肾移植术后患者基于肾动态显像法的肾小球滤过率的临床价值评估

摘要:通过基于美国核医学学会推荐为临床上测定GFR的金标准的99mTc-DTPA的双血浆法测量肾小球滤过率,肾动态显像法所得GFR与其比较,探讨肾动态显像法在肾移植后肾功能中的应用诊断价值。方法：使用基于99mTc-DTPA的双血浆法测量从2018年9月到2019年6月的108例肾移植患者的肾小球滤过率,通过gate法估计GRF,比较测得的GFR与双血浆法测得的GFR的相关性、准确度,评估ECT法的检验性能。结果：双血浆法测得GFR平均值为63.47 ml/(min*1.732),SPECT法测得GFR平均值为72.55 ml/(min*1.732),偏倚为9.08 ml/(min*1.732)。具有显著的相关性（r=0.703,P<0.0001）。在总体中患者的GFR偏移较大,因而行亚组分析,将病人按GFR高低分为高GFR组、低GFR组以及按性别分为男性组、女性组进行亚组分析,比较各亚组测得的GFR的检验性能。各亚组比较偏移最小的组为高GFR组,最大的组为低GFR组。准确度方面一般取P30作为参考,高GFR组的准确度为82.54%,具有最高的准确率,低GFR组的准确度仅为55.56 %。男女性分组间无明显差异。结论：肾动态显像法测量GFR的总体准确性尚可,得出的GFR总体偏大,各亚组分析后也存在较大偏移。但在高GFR组中的所测得的GFR准确较高,可以通过所得GFR公式的改进,获得较好的GFR结果,低GFR组测得数据准确度不够,仍需使用双血浆法。     

小鼠BTLA基因重组慢病毒载体的构建及鉴定

目的 :构建小鼠B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因重组慢病毒载体,探讨BTLA基因过表达对小鼠脾T淋巴细胞增殖及活化的影响。方法:以小鼠脾脏组织总RNA为模板,逆转录为c DNA,通过PCR技术扩增BTLA基因,构建p WPTS-m BTLA慢病毒载体,磷酸钙法感染人胚肾上皮细胞株293T细胞。RT-PCR及Western blot法检测BTLA m RNA和BTLA蛋白表达,50%组织培养感梁剂量(TCID50)法检测重组慢病毒滴度。通过感染p WPTS-m BTLA及p WPTS-GFP慢病毒载体的293T细胞与小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,初步研究BTLA基因过表达对小鼠脾T淋巴细胞活化与增殖的影响。结果:成功构建小鼠p WPTS-m BTLA慢病毒载体,并制备高滴度病毒颗粒(1.3×108pfu/ml)。通过对比实验组与对照组小鼠脾T淋巴细胞的增殖结果 ,发现4 d及8 d T细胞的增殖效应均明显受抑制,差异具有统计学意义(P<0.05),且这种抑制作用在0~8 d内具有时间依赖性。结论:过表达BTLA基因的293T细胞与小鼠脾T淋巴细胞混合培养后对其增殖及活化有抑制作用,提示成功构建具有生物学效应的小鼠BTLA基因重组慢病毒载体。     

尿毒症毒素与心血管病变

尿毒症患者中的心血管病变是一个重要的临床问题，并且是首要的死亡原因，占尿毒症患者所有死因中的45％。与同年龄、同性别的正常人相比，尿毒症患者发生心血管病变的危险性高20倍。现在已经广泛地认识到在尿毒症患者中存在一些特异性和非特异性的心脏和心外血管的结构及功能改变，     

高糖诱导大鼠血管平滑肌细胞转分化的作用

目的:观察高糖对体外培养的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)功能以及与成骨细胞转分化相关蛋白表达的变化,探讨糖尿病血管病变的可能细胞/分子发病机制. 方法:用组织贴块法建立SD大鼠胸主动脉VSMCs的体外培养技术;高糖(葡萄糖浓度:50 mmol/L)作用该细胞,设相同浓度甘露醇为对照组,观察在不同的培养时间下(3、12h和第3、6、9、12d),采用免疫蛋白印迹法和间接免疫荧光法分别检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和成骨细胞特异性核转录因子(core-binging factor α-1,Cbfα-1/RUNX2)的表达.细胞钙沉积含量测定观察培养细胞钙盐的沉积. 结果:组织贴块法培养的大鼠原代胸主动脉VSMCs呈梭型,α-SMA表达强阳性;高糖作用12h,VSMCs的Cbfα-1表达明显上升;高糖作用9d后,VSMCs的α-SMA表达量较高糖作用前降低近90%;免疫荧光染色显示VSMC细胞呈低强度的α-SMA染色阳性;同时,高糖作用下的VSMCs能够检测到OPN蛋白的表达,与对照组相比差异显著;高糖作用下细胞钙沉积含量明显增加. 结论:持续的高糖作用能够使动脉VSMCs发生向类似成骨样细胞的转分化,提示高糖诱导的VSMCs转分化可能参与糖尿病血管病变的发生发展.     

