第八届生命科学研究中动物实验替代方法国际大会简介

1 大会概况 2011年8月21～25日,第八届生命科学研究中动物实验替代方法国际大会在加拿大蒙特利尔召开.来自52个国家、地区和国际组织约800余代表参会,包括欧洲动物试验替代方法验证中心(European Center for the Validation of Alternative Methods, ECVAM)、机构间替代方法验证协调委员会(Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods, ICCVAM)、日本动物试验替代方法验证中心(Japanese Center for the Validation of Alternative Methods, JCVAM)、韩国动物试验替代方法验证中心(Korea Center for the Validation of Alternative Methods, KoCVAM)、美国动物试验替代方法研究中心(Center for Alternatives to Animal Testing, CAAT)、英国皇家防止虐待动物协会(RSPCA)、美国仁慈协会( The Humane Society of the United State,HSUS)、美国反对解剖动物协会( American Anti-Vivisection Society,AAVS)等.     

猫疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-1）PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1TK基因序列设计合成引物,并以此建立FHV-1的PCR检测方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。用建立的方法对15份猫临床样品进行检测。结果建立的FHV-1PCR检测方法与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（FPV）均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为7lg TCID50/ml,相应的DNA模板浓度为1.46×102拷贝/ml;FHV-1DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用该方法从15份猫临床样本中检测出10份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点,适合于临床FHV-1的感染检测。     

泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的—立及应用

目的 建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物(MGB)探针荧光定量PCR检测方法.方法 针对泰泽氏菌16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年采集的1156份临床样本进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照.结果 泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应,检测灵敏度达2.2 copy/μl.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.204,PCR效率为100％.对1156份临床样本进行检测,荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本,而普通PCR则仅检出44份.荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h.结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性,适于泰泽氏菌的快速检测.     

牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用

目的建立用于牛源性样本中牛副流感病毒3型(BPIV3)RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BPIV3神经氨酸酶(HN)基因高度保守区域作为靶基因,设计合成引物,建立BPIV3 RT-PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测137份牛源性样本。结果建立的BPIV3RT-PCR方法与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛鼻气管炎病毒(BHV-1)、仙台病毒(SV)均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为6 lgTCID_(50)/mL;BPIV3cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带;应用建立的方法检测137份牛源样本,核酸阳性率为14.6%。结论建立的BPIV3荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BPIV3核酸的检测。     

树鼩副粘病毒(TPMV)PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩副粘病毒(Tupaia paramyxovirus,TPMV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TPMV基因组序列,选择8231 bp~8720 bp区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。根据TPMV保守区域设计一对特异性引物,考察方法的特异性和灵敏度,并应用于60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA的检测中。结果所建立的PCR检测方法特异性好,灵敏度高,可达11.5×10-5μg/m L。60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA检测均为阴性。结论建立的树鼩副粘病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩副粘病毒的常规检测中。     

小鼠腺病毒单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤技术获得４株分泌抗小鼠腺病毒（ＭｕｒｉｎｅＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＭＡｄ）单克隆抗体细胞株，并对其特性进行分析。经鉴定，它们所分泌的抗体类型均为ＩｇＭ，腹水效价为１０－３～１０－６。相对亲和力分别为０．１μｇ／ｍｌ（Ａ９）、０．６５μｇ／ｍｌ（Ｂｌ）、１２．５μｇ／ｍｌ（Ｇ４）和２３μｇ／ｍｌ（Ｄ４）。与其他１０种鼠源性病毒均无交叉反应，表明ＭｃＡｂ具有良好的特异性。单抗标记ＦＩＴＣ后用于人用鼠源性单抗制品及各种传代细胞和原代细胞中ＭＡｄ检测，获得良好的实验结果。     

实验犬布鲁氏杆菌诊断试剂的制备和应用

菌种：光滑型(S型)55010，粗糙型(R型)55307：中国医学菌种保藏管理中心。     

蓝氏贾第鞭毛虫诊断

目的：蓝氏贾第鞭毛虫作为一种重要的人兽共患寄生虫病贾第虫病的病原,其对SPF实验动物质量造成的潜在威胁不容忽视。本研究的目的是建立蓝氏贾第鞭毛虫快速诊断方法,并对17个生产厂家516批2562只SPF实验动物检查结果进行分析。方法用直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法,对蓝氏贾第鞭毛虫进行检测。结果在SPF实验动物中检出数量众多的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊,鉴定出蓝氏贾第鞭毛虫18S rDNA、β－giardin、TPI和GDH基因。直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法均能检出蓝氏贾第鞭毛虫。17个生产厂家516批2562只SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫阳性检出率22．9％（586／2562）。结论直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法具有高度的敏感性和特异性,可用于蓝氏贾第鞭毛虫的快速诊断。17个生产厂家516批SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫检查结果未能全部符合规定。     

蛋白G和蛋白A亲和层析技术在提纯大鼠IgG方面的效果比较

应用蛋白G-Sepharose CL-4B和蛋白A-Sepharose CL-4B亲和层析技术,在不同的实验条件下比较提纯大鼠IgG的效果,结果表明:蛋白G在大鼠IgG提纯方面明显优于蛋白A。在4℃条件下,效果更好,在提纯的IgG中主要是IgG2a和IgG2b。