呼肠孤病毒Ⅲ型免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的 建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素最佳工作浓度。并进行特异性、敏感性和稳定性试验。结果选取BSC-1细胞作为Reo3敏感细胞,病毒感染力滴度(TCID50)为10-5.8/mL;免疫荧光素最佳工作浓度为1∶100;与小鼠鼠痘(Ect)病毒、小鼠肝炎(MHV)病毒均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1∶1280;可检测到的病毒滴度最低为10-4.1/mL。结论建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于人用动物源性生物材料及生物制品Reo3的检测。     

TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究

目的:建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法:针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测。结果:建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100%。对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本。结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支...     

猴腺病毒(SAdV)PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立SAdV特异的PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法比对分析多株SAdV序列,设计SAdV特异引物,优化PCR实验条件,建立的PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品,阳性产物测序并构建进化树。结果经特异性和敏感性鉴定,在设计的5对引物中确定一对最佳引物,可以区分SAdV和MAD,ICH,CELO且可以检测到的最小DNA量为47.9 pg/mL。PCR方法检测实验猴群,阳性率49.2%,测序及进化分析表明,SAdV感染型别呈广泛基因多样性。主要分布在G亚属和以SAdV-49为代表的分支。结论经测序验证,PCR检测方法具有很好准确性,初步应用表明我国实验猴群中SAdV高度流行,应加强实验猴群及相关生物制品中SAdV的监测,避免人类感染SAdV的潜在风险。     

呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法的建立

目的建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Reo3RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-9/mL。结论建立的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。     

微生物法检测实验动物血清中的抗生素残留

目的建立实验动物血清中抗生素残留检测方法,保证微生物质量检测结果的准确。方法采用微生物抑制法,用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌,对1640份实验动物血清进行抗生素残留检测。并与Premi@Test抗生素检测试剂盒进行比对。结果在受试样品中,检测出小鼠、大鼠、豚鼠、兔和犬的血清中存在抗生素残留,阳性率分别为27.2%、16.4%、39.9%、23.7%和47.6%。抽取82份血清和18份阴阳对照品,与Premi@Test检测的结果相比较差异不显著(X2=16.680,P>0.05)。血清中抗生素的残留与DHL琼脂平皿的菌落生长有一定相关性(X2=9.939,P<0.05)。结论本研究采用嗜热脂肪芽孢杆菌作为指示菌的微生物抑制法,能够对动物血清中的抗生素进行检测,具有良好的敏感性和重复性,成本低,操作简便。为实验动物体内抗生素残留检测和微生物学检测结果的准确性提供依据。     

实验动物环境及设施国家标准修订初探

目的 探讨实验动物环境及设施相关国家标准问题,为食品药品检定提供技术保障.方法 通过比较2010版与2001版实验动物环境及设施国家标准（GB 14925）的内容,对修订的部分进行分析和评述.结果与结论 深入理解实验动物设施环境检测的相关国家标准,提升环境检测的质量,才能确保实验设施符合国家标准规定.     

分泌抗小鼠白血病病毒（MuLv）单克隆抗体杂交瘤的建株、初步鉴定和应用

分泌抗小鼠白血病病毒（ＭｕＬｖ）单克隆抗体杂交瘤的建株、初步鉴定和应用贺争鸣，卫礼，吴惠英（中国药品生物制品检定所，北京１０００５０）鉴于ＭｕＬｖ的所有毒株具有共同的群特异性抗原，本文选用经Ｘ－Ｃ细胞空斑形成等试验证实携带有ＭｕＬｖ的细胞（ＳＲＳＶ感...     

国外动物实验替代法研究的现状与发展——法规、培训教育及专业期刊

1 法规的制定 美国慈善协会(1877年)和动物福利研究所(1951年)、澳大利亚和新西兰的研究与教育用动物管理委员会(1987年)、国际伦理学研究基金会等先后颁布了<动物福利法>、<人道主义饲养和使用实验动物的公共卫生方针>、<动物研究论争>等法规性文件.这些法规主要是从动物保护(或动物权力)这一角度出发,并不是从动物试验的角度来谈善待动物对我们的科学试验有什么益处.与现在我们所谈论的3R中的"优化"是有一定差距的.     

实验动物生物学特性数据化表达的规范化与数据共享

生物学特性数据化表达是实验动物标准化的内容之一,也是实验动物资源共享平台建设的重要组成部分和实现资源整合与共享的条件之一.制定实验动物资源描述规范和有关规程,对实验动物生物学特性和基本信息进行规范化和标准的整理和描述,可为科技工作者提供深入、详尽的资源信息,推动实验动物资源的建设与共享.     

大鼠性别间中医体质差异的初步评价

对北京市目前常用的实验大鼠不同性别间的中医体质差异进行初步评价.大鼠包括Wistar(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级),SD(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级),CD(SD)IGS(Ⅲ级),SHR(Ⅰ级),SHR/sp(Ⅰ级),均雌雄各10只,除Ⅲ级CD(SD)IGS大体重(雄性400±20 g,雌性270±20 g)组大鼠外,体重均为200±20 g.观测了外观,大便,舌象,体温,肾上腺、胸腺、脾脏湿重,测定了下丘脑-垂体-甲状腺轴相关功能.结果发现,Ⅰ级Wistar大鼠雌雄间体质无明显差异.Ⅱ级Wistar大鼠雄性体质相对于雌性偏热.Ⅲ级Wistar大鼠雌性体质相对于雄性明显偏热.Ⅰ级SD大鼠雌性体质相对于雄性明显偏热.Ⅱ级SD大鼠雌雄间体质无明显差异.Ⅲ级SD大鼠雄性体质相对于雌性偏热.小体重Ⅲ级CD(SD)IGS大鼠雌性体质相对于雄性明显偏于实热.大体重Ⅲ级CD(SD)IGS大鼠雌性体质相对于雄性偏热.Ⅰ级SHR大鼠雌雄间体质无明显差异.Ⅰ级SHR/sp大鼠雌性体质相对于雄性明显偏热.结果提示,不同品种、年龄和微生物级别大鼠的中医体质在性别间均可能存在差异.