氟伐他汀抑制高糖诱导足细胞发生上皮—间叶细胞转分化

目的探讨他汀类药物保护高糖诱导的糖尿病肾小球损伤的可能机制。方法给予25mmol／L葡萄糖刺激的同时给予不同浓度的氟伐他汀处理分化后的足细胞36h。采用蛋白免疫印迹法检测旷平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维粘连蛋白（FN）、CD2相关蛋白（CD2AP）和Wilms肿瘤1基因（WT-1）蛋白的表达;间接免疫荧光法检测α-SMA。结果低糖（5．6mmol／L）条件下小鼠足细胞表达高水平的WT-1、CD2AP,基本不表达α-SMA和FN;予25mmol／L葡萄糖作用36h后,足细胞中α-SMA和FN表达水平升高,同时WT-1和CD2AP表达水平降低。在高糖条件下给予不同浓度的氟伐他汀处理,结果表明氟伐他汀可部分逆转高糖的上述作用,且存在一定的剂量依赖性。结论氟伐他汀可在一定程度上抑制高糖诱导的足细胞发生向间叶细胞表型的转分化。     

肾移植受者骨密度评估及影响因素分析

目的评估肾移植受者骨密度,分析影响因素,为肾移植术后骨质疏松防治提出方向。方法回顾性分析南京医科大学第一附属医院2017年1月至2019年5月收治的254例肾移植受者,年龄(40.5±9.8)岁,男性168例、绝经期女性15例。应用双能X线吸收测定法(DEXA)检测右股骨颈及腰椎骨密度,评估骨质疏松发生率,分析影响因素。结果 254例受者骨量减少/骨质疏松在右股骨颈的发生率为20.1 %和2.8 %,在腰椎的发生率为26.1 %和3.6 %。卡方检验示术后时间较长、高龄、绝经受者右股骨颈及腰椎骨量丢失发生率更高(P<0.05)。线性回归分析示右股骨颈骨密度与身体质量指数(BMI)、胆固醇、甘油三酯、术前甲状旁腺切除术史呈正相关,与急性排斥、绝经女性呈负相关;腰椎骨密度与BMI、胆固醇、术前甲状旁腺切除术史呈正相关,与甲状旁腺激素(PTH)呈负相关(P<0.05)。结论肾移植受者骨量丢失发生率较高。监测骨密度,控制甲状旁腺亢进、维持良好营养状态、减少糖皮质激素用量等,对防治骨量丢失有积极作用。     

肾移植受者BK病毒感染及其危险因素的单中心研究

目的：探究肾移植受者术后BK病毒感染发生率并分析肾移植术后BKV感染的相关危险因素。 方法： 回顾性分析2014年12月—2015年12月在南京医科大学第一附属医院接受同种异体肾移植术的157例受者资料,根据受者血清和尿液中BKV-DNA 拷贝数量的不同将研究对象分为正常组、BK病毒血症组、BK病毒尿症组,统计各组对象的年龄、性别、肾脏原发病、透析类型、免疫抑制方案、移植肾功能延迟恢复（delayed graft function , DGF）、HLA错配、群体反应性抗体（panel reactive antibody , PRA）、急性排斥反应、免疫诱导方案、术后3个月内皮质类固醇用量和术后肺部感染等相关资料,利用Logistic回归模型分析BKV感染的相关危险因素。 结果：157例肾移植受者中,BK病毒血症发生率为11.46%（18例）,BK病毒尿症发生率为35.03%（55例）。另外,确诊1例BK病毒相关性肾病（BK virus associated nephropathy , BKAVN）,发生率为0.63%。单因素分析结果示免疫抑制方案 (P=0.031)和术后3个月内皮质类固醇用量（P=0.037）与BK病毒尿症的发生相关,而多因素分析结果亦显示免疫抑制方案(P=0.041,OR=2.146)及术后皮质类固醇用量总量（P=0.042,OR=1.739）与BK病毒尿症的发生具有相关性。结论：本中心研究结果显示BK病毒尿症较BK病毒血症发生率高,但确诊为BKVAN仅为1例。术后应用以他克莫司为主的免疫抑制剂方案和术后3个月内皮质类固醇用量是肾移植术后受者BK病毒尿症发生的相关危险因素。     

