梅毒螺旋体IgG和IgM抗体国家一级血清标准物质的研制

目的 研制国内用于TP的IgG和IgM抗体检测的国家一级标准物质,以促进临床实验室TP抗体检测的室内质量控制、试剂方法评价,实验室能力验证及量值溯源等.方法 筛选2份TP抗体强阳性血浆,分别用阴性的血浆稀释至约1 IU/ml( 200851)和20 mlU/ml( 200852),分装,真空干燥后,研究制备物不同温度(- 70、37、-20、2～8℃,室温和反复冻融)和时间(3d,1、2、3、4周等)的长期稳定性和短期稳定性.然后,从分装后样本中抽取20份进行均匀性研究.并采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫印迹、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和TP明胶凝集试验( TPPA)法,分别与国际标准物质(NIBSC编号:05/132和05/122)同时检测比对定值.最后进行不确定度分析.结果 制备物长期保存稳定性良好,37℃可稳定4周,室温可稳定8周,2～8℃可稳定16周,-20℃可稳定32周.比较2种制备物的1～20号样本和混合样本检测结果的组间方差和组内方差,制备物200851与200852的F值均小于F0.01(1.38)=7.35,其均匀性良好.ELISA、免疫印迹、TRUST和TPPA 4种检测方法的定值结果相同,经不确定度分析,200851和200852定值结果可分别表示为( 1.27±0.26) IU/ml和(19.4±4.4) mlU/ml.结论 制备物稳定性和均匀性结果均符合国家一级标准物质的要求.这2种制备物可分别作为国内不同方法检测TP的IgG和IgM抗体的血清标准物质.     

血清总胆固醇测定的基质效应研究

目的 评价血清胆固醇常规方法对常见胆固醇参考物质的基质效应和常规方法的校准偏差.方法 用高效液相色谱测定血清总胆固醇的方法为对比方法,用胆固醇氧化酶法的6种常规测定系统为待评方法,测定30个新鲜冰冻人血清和37种制备物的总胆固醇.将两法测定新鲜人血清的结果作直线回归,求得Y预测值双侧95%的允许区间,评价制备物的基质效应.通过分析新鲜冰冻人血清样品常规方法和对比方法结果的差异,评价测定系统的校准偏差.结果 胆固醇制备物的基质效应依品种而异,冰冻血清几乎没有基质效应,冻干血清表现为负基质效应,乙醇基质校准液呈正基质效应.所有系统新鲜冰冻血清测定值同对比方法测定结果均呈较好的直线相关.A,B,E系统显负偏差,C,D,F系统显正偏差,但偏差大多处于临床可接受的范围内,可满足临床需求,个别测定系统需进行改进.结论 在我国血清胆固醇测定系统上,制备物的基质效应普遍存在,部分常规系统存在校准偏差.为实现检验结果的准确性和实验室间的可比性,临床标准化工作势在必行.     

方法学评价的设计及对葡萄糖试剂盒的评价

目的 对由希森美康(sysmex)生产的葡萄糖测定试剂盒、校准品、日立7170A组成的葡萄糖测定系统进行了精密度、线性、方法学对比以及干扰实验的研究.方法 分别根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准文件EP5-A,EP6-A,EP9-A2对系统进行精密度评价、线性评价、方法学对比实验,并选取临床常见的五种干扰物质对试剂盒进行干扰实验.结果 精密度:批内不精密度<1.0%,总不精密度<1.2%;线性范围:在0～60 mmol/L,r2=0.998 9;方法学对比:与Roche葡萄糖试剂盒/ROCHE校准品/日立7170A系统测定结果的相关系数r=0.998 3.在选定的医学决定水平,相对偏差小于3%;干扰试验:游离胆红素在20 mg/dl以内、结合胆红素在20 mg/dl以内、乳糜在3 000度以内、抗坏血酸在50 mg/dl以内,血红蛋白在500 mg/dl以内对实验结果无明显影响(偏差在3%以内).结论 该系统精密度好,线性达到说明书的规定指标,和比对系统间的偏差较小;常见干扰物对其无明显干扰.     

他可莫司对肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群的影响及临床意义

目的探讨他可莫司对肝移植后受者外周血T淋巴细胞亚型的影响及临床意义。方法采用微粒子酶免疫分析法进行他可莫司全血谷浓度测定，监测16例肝移植受者在第1周、第2周、第1个月-第4个月及第6个月的血药浓度。全血样本同时用血细胞分析仪测定血常规，流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群。结果他可莫司平均血药浓度基本在推荐治疗窗范围内。他可莫司显著减少肝移植受者外周血CD3^＋CD4^CD8^-细胞百分比，但减少的程度并不受他可莫司血药浓度影响。接受他可莫司治疗后，肝移植早期受者外周血淋巴细胞总数和CD3^＋T淋巴细胞的绝对计数都显著减少。结论他可莫司主要抑制肝移植受者CD3^＋CD4^＋CD8^-T淋巴细胞亚群，但其全血谷浓度并不反应T淋巴细胞亚群受影响的程度。提示应在肝移植早期监测他可莫司全血谷浓度和血常规及T淋巴细胞亚群的三项组合检验，为实施个体化检验和临床用药治疗方案调整提供方便和帮助。     

