慢病毒介导的RNA干扰HMGA2基因表达对HL-60细胞增殖及细胞周期素B2、A2表达的影响

目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素(cyclin) B2、cyclin A2表达的影响.方法 制备表达HMGA2基因短发夹RNA(shRNA)的重组慢病毒载体,转染HL-60细胞.通过半定量RT-PCR和Western blot检测特异性shRNA转染后HL-60细胞HMGA2基因表达;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术(FCM)检测细胞周期; RT-PCR及Western blot检测cyclin B2、cyclin A2 mRNA和蛋白表达水平.结果 RT-PCR和测序证实,成功构建了表达HMGA2 shRNA的重组慢病毒载体;RT-PCR和Western blot证实经嘌呤霉素筛选出的阳性克隆转染的HL-60细胞HMGA2 mRNA和蛋白表达水平与空载体组相比明显受抑,抑制率分别达(80.66 ± 7.98)%和(76.35±12.72)%;CCK-8比色结果显示,HMGA2表达受到稳定干扰的HL-60细胞增殖活力明显受到抑制,细胞增殖曲线低平,缺乏指数增殖特征.FCM检测显示,与对照组相比,转染特异性shRNA的HL-60细胞出现了明显的G2/M期阻滞,G2/M期细胞分别为(13.90±4.07)%和(30.00±5.78)%(P<0.05).HMGA2特异性shRNA转染的HL-60细胞cyclin B2 mRNA和蛋白表达与未转染细胞相比,抑制率分别为(67.55±7.69)%和(51.77±4.81)%(P<0.01).而cyclin A2的表达无明显改变.结论 HMGA2基因沉默可下调cyclin B2表达,从而使细胞出现明显的增殖抑制和G2/M期阻滞.     

铜绿假单胞菌VgrG1a蛋白的原核表达及其人鼠嵌合型单抗的制备与鉴定

目的：探究铜绿假单胞菌Ⅵ型分泌系统VgrG1a蛋白的原核表达方法，并制备鼠源性和人鼠嵌合型单克隆抗体为抗铜绿假单胞菌感染提供了研究基础。方法：根据NCBI网站上查找到的VgrG1a序列合成重组质粒pET-21a-VgrG1a，转化大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）plysS进行诱导。通过免疫沉淀法和酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）对诱导得到的重组蛋白进行表达、纯化和鉴定。用纯化后的VgrG1a重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备鼠源多克隆抗体，并利用ELISA方法测定小鼠血清抗体的效价和特异性。通过P3X63Ag8.653骨髓瘤细胞融合小鼠脾细胞制备杂交瘤细胞，再通过有限稀释法获得单克隆细胞。经多次ELISA筛选出能够稳定产出特异性抗体的细胞株。在公司测序后获得单克隆抗体的序列信息，并设计出含有此抗体的质粒，转染Expi293细胞，制备人源化单克隆抗体。结果：结果显示，实验成功构建了VgrG1a重组质粒，经探索在最佳表达诱导条件下（温度16℃，IPTG浓度0.5mM，诱导时间16小时），表达得到了重组蛋白VgrG1a，SDS-PAGE显示72kDa处重组蛋白浓度最高。检测制备的鼠源抗体在稀释到1/640000后效价仍较高，并且与目的蛋白能够能特异性的识别并结合。人鼠嵌合型单克隆抗体8A4F5对抗原VgrG1a亲和力高于鼠源单克隆抗体。结论：以上结果表明，该原核表达的重组蛋白具有良好的免疫原性，利用表达的重组蛋白制备的单克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性，为进一步研究蛋白的结构与功能、研制相关的诊断试剂及疫苗提供了生物材料。     

多功能气管组合套管的制作与应用

目的探讨多功能气管组合套管的制作及应用效果。方法自行研制多功能气管组合套管,其由辅助吸引管及一次性气管切开导管构成,并应用于8例气管切开并发严重且难以控制(予敏感抗生素抗感染、对症支持治疗无效)的上呼吸道感染者。结果8例患者呼吸道感染获得有效控制,3～5d体温下降,血常规正常,胸部X线摄片示肺部感染得到控制。结论多功能气管组合套管应用于气管切开并发严重上呼吸道感染患者,有助于提高治疗效果。     

阴道B超指引下选择性减胎术13例应用体会

近年来,随着促排卵及辅助生育技术的广泛开展,多胎妊娠的发生率明显增加,由于多胎妊娠流产、早产等造成母儿并发症增加,围生儿病率增加,因此有必要行选择性减胎术使妊娠维持在双胎或单胎。2001年7月至2002年12月,本院在阴道B超指引下行选择性减胎术13例,现报道如下。     

