槲皮素对大鼠卵巢发育和卵巢寿命的影响

背景：研究发现一些植物雌激素可改变生殖系统发育,并可能最终影响生殖衰老的年龄。槲皮素是一种黄酮类物质,具有微弱的雌激素效应,但对卵巢卵泡发育和卵巢衰老进程究竟有无影响还不清楚。 目的：观察槲皮素对大鼠卵巢卵泡发育和卵巢寿命的影响。 方法：健康成年SD 大鼠30只雌雄按2∶1合笼所生的新生雌鼠,分为3组：母鼠灌胃组,对孕10.5 d母鼠槲皮素灌胃,1次/d,直至分娩,取1,2,4 d新生雌鼠;腹腔注射组,对正常出生后12 h内新生雌鼠槲皮素腹腔注射,1次/d,取2,4 d新生雌鼠;空白对照组：不进行任何干预的1,2,4 d新生雌鼠;观察新生鼠卵巢发育情况。另取12月龄雌性大鼠22只,以数字表法随机分为实验组和对照组：实验组用槲皮素灌胃4个月,1次/d;对照组灌胃给予生理盐水。对灌胃前和灌胃期间12月龄雌性大鼠行阴道涂片,观察大鼠动情周期模式;灌胃结束后,计算卵巢和子宫系数,苏木精-伊红染色观察各期卵泡发育情况和卵泡总数变化。 结果与结论：用槲皮素干预1,2 d龄新生大鼠未装配的卵泡均减少,而发育更晚期阶段的卵泡即原始卵泡或发育卵泡有所增加。灌胃前大部分大鼠动情周期已经不规则,用药后,随着大鼠年龄的增长,实验组与对照组显示了相似的动情周期变化：规则的动情逐渐消失,周期变得延长或不规则,灌胃结束时均以不规则动情为主。灌胃4个月后,实验组大鼠卵巢大部分由闭锁卵泡组成,另外可见少许原始卵泡、发育卵泡以及窦状卵泡和黄体,实验组窦状卵泡较对照组增加(P < 0.05),两组卵巢和子宫系数及体质量增加无差异。 提示槲皮素可能具有一定促进卵巢卵泡发育和成熟的作用,但不影响卵巢寿命。     

新生大鼠卵母细胞凋亡信号通路SCF-FOXO3a的体外实验研究

目的:研究FOXO3a(forkhead box group O)转录因子是否参与调控哺乳动物卵巢中裸露卵母细胞和原始卵泡内卵母细胞的凋亡。方法:体外分离培养新生大鼠卵母细胞巢和原始卵泡内的卵母细胞,干细胞因子(stem cell factor,SCF)单独或与磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制剂LY 294002联合作用于卵母细胞,TUNEL法凋亡染色观察卵母细胞凋亡状况;RT-PCR、Western blotting检测FOXO3a及其下游靶分子与卵母细胞凋亡的关系。结果:SCF不影响卵母细胞FOXO3a总蛋白表达水平,但使其磷酸化水平增加,从而抑制了卵母细胞凋亡;LY 294002可完全阻断上述效果。SCF使FOXO3a的靶基因Bim和p27kip1表达下调,此作用同样可被LY 294002逆转。结论:FOXO3a和其下游靶基因Bim及p27kip1可能参与了SCF信号通路对新生大鼠卵母细胞的凋亡调控。     

人胚食管异种移植和诱癌研究

［目的］探讨人胚食管在裸鼠体内的异种移植及苯并在诱癌。［方法］人胚食管移植至探鼠，移植的人胚食管用苯并芘诱癌，观察移植物1－4个月并取材进行光镜、电镜和免疫级化检查。［结果］人胚食管在裸鼠皮下可存活4个月以上。移植的人胚食管用苯并芘诱癌，2个月可出现浸润性鳞状上皮癌。其病变有粘膜上皮坏死脱落、再生、增生、乳头状瘤样增生、不典型增生、原位癌及浸润癌。［结论］苯并芘能诱发人食管上皮癌。实验结果将有助于食管癌病因和发病机理研究。     

大鼠Sirt1基因原核表达质粒的构建及融合蛋白表达

目的构建大鼠Sirt1基因重组原核表达质粒pET41-Sirt1,表达其重组蛋白,为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞内的作用奠定基础。方法根据GenBank中大鼠Sirt1基因序列设计引物,用RT-PCR扩增得到含BamHI/XhoI酶切位点的Sirt1片段,克隆至pGEM-Teasy载体后亚克隆至原核表达载体pET41,测序鉴定后,转化宿主菌进行表达、蛋白纯化,SDS-PAGE鉴定。结果从大鼠脑的mRNA中扩增出特异Sirt1基因片段长506bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实pET41-Sirt1重组质粒构建正确,表达融合蛋白分子量约为48kD。结论成功构建重组原核表达质粒pET41-Sirt1,并能表达融合蛋白,其分子量大小与预期一致。     

平阳霉素对人食管癌裸鼠移植瘤抑瘤作用和耐药性的研究

作平阳霉素(BLMA_5)对人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤(Eca910709)进行治疗,按15mg/kg体重腹腔注射给药,经重复实验,结果抑瘤率为58％～70％(P<0.01),说明BLMA_5对Eca910709有明显的抑瘤作用。经三个疗程治疗,Eca910709即对BLMA_5产生耐药,表现在抑瘤率从70％(P<0.01)递减为34％(P<0.05)和6％(P>0.05)。给药剂量增加至30mg/kg,BLMA_5对己耐药的Eca910709再次显示一定的抑瘤作用(抑瘤率为44％,P<0.01)。本实验结果对临束治疗食管癌将有较大应用价值。     