2006-2011年中国临床实验室检测自身抗体的室间质量评价

目的 评价我国临床实验室检测自身抗体的能力.方法 每年进行2次室间质量评价,每次发放5支质评样本;要求各临床实验室在规定时间内检测,并回报抗核抗体(ANA)定性结果、核型、滴度、抗可提取核抗原(ENA)抗体和抗dsDNA抗体定性结果,同时计算各项结果的符合率.结果 2006-2011年期间采用IIF检测ANA的实验室比例从77.6％ (149/192)增长到82.2％( 342/416),采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测ANA的实验室比例在14.5％ (53/365)至16.0％( 52/326)之间.用IIF法检测ANA阳性符合率在2006-2011年期间均在98％以上,ELISA检测的阳性符合率均在90％以上,IIF法每年的阳性符合率均高于ELISA.ANA核型仅为颗粒型的质评样本,除0613和0624号样本外,核型回报结果正确率均＞90％.ANA核型仅为均质型的样本,核型回报结果正确率均≥95％.ANA核型为着丝点型的样本,2007年核型回报正确率仅为88.5％( 161/182)、79.0％ (147/186),2010年提高到98.4％ (299/304),核型回报正确率呈明显上升趋势.各阳性样本中,报告滴度代码结果为中位数的实验室比例最低的仅为36％ (94/261),最高的为85.5％( 224/262).抗ENA抗体总符合率均＞90％,dsDNA抗体总符合率均＞85％.结论 IIF法是我国临床实验室进行ANA筛查的主要方法,其次为ELISA,2种方法对ANA定性回报的结果均较为理想.临床实验室对单一着丝点核型的判断有了很大提高,但是对滴度结果的报告尚不理想.ANA检测还有待标准化.     

血清尿素同位素稀释气相色谱质谱法的建立和研究

目的 建立一种基于同位素稀释/气相色谱/质谱技术(isotope dilution/gas chromatography/mass spectrometry,ID/GC/MS)的血清尿素候选参考方法.方法 以[13C,15N2]尿素为内标,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质,依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲基硅烷基)-三氟乙酰胺(MSTFA)将尿素衍生成为三甲基硅烷氧基嘧啶,用气相色谱/质谱(GC/MS)分析衍生产物,以包括法定量.结果 血清尿素测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.38%(范围0.12%～0.47%)、0.62%(范围0.49%～0.87%)和0.73%(范围0.51%～0.93%),回收率范围为99.37%～100.95%,分析美国国家标准和技术研究院(NIST)2个水平的血清标准物质SRM 909b,测定结果与靶值的偏差小于0.2%.结论 建立了ID/GC/MS技术测定血清尿素的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清尿素测定的参考方法.     

2001年全国流式细胞术室间质评结果

目的 通过开展室间质量评价活动提高临床实验室检验结果的质量。方法 每年向参加流式细胞术室间质量评价活动的单位发放质控品6个批号,测定项目包括CD3~ 、CD4~ 、CD8~ 和CD56~ 。参加实验室测定样本并回报测定结果,经计算机软件对全部结果进行统计分析。结果 2001年参加流式细胞术室间质评的实验室数为34家,测定结果的平均及格率分别为88％(CD3~ )、91％(CD4~ )、90％(CD8~ )和89％(CD56~ )。结论 多数实验室的检验结果在室间质评和质控品给定的靶值范围内,但个别实验室结果存在较大的变异。     

含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达

目的：通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法：设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换为C,提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体,连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3,转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,用超声破碎、纯化获得表达产物,鉴定并讨论其稳定性。结果：成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,其可耐受DNA酶和RNA酶的降解,并在-20 ℃、4 ℃、室温25 ℃下10 d保持稳定。 结论：通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒,本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性,为轮状病毒实时荧光定量逆转录 PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。     

血药浓度测定室间质量评价工作总结

我室组织的１９９１～１９９３年的茶碱及苯妥英血浓度测定室间质量评价工作。以调查方式进行，３年共发放３６个批号的样本，每个批号茶碱及苯妥英总体测定均值与靶值之间的偏差范围分别为－２５／～＋５０％、－９．８％～＋６８．０％；室间ＣＶ值波动范围分别为７．７％～３３０．Ｏ／、１０．１％～２３１．０％。各实验室使用较多的测定方法为高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）、荧光偏振免疫分析（ＦＰＩＡ）及紫外分光光度法（ＵＶ），不同测定方法相比较，目前ＦＰＩＡ方法的测定结果准确性和室间精密度为最好，ＨＰＬＣ方法的测定结果差异较大，而ＵＶ方法用于血药浓度测定，其准确度、精密度及灵敏度都不能满足要求。室间质评的总体状况表明血药浓度测定工作与其它检验项目一样，必须有一个健全的切实可行的质量保证措施，以保证测定的质量。     

匀相酶免技术在治疗药物监测中的应用

作者建立了用自动生化分析仪测定血清苯巴比妥浓度的方法，并对此方法进行了评价。该测定方法的批呐不精密度为５．６％－６．０％；批间不精密度为６．７％－７．６％；测定线性范围０－８０ｍｇ／Ｌ；标准曲线一次定标后，至少可使用一个用；将该法分别与荧光偏振免疫分析法和高效液谱法进行对比分析