测.笔者依据自身的实践和经验,对鼠群健康监测的基本原理进行了分析,包括以下的内容:鼠群健康监测的必要性、健康检测规程的建立、哨兵鼠、常...     

仙台病毒RT-PCR检测方法的建立及灰仓鼠中流行情况调查

目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV RT-PCR方法显示有较好的敏感性和特异性:以仙台病毒为模板扩增产生197 bp的单一目的条带,经测序比对与NCBI数据库中SV相关序列的一致率为98%,而以猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型及腮腺炎病毒为对照无任何条带产生;能检出的SVcDNA最低浓度是96.8 ng/mL;用该方法检测60份灰仓鼠,SV的感染率为3.33%(2/60)。结论建立的SV RT-PCR方法可用于实验类啮齿动物动物SV的常规检测,自然条件下灰仓鼠感染SV的问题不容忽视。     

抗树鼩、灰仓鼠和长爪沙鼠IgG抗体的制备及标记

目的 制备抗树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠IgG抗体,并分别用异硫氰酸荧光素和辣根过氧化物酶进行标记.方法 采用Protein G分别提纯树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠血清中的IgG,纯化后免疫家兔,制备兔抗三种动物IgG抗体;采用亲和层析纯化兔抗三种动物IgG抗体,并分别进行FITC和HRP标记.结果 分别获得抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG抗体,浓度分别为:2.2 mg/ml、2.3 mg/ml和2.3 mg/ml; FITC标记的兔抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG含量分别为:1.19 mg/ml,1.36 mg/ml和1.55 mg/ml; HRP标记的兔抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG含量分别为:0.84 mg/ml、1.09 mg/ml和1.31 mg/ml.结论 得到了适合检测用的FITC和HRP标记二抗,为建立这三种动物致病微生物和寄生虫检测方法提供了试剂.     

全国药检系统实验动物工作情况及建议

目的 为提升药检系统实验动物工作对食品、药品、医疗器械检验检测工作的技术支撑能力和服务保障水平提供依据和参考.方法 采用调查问卷的方式对调查数据进行汇总统计,全面了解我国药检系统实验动物的生产、使用和管理水平,分析存在的主要问题,提出建设性意见.结果与结论 建议加强机构管理和人员队伍的建设,提高实验动物质量,丰富实验动物资源,推动实验动物工作的可持续发展.     

豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用

目的 建立以弓形虫重组抗原的豚鼠弓形虫抗体ELISA方法,并进行初步应用.方法 根据重组抗原的工作浓度包被酶标板,确定酶标二抗浓度,对方法的特异性、灵敏度、稳定性和重复性等进行测试.结果 确定酶标二抗最佳稀释度为1∶8000;与豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、仙台病毒(SV)、肺炎病毒(PVM)及呼肠孤3型(Reo3)阳性血清均无交叉反应;对已知阳性血清的检测上限可达1∶2560;6个月的稳定性试验显示A490值的相对偏差均小于15％;批内变异系数(CV)5.7％ ～ 9.5％,批间变异系数(CV)1.9％～9.0％;对182份样本的检测表明豚鼠弓形虫抗体阳性率为7.14％(13/182),与IFA检测结果的符合率为100％,与商品化试剂盒的阳性符合率为92.3％,阴性符合率为100％.结论 建立的豚鼠弓形虫重组抗原ELISA检测方法可用以弓形虫抗体的常规检测.     

实验动物设施环境检测实验室的建立

目的为食品药品的检验工作提供条件保障。方法介绍实验动物设施环境检测实验室建立的过程及其对中国食品药品检定研究院发展的重要意义。结果获得了进行实验动物设施环境检测的资质。结论应总结工作经验,提高环境检测实验室对内对外进行环境检测服务的质量。     

模式小鼠总DNA三种提取方法比较

目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。     

脑心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立脑心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物EMCV的检测.方法 根据已发表的EMCV VP1基因序列设计合成引物.建立RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证.用该方法检测62只长爪沙鼠、12只小鼠.结果 建立的EMCV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定.以EMCV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为4.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-7mL-1.经RT-PCR检测,62只沙鼠均为阴性;12只小鼠中有1只EMCV核酸阳性,测序结果与GenBank中EMCV标准株核苷酸序列进行比对,其同源性为85%.结论 建立的脑心肌炎病毒（EMCV）RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物EMCV的检测.