佛波酯和人乳头瘤病毒在细胞恶性转化作用中的协同效应

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）和促癌物在肿瘤诱发过程中的协同作用。方法研究选择与恶性肿瘤关系密切的癌基因和抑癌基因，利用免疫组化、Southem Blot和半定量RNA斑点杂交的方法，研究在HPV18E6E7和促癌物佛波酯（TPA）的协同作用下，这些基因在细胞内的表达。结果HPVE6E7和TPA的协同作用可以引起细胞内癌基因c-myc的扩增4-8倍，c-erbB2的表达水平提高32-64倍，并导致抑癌基因p16的表达水平下降到正常水平的1／4．1／8。结论HPVE6E7和TPA的协同作用可以引起细胞内癌基因和抑癌基因表达水平异常，可能是细胞癌变的重要原因之一。     

珍香胶囊抗人宫颈癌作用及其机制研究

目的探讨珍香胶囊对人宫颈癌的抗癌作用及其机制。方法建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,分别应用TUNEL法和免疫组化SABC法观察不同浓度的珍香胶囊对裸鼠移植瘤凋亡指数(AI)增殖细胞核抗原阳性细胞指数(PI)的影响。结果经珍香胶囊治疗后,高浓度组和中浓度组AI分别为(2．83±1．52)％和(2．50±1．43)％均明显高于阴性对照组的(0．78±0．31)％(P＜0．01,P＜0．05),而低浓度组AI为(0．87±0．27)％与对照组比较,差异无显著性(P＞0．05)；高浓度组和中浓度组PI分别为(63．58±9．31)％和(68．83±9．04)％均低于阴性对照组(84．42±9．25)％(P＜0．01),而低浓度组PI为(79．25±8．53)％与对照组比较,差异无显著性(P＞0．05)。结论珍香胶囊通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡而达到其抗人宫颈癌作用。     

珍香胶囊对人食管癌的抗癌作用及其机制研究

目的：探讨珍香胶囊对人食管癌的抗癌作用及其机制。方法：应用光镜、透射电镜和流式细胞仪,观察珍香胶囊诱导体外培养的人食管癌细胞株EC109细胞凋亡的作用;应用人食管癌鼠移植瘤模型,观察珍香胶囊的抗癌作用。结果：在体外,经珍香胶囊处理的EC109细胞出现典型的细胞凋亡特征。在体内,珍香胶囊3个剂量[4800mg/(kg.bw)、2400mg/(kg.bw)、1200mg(kg.bw）]对裸鼠移植的人食管癌的抑瘤率分别为70．80％－75．00％（P＜0．01）、58．33％－64．71％（P＜0．01）、37．04％－45．10％－45．10％（P＜0．01）,阳性对照平阳霉素（15mg/(kg.bw）对裸鼠移植的人食管癌的抑瘤率为51．33％－60．78％（P＜0．01）。结论：珍香胶囊在体外有诱导人食管癌细胞产生凋亡的作用,这可能是珍香胶囊食管癌作用的重要机制。在裸鼠可耐受的剂量,珍香胶囊对裸鼠移植的人食管癌有明显抗癌作用,且随着剂随着剂量增加,其抗癌疗效增加。     

番茄酱对大鼠食管癌前病变抑制作用的研究

目的 研究番茄酱通过抑制脂质过氧化反应而影响甲基戊基亚硝胺（MANA）致癌的效果。方法 Wistar大鼠随机分为三组,对照组、干预组（MANA 番茄酱）,单亚组和干预组大鼠每周肌注MANA1次,剂量5mg/kg,持续20周,干预组番茄酱添加至实验结束,实验期26周,共分5次处死动物,测定血清活性氧单位（ROS单位）、超氧化物歧化酶活性（SOD）、丙二醛（MDA）含量以及全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)活力的变化,并重点观察大鼠食管组织病理改变。结果 单亚组和干预组大鼠食管上皮均发生癌前病变,干预组癌前病变的发生率低于单亚组,干预组大鼠ROS单位,SOD和GSH-Px活性有明显提高,MDA含量有明显降低。结论 番茄酱对大鼠食管癌前病变的发生有预防作用;番茄酱通过提高大鼠的抗氧化能力。抑制脂质过氧化反应,是影响亚硝胺诱发大鼠食管癌的可能机制之一。     

平阳霉素和吡柔比星联合用药抗人食管癌的实验研究

重复实验两次研究平阳霉素（ＢＬＭＡ５）和吡柔比星（ＴＨＰ）联合用药对裸鼠移植的人体食管癌的疗效，结果：在裸鼠可耐受的剂量下，ＢＬＭＡ５、ＴＨＰ、ＢＬＭＡ５＋ＴＨＰ等各组抑瘤率分别为５６．９０％～６１．５４％（Ｐ＜０．０１）、３４．６２％～３９．６６％（Ｐ＜０．０５）、７１．１５％～７５．８６％（Ｐ＜０．０１），证明ＢＬＭＡ５和ＴＨＰ联合用药可明显提高疗效。研究结果提示ＢＬＭＡ５和ＴＨＰ合用有可能用于食管癌的临床化疗。