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目的 构建抗HIV-1gp120单链抗体基因,为进一步用于HIV-1感染的诊断和治疗奠定基础。方法 利用RT-PCR法,从抗HIV-1gp120单克隆抗体杂交瘤细胞扩增得到抗体轻链和重链的可变区基因,经重叠延伸反应,在体外随机合成单链抗体基因(ScFv),并克隆到pGEM-Easy-T载体中,经测序及Blast同源性分析。结果 该ScFV基因全长为666bp.为VH-Linker-VL结构,VH基因为396bp,编码132个氨基酸;Linker为(Gly4Ser)3短肽;VL基因为270bp,编码90个氨基酸。VH基因与小鼠IgG2a重链可变区的同源性达95%,VL基因与小鼠免疫球蛋白κ轻链可变区的同源性达98%。结论 成功构建了抗HIV-1gp120单链抗体基因。 相似文献
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DNA错配修复基因与肿瘤研究新进展 总被引:3,自引:0,他引:3
DNA错配修复(mismatch repair,MMR)基因对维持基因组的稳定性有重要作用,MMR基因突变与肿瘤的发生、发展关系密切.近年来,MMR基因在肿瘤组织中的作用成为研究热点,本文就其新进展作一简要综述. 相似文献
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摘要:目的研究蛋白激酶C(PKC)在凝血酶诱导人肺成纤维细胞(HLF-1)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达信号通路中的作
用。方法分别用几种不同类型的PKC抑制剂预处理HLF-1,再用凝血酶(10 nmol/L)刺激HLF-1,利用ELISA法检测上清液中
MCP-1的蛋白表达;提取细胞裂解液中总RNA并逆转录合成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA表达水平。结
果广谱型PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I 和RO-31-8220 可抑制凝血酶诱导的HLF-1 MCP-1 蛋白释放及mRNA表达,而
Ca2+依赖性PKC抑制剂Gö 6976则没有抑制效果。结论非Ca2+依赖性PKC介导凝血酶诱导HLF-1释放MCP-1。
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用。方法分别用几种不同类型的PKC抑制剂预处理HLF-1,再用凝血酶(10 nmol/L)刺激HLF-1,利用ELISA法检测上清液中
MCP-1的蛋白表达;提取细胞裂解液中总RNA并逆转录合成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测MCP-1 mRNA表达水平。结
果广谱型PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I 和RO-31-8220 可抑制凝血酶诱导的HLF-1 MCP-1 蛋白释放及mRNA表达,而
Ca2+依赖性PKC抑制剂Gö 6976则没有抑制效果。结论非Ca2+依赖性PKC介导凝血酶诱导HLF-1释放MCP-1。
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目的:研究蛋白激酶C(PKC)是否参与转化生长因子β(TGF-β)诱导的人口腔鳞癌细胞(SAS)整合素β6表达。方法:人口腔鳞癌细胞SAS 培养于含10%胎牛血清DMEM培养基中,经TGF-β诱导后,裂解细胞提取总RNA和蛋白质,采用实时荧光定量RT-PCR及蛋白印迹方法分别检测整合素β6 mRNA和蛋白表达情况;利用PKC阻断剂研究PKC对整合素β6表达的影响。结果:TGF-β诱导人口腔鳞癌SAS细胞整合素β6 mRNA及蛋白表达呈时间依赖性;广谱型PKC抑制剂RO-31-8220呈剂量依赖性阻断TGF-β诱导的SAS细胞 整合素β6 mRNA和蛋白表达,而Ca2+依赖型PKC抑制剂G6976则没有阻断作用。结论:非Ca2+依赖途径的PKC介导TGF-β诱导人口腔鳞癌细胞SAS细胞整合素β6表达。 相似文献
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新生鼠卵巢FOXO3a表达水平与卵母细胞凋亡的相关性初步研究 总被引:4,自引:4,他引:4
目的:探讨新生大鼠卵巢中FOXO3a(forkhead box groupO)转录因子表达水平与卵母细胞凋亡的相关性。方法:取出生后2d、3d、8d、15d龄大鼠的卵巢,用免疫组化方法观察FOXO3a、caspase-3在卵巢组织中的定位及表达水平,且用TUNEL技术检测卵巢内卵母细胞的凋亡变化。结果:FOXO3a在新生大鼠部分卵母细胞巢内的卵母细胞核内高表达,而在卵泡发育启动后,FOXO3a则从卵母细胞的核内逐渐转移至胞浆。而在次级和成熟卵泡的卵母细胞内,FOXO3a仅出现在胞浆内。≤8d龄大鼠卵巢的部分卵母细胞核内或胞核、胞浆内可检测到caspase-3表达,2d、3d龄大鼠部分卵母细胞核内高表达。TUNEL染色与caspase-3结果相似,2d龄大鼠卵巢的卵母细胞阳性率最高。结论:生后2d大鼠卵巢的卵母细胞存在一个凋亡高峰期;在原始卵泡形成前,FOXO3a在部分卵母细胞核内高表达,并与卵母细胞的凋亡率呈一致性。 相似文献