腺病毒介导AMP激活的蛋白激酶的过表达诱导肝星状细胞株LX2凋亡

目的 探讨在肝星状细胞株LX2中,用腺病毒介导AMP激活的蛋白激酶(AMPK)过表达对细胞凋亡的影响.方法 病毒感染细胞后,用免疫印记的方法检测外源基因的表达;流式细胞仪分析细胞的凋亡;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带,免疫印迹检测caspase-3以及Bcl-2、Bax表达的变化.结果 免疫印迹结果显示表达组成性激活的AMPK的腺病毒感染LX2细胞72 h,AMPK过表达.过表达AMPK的LX2细胞用流式细胞仪检测到有凋亡的亚二倍体峰出现;DNA断裂出现梯状条带,casepase-3被激活,Bcl-2在LX2中是低表达的,而Bax表达水平升高.结论 腺病毒介导AMPK的过表达可以诱导LX2细胞发生凋亡,其可能的机制之一是上调促凋亡基因bax的表达.     

阿奇霉素辅助治疗小儿喘息性支气管炎84例

目的:观察阿奇霉素治疗小儿喘息性支气管炎的临床疗效。方法:84例小儿喘息性支气管炎患儿按照随机数表方法分为对照组和观察组,各42例;两组均采用常规治疗,观察组加用阿奇霉素10 mg/(kg.d)匀速静滴,1次/d,疗程5d,对比两组疗效和喘息症状消失时间。结果:观察组总有效率92.8%,对照组78.5%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组咳嗽喘息及肺部哮鸣音消失时间早于对照组,住院时间短于对照组。结论:阿奇霉素辅助治疗小儿喘息性支气管炎疗效显著,安全性好。     

围绝经期女性骨质疏松的临床研究

目的探讨激素替代疗法(HT)对围绝经期妇女骨质疏松的影响。方法212例接受雌激素(E_2)治疗者为A组,使用量0.5～1 mg/d,223例未用激素治疗者设为B组。观察1～5年,用双能X线吸收法(DEXA)进行骨密度(BMD)测定。结果观察2年后,A、B两组间BMD差异有统计学意义(P<0.05),3年后差异有统计学意义(P<0.01)。结论HT能减少对围绝经期妇女的骨质疏松的发生。     

Y染色体微缺失与男性不育

遗传因素导致的生精障碍是引起男性不育的—个重要原因，研究发现，Y染色体长臂上无精子因子（AZF）的缺失可以导致男性生精障碍，大多表现为无精或严重少弱精。在特发性无精症、隐睾和精索静脉曲张的不育患者中均已检测到AZF的缺失。胞浆内单精子注射（ICSI）在解决男性不育问题的同时，也有可能将父代的遗传缺陷传递给男性后代．所以对无精症及严重少弱精症患者尤其是行ICSI助孕的不育男性有必要常规行AZF缺失的检测。现就Y染色体AZF微缺失的机制、与特发性男性不育及睾丸病变的关系、微缺失检测的临床意义等方面进行综述。     

HBV母婴传播的阻断方法及护理措施

目的 探讨HBV母婴阻断方法及相关护理的阻断效果.方法 对43例妊娠合并乙型肝炎的待产妇从母孕28～30周开始,每隔4周肌内注射乙肝免疫球蛋白200 IU,连用3针,新生儿出生12 h内肌内注射乙肝免疫球蛋白200 IU,出生20d肌内注射乙肝疫苗第1针,第50天、6个月各肌内注射1支,并给予科学正确的护理方法.结果 2004年1月1日-2004年12月31日HBV携带产妇所生婴儿43例,7个月时复查婴儿乙肝生物标志物,5项全阴性者5例,抗-HBs＋38例,乙肝疫苗接种成功率88%,HBV母婴垂直传播的阻断成功率100%.结论 此方法简便易行疗效确切.     

女性生殖道畸形综合征的诊治和预防

女性生殖道畸形综合征是一种生殖道畸形合并有泌尿、骨骼、心血管、消化等多系统发育异常的先天性疾病。主要由于苗勒管发育不全所致。最早由Mayer于1829年报道,后来Rokitansky等对本征进行了深入研究,故该征又称之为Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser综合征(简称MRKH综合征)。单纯生殖道畸形在女性发育异常中比较常见,而MRKH综合征发病率却很低,约1:4000~10000[1,2]。1病因该病系胚胎期苗勒管早期发育正常,进入中期后停止发育或发育不同步所致。因此,输卵管和卵巢发育正常,而子宫和阴道缺如。生殖、泌尿、骨骼、心血管、消化各系统在胚…