M1型巨噬细胞极化在内皮细胞转分化及慢性移植肾失功中的作用

目的：探究M1型巨噬细胞极化在内皮细胞向间充质细胞转分化（endothelium?to?myofibroblast transition,EndMT）及慢性肾移植失功（chronic allograft dysfunction,CAD）中的作用。方法：从GEO公共数据库中下载GSE21374转录组测序数据,并使用Cibersort软件分析CAD患者移植肾中的免疫细胞的浸润状态。收集本中心CAD患者的移植肾切除标本,使用免疫荧光、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和蛋白质印迹法（Western blot,WB）等方法观察M1型巨噬细胞在移植肾组织中的浸润情况。体外脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）和干扰素?γ（interferon?γ,IFN?γ）诱导Raw264.7巨噬细胞向M1极化。Transwell小室构建M1型巨噬细胞和主动脉内皮细胞的共培养模型。使用PCR、WB和细胞免疫荧光观察共培养模型中内皮细胞的CD31与α?SMA的表达情况。结果：基于GEO公共数据库,发现单核?巨噬细胞明显浸润于CAD移植肾组织中（P＜0.05）;在本中心的CAD患者移植肾标本中,CD68（+）iNOS（+）M1型巨噬细胞亦明显浸润于肾小球及间质中,且M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的mRNA表达量明显增加（P＜0.05）。在细胞共培养模型中发现,M1型巨噬细胞可明显促进内皮细胞发生EndMT过程。结论：M1型巨噬细胞明显浸润于CAD患者的移植肾组织中,并可能通过诱导内皮细胞发生EndMT促进CAD的进展。     

功能磁共振弥散加权成像与弥散张量成像在肾移植术后的应用探讨

目的：通过比较肾移植术后发生肾功能延迟恢复（delayed graft function,DGF）与未发生DGF患者术后1个月的功能磁共振弥散加权成像（diffusion weighted imaging,DWI）和弥散张量成像（diffusion tensor imaging,DTI）所对应参数的差异,并分析这些参数与移植肾肾功能指标的相关性,进而评价功能磁共振在肾移植术后的应用价值。方法：回顾南京医科大学第一附属医院2015年9月—2017年5月的肾移植病例,共选取23例DGF患者和26例非DGF患者。运用独立样本t检验分别比较这两组患者移植肾DWI与DTI对应的参数表观弥散系数（apparent diffusion coefficient,ADC）和部分各向异性（fractional anisotropy,FA）值的差异;运用Pearson相关分析分别将ADC值和FA值与移植肾估计肾小球滤过率（estimated glomerular filtration rate,eGFR）和血清肌酐值进行相关性分析,分别绘制髓质ADC、FA值诊断移植肾eGFR >60 mL/min的受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线。结果：肾移植术后1个月,DGF组与非DGF组移植肾皮质和髓质FA值均具有统计学差异（P < 0.05）。术后1个月的移植肾髓质ADC值和FA值均与当时的eGFR呈正相关（P < 0.05）;术后1个月的移植肾皮质ADC值与术后6个月血清肌酐值呈负相关（P < 0.05）。移植肾髓质FA值诊断移植肾eGFR>60 mL/min的ROC曲线下面积（area under the curve,AUC）为0.799,95%置信区间（confidence interval,CI）为0.671~0.928（P < 0.001）;移植肾髓质ADC诊断移植肾eGFR>60 mL/min的ROC曲线AUC为0.796,95%CI为0.670~0.922（P < 0.001）。结论：功能磁共振DWI和DTI具有对移植肾的功能学和形态学评估价值。     

新型抗风湿病药物降低肾移植受者群体反应性抗体水平的回顾性研究

目的观察新型抗风湿病药物艾拉莫德降低肾移植受者群体反应性抗体(PRA)水平的有效性和安全性。方法回顾性分析35例因PRA阳性服用艾拉莫德的肾移植受者临床资料,观察治疗前后的PRA水平变化以及用药不良反应情况。结果 35例中4例因肺部感染停药未达随访时间,2例观察期间自行停药,3例失访,共纳入26例受者。服用艾拉莫德至9个月时复查PRA,207个位点中有71.5 %呈下降趋势,其中107个Ⅰ类位点中有69.9 %、41个Ⅱ类位点中有75.9 %呈下降趋势,治疗前后肾功能及免疫指标变化差异无统计学意义。血常规、肝功能、血脂、空腹血糖等指标变化无统计学意义。无其他不良反应。结论艾拉莫德可有效降低肾移植受者PRA水平,不良反应少,安全性高。