临床分离耐药摩氏摩根菌的β-内酰胺酶表型和基因型分析

目的探讨临床分离耐药摩氏摩根菌3-87耐药的分子机制。方法采用常规琼脂二倍稀释法对摩氏摩根菌3-87进行15种抗菌药的MIC测定；超声破碎法提取β-内酰胺酶；并用nitrocefin做定性检测，用紫外分光光度计检测酶活性；超薄层等电聚焦测定β-内酰胺酶等电点和酶抑制实验；ESBLs表型鉴定；AmpC酶的检测；纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株；以摩氏摩根菌3—87质粒DNA为模板扩增blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因，以基因组DNA为模板扩增ampC结构基因；ampC结构基因扩增产物的DNA序列测定及同源性分析。结果摩氏摩根菌3—87对10种β-内酰胺类抗生素、2种氟喹诺酮类抗菌药耐药，对哌拉西林／三唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦、氨基糖苷类抗生素阿米卡星敏感。产酶活性为3727．5U的β-内酰胺酶。产生的p17．3、8．2及9．6的三种β-内酰胺酶分别能被氯唑西林、克拉维酸、EDTA部分抑制。β-内酰胺酶表型鉴定试验结果显示菌株产ESBLs、AmpC酶及金属β-内酰胺酶三种β-内酰胺酶。blaCTX-M基因引物扩增出阳性扩增条带。ampC结构基因引物扩增阳性扩增带，对扩增产物进行序列分析与已报道的摩氏摩根菌ampC结构基因的核苷酸序列高度同源，推导的氨基酸序列发生了1个氨基酸残基的变异。结论临床分离耐药摩氏摩根菌3—87呈多重耐药，其对β-内酰胺类抗生素耐药的机制是产生了ESBLs、AmpC酶及金属β-内酰胺酶。     

耐头孢他啶大肠埃希氏菌产β-内酰胺酶的特性研究

目的:研究耐头孢他啶大肠埃希氏菌产β-内酰胺酶的特性。方法:采用K-B纸片扩散法和等电聚焦对2株耐药大肠埃希氏菌产β-内酰胺酶类型进行初步判断;采用碱裂解法提取质粒并进行PCR扩增测序;β-内酰胺酶经饱和硫酸铵反抽提及SephadexG-75凝胶过滤和DE-52阴离子交换层析法纯化;以SDS-PAGE法测定其分子量及紫外分光光度法测定其酶动力学参数。结果:2株菌产生一种等电点为8.7的超广谱β-内酰胺酶(CTX-M-1V),分子量为29kDa,能水解头孢噻肟和氨曲南,不能水解亚胺培南,对舒巴坦(IC50=94nmol/L)和他唑巴坦(IC50=5nmol/L)敏感。结论:CTX-M-1V为对抑制剂敏感的CTX-M型超广谱-内酰胺酶。     

碱性成纤维细胞生长因子在恶性肿瘤细胞中表达状况及其意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)在癌细胞中表达及其意义。方法：采用SP免疫组化法检测癌组织181例,癌旁组织66例bFGF表达状况。结果：癌组织和癌旁组织bFGF阳性率分别为95．58％和62．12％,两者差异显著（P＜0．005）,（＋）的阳性率分别为48．55％和63．41％,（＋＋）分别为41．62％和36．59％（＋＋＋）分别为9．83％和0％。（＋）和（＋＋）的阳性率之间无显著性,（＋＋＋）差异显著（P＜0．025）,乳头状腺癌bFGF阳性率及表达强度显著低于低分化癌,腺癌和粘液腺癌（P＜0．05）,癌细胞转移组和无转移组bFGF阳性率无显著性差异（P＞0．05）,但（＋＋＋）阳性率前者显著高于后者（P＜0．05）,结论：各种癌组织表达bFGF高于癌旁组织,分化较差的癌细胞高于分化较好的癌细胞,癌转移组表达bFGF( )阳性高于无转移组。bFGF与癌发生发展和转移有着内在联系。     

莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的DNA序列分析及其在大肠杆菌中的诱导表达

目的 为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法 采用377型DNA自动测序仪对莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的插入片段进行DNA序列测定,并通过计算机软件对其进行限制性内切酶酶谱分析。然后将重组质粒pBX1在大肠杆菌中进行诱导表达,并对其表达产物进行免疫印迹分析。结果 （1）重组质粒pBX1插入片段大小为477bp,其核酸序列与文献报道的p83基因全序列相应区段相比较仅有一个碱基的变异,（2）成功绘制了该插入片段的限制性内切酶酶谱;（3）重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后获得了29kd的融合蛋白;（4）Western-blotting分析表明该融合蛋白能与莱姆病多价抗血清呈强阳性印迹反应。结论 该研究成功地对莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白特异性区段进行了基因重组和表达,为进一步研究其在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础。     

利用基因芯片技术快速检测结核杆菌耐药性的初步研究

目的:探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法:结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备;临床分离株结核杆菌培养和药敏检测;结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应;基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结果:临床分离株结核杆菌培养和药敏检测结果:1株为药物敏感株结核杆菌(对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种药物均敏感);4株为多耐药株结核杆菌(对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种药物均耐药);药敏检测结果与5位患者临床的诊断性治疗的结果完全一致;进一步利用基因芯片技术进行检测, 检测结果与上述结果相符合。结论:利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性, 准确、快速、高效。     

急性胰腺炎对免疫功能的影响

目的研究急性胰腺炎发病及治愈后患者的免疫功能变化.     

奥沙利铂致过敏性休克48例分析

目的 :探讨奥沙利铂致过敏性休克的特点,为临床安全用药提供参考。方法 :检索大医医学搜索、CHKD期刊全文数据库、万方医学网和Pub Med数据库,收集奥沙利铂致过敏性休克的病例,筛选符合标准的文献,进行分析。结果:共纳入奥沙利铂致过敏性休克病例48例,40岁以上患者(44例,91.67%)及第2~12次化疗周期中的患者(40例,83.33%)不良反应发生率较高,不良反应均发生在静脉滴注给药后的40 min以内,临床症状以心血管系统、呼吸系统和皮肤及其附件表现为主。结论:医务人员尤其是肿瘤科医生掌握奥沙利铂致过敏性休克的特点对于临床安全用药非常重要。     

护理管理措施防控医院感染的主成分分析和效果评价

目的：为了明确护理管理措施在防控医院感染中的作用,通过主成分分析探寻措施并实施干预和效果评价。方法针对我院2011年医院感染发生率增高的情况,对我院护理人员进行问卷调查,利用主成分分析明确主要的护理措施,对筛选出的措施实施干预。收集2013年的院内感染率和环境卫生检测合格率等数据与2011年、2012年进行比较,对干预措施进行效果评价。结果主成分分析显示有4项主要的措施在防控医院感染中累积贡献率达到71.95％。通过强化这些干预措施,2013年的院内感染率为4.5％,环境卫生检测合格率82.41％,优于2011年和2012年,差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论针对不同医院的特殊情况,可以利用主成分分析探寻有针对性的护理管理措施,对于防控医院感染效果良好,避免了护理管理措施的盲目性。     

结核杆菌多价核酸疫苗在小鼠体内的免疫保护效应研究

目的:探讨结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗的动物免疫保护效应。方法:将24只BALB/c小鼠随机分成4组,多价核酸疫苗免疫组每只小鼠股四头肌肌肉注射重组质粒VR1020-85A、VR1020-E6和VR1020-P10各25μg(溶于100μL灭菌生理盐水中)进行免疫接种,3周后加强免疫1次。其余3组均为对照组,分别是生理盐水注射组、空白质粒VR1020免疫组和卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guérin,BCG)免疫组。每只小鼠于初次免疫6周后经腹腔注射结核杆菌H37Rv(菌落数为1×105)进行攻击,攻击实验28 d后取小鼠肺组织作结核杆菌培养和病理形态学检测。结果:多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织结核杆菌培养带菌量明显低于生理盐水注射组和空白质粒免疫组(P<0.05),但明显高于BCG免疫组(P<0.05)。多价核酸疫苗免疫组小鼠肺组织病变明显轻于生理盐水注射组和空白质粒免疫组,但明显重于BCG免疫组。结论:结核杆菌Ag85A/ESAT-6/CFP-10多价核酸疫苗免疫小鼠后能产生一定程度的抗结核免疫保护效应,但其免疫保护效应不及BCG。