不同小鼠品系囊胚受体对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响

目的 为了考察不同品系的小鼠囊胚对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响，进而提高通过在C57BL/6胚胎干细胞中同源重组制作基因打靶小鼠的效率。 方法 本研究除了选取近交系B6(Cg)-Tyrc-2J和BALB/c品系，还选了封闭群ICR作为囊胚供体鼠，通过在TLX3、Ai3K和SL三个不同基因修饰ES细胞的种系嵌合实验中，平行比较三者的囊胚利用率、嵌合鼠获得效率以及种系遗传效率等三个方面，并进一步针对囊胚来源这一因素对效率的影响进行统计学分析。 结果 本研究中三种ES细胞均未能通过B6(Cg)-Tyrc-2J品系囊胚的注射获得种系遗传。而BALB/c品系与ICR品系相比，囊胚利用率明显低于ICR品系（P< 0.05）；嵌合鼠获得效率方面，BALB/c与ICR相当（P= 0.115）；而种系遗传效率方面，BALB/c品系显著高于其他品系（P< 0.01）。 结论 BALB/c品系在C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率方面确实具有优势，然而，由于BALB/c囊胚较难获得，并且存在发育延迟和透明带脆性高等问题，而ICR品系在囊胚获得和利用方面的效率明显高于BABL/c，并且也可以支持C57BL/6胚胎干细胞的种系遗传，因此也是C57BL/6胚胎干细胞囊胚注射中较好的选择。     

第八届生命科学研究中动物实验替代方法国际大会简介

1 大会概况 2011年8月21～25日,第八届生命科学研究中动物实验替代方法国际大会在加拿大蒙特利尔召开.来自52个国家、地区和国际组织约800余代表参会,包括欧洲动物试验替代方法验证中心(European Center for the Validation of Alternative Methods, ECVAM)、机构间替代方法验证协调委员会(Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods, ICCVAM)、日本动物试验替代方法验证中心(Japanese Center for the Validation of Alternative Methods, JCVAM)、韩国动物试验替代方法验证中心(Korea Center for the Validation of Alternative Methods, KoCVAM)、美国动物试验替代方法研究中心(Center for Alternatives to Animal Testing, CAAT)、英国皇家防止虐待动物协会(RSPCA)、美国仁慈协会( The Humane Society of the United State,HSUS)、美国反对解剖动物协会( American Anti-Vivisection Society,AAVS)等.     

树鼩副粘病毒(TPMV)PCR方法的建立及初步应用

目的建立树鼩副粘病毒(Tupaia paramyxovirus,TPMV)PCR检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI公布的TPMV基因组序列,选择8231 bp~8720 bp区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中,作为阳性标准质粒。根据TPMV保守区域设计一对特异性引物,考察方法的特异性和灵敏度,并应用于60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA的检测中。结果所建立的PCR检测方法特异性好,灵敏度高,可达11.5×10-5μg/m L。60份树鼩呼吸道咽拭子c DNA及12份树鼩肺组织c DNA检测均为阴性。结论建立的树鼩副粘病毒PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可用于树鼩副粘病毒的常规检测中。     

蓝氏贾第鞭毛虫诊断

目的：蓝氏贾第鞭毛虫作为一种重要的人兽共患寄生虫病贾第虫病的病原,其对SPF实验动物质量造成的潜在威胁不容忽视。本研究的目的是建立蓝氏贾第鞭毛虫快速诊断方法,并对17个生产厂家516批2562只SPF实验动物检查结果进行分析。方法用直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法,对蓝氏贾第鞭毛虫进行检测。结果在SPF实验动物中检出数量众多的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊,鉴定出蓝氏贾第鞭毛虫18S rDNA、β－giardin、TPI和GDH基因。直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法均能检出蓝氏贾第鞭毛虫。17个生产厂家516批2562只SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫阳性检出率22．9％（586／2562）。结论直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法具有高度的敏感性和特异性,可用于蓝氏贾第鞭毛虫的快速诊断。17个生产厂家516批SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫检查结果未能全部符合规定。     

牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用

目的建立用于牛源性样本中牛副流感病毒3型(BPIV3)RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BPIV3神经氨酸酶(HN)基因高度保守区域作为靶基因,设计合成引物,建立BPIV3 RT-PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测137份牛源性样本。结果建立的BPIV3RT-PCR方法与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛鼻气管炎病毒(BHV-1)、仙台病毒(SV)均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为6 lgTCID_(50)/mL;BPIV3cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带;应用建立的方法检测137份牛源样本,核酸阳性率为14.6%。结论建立的BPIV3荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BPIV3核酸的检测。     

泰泽氏菌TaqManMGB探针荧光定量PCR方法的—立及应用

目的 建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物(MGB)探针荧光定量PCR检测方法.方法 针对泰泽氏菌16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年采集的1156份临床样本进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照.结果 泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应,检测灵敏度达2.2 copy/μl.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.204,PCR效率为100％.对1156份临床样本进行检测,荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本,而普通PCR则仅检出44份.荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h.结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性,适于泰泽氏菌的快速检测.     

小鼠腺病毒单克隆抗体的研制及初步应用

应用杂交瘤技术获得４株分泌抗小鼠腺病毒（ＭｕｒｉｎｅＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＭＡｄ）单克隆抗体细胞株，并对其特性进行分析。经鉴定，它们所分泌的抗体类型均为ＩｇＭ，腹水效价为１０－３～１０－６。相对亲和力分别为０．１μｇ／ｍｌ（Ａ９）、０．６５μｇ／ｍｌ（Ｂｌ）、１２．５μｇ／ｍｌ（Ｇ４）和２３μｇ／ｍｌ（Ｄ４）。与其他１０种鼠源性病毒均无交叉反应，表明ＭｃＡｂ具有良好的特异性。单抗标记ＦＩＴＣ后用于人用鼠源性单抗制品及各种传代细胞和原代细胞中ＭＡｄ检测，获得良好的实验结果。     

实验犬布鲁氏杆菌诊断试剂的制备和应用

菌种：光滑型(S型)55010，粗糙型(R型)55307：中国医学菌种保藏管理中心。     

“用于科学目的的动物保护欧共体条例(2010/63/EU)”对我们的启示

1 2010/63/EU指令的背景 为落实《用于实验和其他科学目的的脊椎动物保护欧洲公约》的要求,协调各成员国的国内立法,确保为实验目的或其他科学目的而需要使用动物时,消除贸易壁垒,防止竞争出现扭曲,避免影响共同市场的建立和功能,1986年11月24日欧共体在布鲁塞尔颁布了《关于使各成员国有关用于实验和其他科学目的的动物的保护的法律、法规和行政规章接近的理事会指令》(86/609/EEC).该指令充分体现了对待实验动物和动物实验的3R原则.