骨髓间充质干细胞与K562细胞共培养对IL-8表达的影响

为了探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）与白血病细胞共培养后对血管生成因子IL-8表达的影响,本研究建立了MSC和K562细胞的共培养体系,包括直接接触和MSC条件培养液,应用RT-PCR方法检测MSC和K562细胞IL-8mRNA的表达。结果显示,与MSC直接接触和经MSC条件培养液作用后,K562细胞IL-8的表达均明显高于K562细胞单独培养组（p〈0.01）。与K562细胞共培养的MSC,其IL-8的表达亦明显高于单独培养的MSC（p〈0.01）。结论：MSC与K562细胞通过直接接触和某些细胞因子相互作用可促进血管生成因子IL-8的表达。     

支气管肺泡灌洗液二代测序在指导血液肿瘤患者伴发难治性肺部感染诊治中的应用

目的:探索对于经验性抗感染过程中疗效不佳并伴有新的肺部影像学变化化疗后感染的血液肿瘤患者,在纤维支气管镜(纤支镜)下行支气管肺泡灌洗(BAL)后,取支气管肺泡灌洗液(BALF)二代测序(NGS)方法进行病原学检查,根据所确定的病原体指导抗感染治疗的策略.方法:收集化疗后出现发热并给予经验性抗感染治疗后再次或持续发热4例...     

多西环素对多发性骨髓瘤中MMP-2、MMP-9表达的影响

目的：研究多发性骨髓瘤（MM）患者基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及临床意义,并进一步研究多西环素（DOX）对MM细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。方法：收集MM患者外周血浆及骨髓标本,将患者分为新诊断组、缓解组和难治复发组,另选取34例我院健康体检者的外周血浆为正常对照组,17例我院血液科就诊的缺铁性贫血患者的骨髓为对照组,ELISA法检测MMP-2、MMP-9的表达;不同浓度DOX处理骨髓瘤细胞株H929一定时间后,Western blot法检测MMP-2、MMP-9的表达;联合使用Akt抑制剂MK-2206 2HCl和DOX处理H929一定时间后,Western blot法检测MMP-2、MMP-9表达的变化。结果：新诊断组患者外周血浆和骨髓中MMP-2、MMP-9的表达水平较正常对照组均明显增高（P<0.05）,治疗后缓解组患者MMP-2、MMP-9的表达水平较新诊断组下降,但仍高于正常对照组,而难治复发组患者MMP-2、MMP-9的表达水平再次升高,与新诊断组无明显差异;DOX 10和15 mg/L处理H929细胞能明显抑制M...     

系统性硬化症合并肺间质病变患者B淋巴细胞水平及其临床意义

目的 探讨系统性硬化症(SSc)合并肺间质病变(ILD)患者B淋巴细胞亚群水平及其相关影响因素。方法 根据高分辨率CT和肺功能检查结果,113例SSc患者分为合并ILD组(A组,58例)和未合并ILD组(B组,55例)。收集患者基本临床资料,检测患者外周血B淋巴细胞亚群比例,并分析其与SSc-ILD相关炎症指标的相关性。结果 A组血清IL-6水平和外周血浆细胞比例高于B组(P<0.01),记忆B淋巴细胞和总B淋巴细胞比例稍低于B组(P>0.05)。A组外周血浆细胞比例与CRP、IL-6水平呈正相关(r=0.048、0.014,P<0.05),总B淋巴细胞比例与IgG水平呈正相关(r=0.002,P<0.01)。结论 B淋巴细胞紊乱及高水平IL-6可能参与了SSc患者的ILD发生、发展过程。     

MRL/lpr狼疮鼠骨髓间充质干细胞表面粘附分子N-钙粘附蛋白表达增高并伴有骨髓中B淋巴细胞生成障碍

目的:观察MRL/lpr狼疮鼠骨髓的血液生成情况及骨髓微环境中骨髓间充质干细胞(bone marrow masenchymal stem cell,BMMSC)表面的粘附分子N-钙粘附蛋白(N-cadherin)的表达水平。方法:采集MRL/lpr狼疮鼠外周血进行血细胞计数;流式细胞术检测和分析狼疮鼠骨髓各系血细胞的比例;甲基纤维素半固体集落形成试验(CFU)检测狼疮鼠骨髓中CFU-pre-B、BFU-E、CFU-GM数目。分离培养狼疮鼠的BMMSC,Western blot检测其N-cadherin的表达。最后,分别用BMP/Smad通路的激动剂BMP-2和抑制剂Noggin处理BMMSC,尔后观察狼疮鼠BMMSC的N-cadherin的表达变化。结果:与C57BL/6小鼠比较,狼疮鼠的血红蛋白、红细胞计数和血细胞比容显著降低(P0.01;n=7);狼疮鼠骨髓中B220+细胞比例和CFU-pre-B数目均明显下降(P0.05;n=5)。狼疮鼠BMMSC的粘附分子N-cadherin的表达水平明显高于对照组(P0.05;n=3)。BMP-2处理狼疮鼠BMMSC后N-cadherin的水平下降,而在Noggin处理后N-cadherin表达则上调(P0.05;n=3)。结论:MRL/lpr狼疮小鼠骨髓中B淋巴细胞生成障碍。此外,小鼠骨髓微环境中BMMSC表面的粘附分子N-cadherin水平升高,其可能参与了MRL/lpr狼疮小鼠的骨髓血液生成异常。     

骨髓间充质干细胞对造血干细胞"干性"的保持作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对造血干细胞(HSCs)"干性"的保持作用及其机制.方法 免疫磁珠分离纯化脐血HSCs-CD34+细胞,并分组培养:A组,CD34+细胞单独培养;B组,加细胞因子;C组,加细胞因子和MSCs(直接接触);D组,加细胞因子和MSCs(不接触);E组,加MSCs(直接接触);F组,加Mscs(不接触).0、7、14 d分别计扩增倍数、单位细胞数形成集落能力、CD34+比率,计数7 d时各组CD34+、CD34+CD38-比率.结果 随着时间延长扩增倍数增加(尤其B组),形成集落的能力和CD34+细胞比率渐下降,但E、F组下降不明显.结论 以MSCs为滋养层,对HSCs扩增作用不明显,但可更好地保持HSCs的"干性";这种保持"干性"的作用依赖于细胞与细胞间的相互黏附作用.     

慢性粒细胞白血病骨髓间质干细胞NF-κB基因表达的变化及意义

目的 探讨慢性期慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间质干细胞(BMMSCs)体外生长特性和核转化因子κB(NF-κB)mRNA表达的变化及意义.方法 选择5例慢性期CML患者为A组和6例健康人为B组,取骨髓单个核细胞行BMMSCs体外培养,观察BMMSCs体外生长形态并计数,绘制生长曲线.取第3、4代BMMSCs提取总RNA、逆转录RT-PCR检测NF-κB mRNA表达量.结果 CML患者BMMSCs生长活性较对照组无明显差别,但其NF-κB mRNA表达量较对照组升高(P<0.05).结论 CML患者BMMSCs中NF-κB基因高表达影响CML发病.     

脐带间充质干细胞治疗结缔组织病不良反应分析

目的 :探讨脐带间充质干细胞(UC-MSC)治疗结缔组织病的安全性。方法 :80例次接受UC-MSC静脉输注治疗的结缔组织病患者作为研究对象,按不同病种、一次及多次治疗、血沉、补体进行分组,统计分析各种不良反应的发生率,并对不良反应的危险因素进行Logistic多因素回归分析,判断具有独立作用的危险因素。结果:发生不良反应36例次,发生率为45.0%(36/80);其中发热最多,占总体不良反应的58.3%(21/36),其余分别为头痛、头昏、乏力、恶心、胸闷、潮红、口干和肌肉酸痛。系统性红斑狼疮(SLE)患者中发热占42.9%,非SLE组患者中发热占17.3%,SLE组发热概率明显高于非SLE组(χ2=6.137,P=0.013)。一次治疗组有反应的例次22例(61.1%),多次治疗组有反应的例次15例(34.1%),一次治疗组不良反应发生率高于多次治疗组,两组之间比较差异具有统计学意义(χ2=5.815,P=0.016);不同年龄、性别、血沉下降和血沉正常、低补体和正常补体组别之间不良反应无明显差别。Logistic多因素回归分析显示一次输注(β=1.944,OR=6.985)、SLE是不良反应的独立危险因素(β=1.352,OR=3.863)。结论 :UC-MSC静脉输注治疗结缔组织病的的不良反应主要为发热,SLE和一次输注是不良反应的高危因素。     

蛋白酶体抑制剂PS-341靶向干预多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞的实验研究

目的:分析蛋白酶体抑制剂PS-341对多发性骨髓瘤(MM)骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡及其对IL-6、IL-1β、SCF细胞因子表达的影响。方法:含10?S的1640培养液培养得到MSCs,流式细胞术(FCM)鉴定所培养细胞的表型,以终浓度分别为0 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、150 nmol/L、200 nmol/L的PS-341作用MSCs 4 h,光学显微镜观察细胞形态改变,荧光显微镜下Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-6、IL-1β、SCF细胞因子表达的变化。结果:PS-341可诱导MSCs凋亡,与其浓度成正比;与对照组(0 nmol/L PS-341)比较,浓度分别为50 nmol/L、100 nmol/L、150 nmol/L、200 nmol/L的PS-341作用MSCs 4 h后明显抑制IL-6、IL-1β、SCF的表达(P<0.05);PS-341对IL-6和SCF的抑制与PS-341浓度成正相关(P<0.05),在初发/难治复发和完全缓解(CR)两组患者间均无显著差异;对IL-1β的抑制在CR组较初发/难治复发组更明显(P<0.05);PS-341作用后IL-1β表达的强弱对IL-6及SCF的表达无影响。结论:PS-341诱导MM患者MSCs凋亡和抑制其IL-6、IL-1β、SCF的表达,是PS-341有效治疗MM的靶点之一。     

骨髓瘤细胞株对骨髓间充质干细胞FAP和APRIL表达的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)与骨髓瘤细胞株共培养对成纤维细胞激活蛋白(FAP)、增殖诱导配体(APRIL)和B细胞激活因子(BAFF)表达的影响。方法体外分离、培养BMSCs,并鉴定其成骨分化能力。实验分为BMSCs单独培养的阴性对照组(A组)、BMSCs与U266细胞共培养组(B组)和BMSCs与RPMI8226细胞共培养组(C组)。培养7d和12d后,采用RT-PCR方法检测BMSCs中FAP、APRIL和BAFF mRNA表达水平的变化。结果三组BMSCs形态相似,均具有成骨分化能力。与A组相比,B、C组培养7d后,APRIL、FAP mRNA表达降低(P<0.05),而7d和12d后的BAFF mRNA表达无统计学差异(P>0.05)。结论 BMSCs与骨髓瘤细胞株U266或RPMI8226共培养后,改变FAP和APRIL表达,从而参与骨髓瘤的病理过程。