健男春对阳虚小鼠和大鼠的补肾助阳作用

用肾上腺皮质激素造成“阳虚”动物模型法观察健男春灌胃（ig）对小鼠及大鼠阳虚模型恢复的影响．小鼠给予健男春高、中、低剂量（5．0，2．5和1.25g／kg·d-1×7d）不能对抗强的松龙5mg／kg·d-1×7d所致肾上腺、胸腺、脾脏的萎缩，但能促进停用强的松龙后的肾上腺加快恢复．在停用强的松龙后d10，继续应用健男春，高、中、低剂量组肾上腺重量（mg／10g体重）分别为2．88±S0．56，2．61±s0.58和2.67±s0.66，与阳虚加生理盐水组（1．89±s0．19）相比有显著差别（P＜0.05）。阳性对照药男宝显示阳性药效。健男春对阳虚大鼠的作用与其对小鼠的作用相似，亦能促进萎缩的肾上腺加快恢复。停用强的松龙后d9健男春（2．0和1.0g/kg组肾上腺重量（mg／100g体重）分别为25．22±s3.90和22．73±S4。与单纯阳虚组（13．68±s3.13）比较明显增加（P＜0．001），男宝亦显示阳性药效。增大的肾上腺病理学检查见其切面皮质增厚，光镜下见皮质有早期结节样增生。此外，健男春尚可促进阳虚小鼠睡眠，使成巴比安纳引起睡眠时间明显延长（P＜0．05）。     

舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F对人鼻咽癌细胞和乳鼠心肌细胞的抑制作用

目的 观察舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F(CTX—F)对人鼻咽癌细胞(CNE)和乳鼠心肌细胞的抑制作用，了解CTX—F对人癌细胞株的选择性抑制作用，并初步探讨其作用机制。方法 以磺胺邻二甲氧嘧啶法观察CTX—F0．625，1．25，2．5，5和10μg／mL对体外培养CNE和乳鼠心肌细胞的杀伤作用及作用的量效关系，同时观察CTX—F作用0．5，1，2，4和8h的时效关系，并比较CTX—F对上述两种细胞作用的差异；采用透射电镜观察CTX—F对CNE细胞形态的影响。结果 CTX—F在0．625μg／mL作用0．5h时即可抑制CNE细胞的生长，生长抑制率约为7％，10μg／mL作用0．5h，生长抑制率即可达70．3％，作用存在明显的剂量依赖性，其IC50(μg／mL)为1．52，CTX—F作用0．5h对CNE细胞的IC50为3．83，8h为1．53，有明显的时效关系。CTX-F乳鼠心肌细胞也有破坏作用，但敏感性较低，IC50为5．92，约为CNE细胞的4倍。CNE细胞经CTX—F(0．625μg／mL)作用0．5h后，电镜下可见到细胞核内染色质边集或固缩成团聚集在细胞的一侧，时间延长，可见细胞死亡。结论 舟山眼镜蛇毒CTX—F对CNE细胞有剂量和时间依赖性杀伤作用，其敏感性高于乳鼠心肌细胞。     

模型动物脾经穴位给药的药效研究

目的 研究病理模型动物脾经穴位给药对"脾主统血"、"脾主运化"功能的影响.方法 建立华法林钠病理出血家兔模型,在模型家兔脾经的穴位与非穴位点注射维生素K1,考察动物凝血酶原时间(PT)、白陶土部分凝血活酶时间(APTT)的变化;在盐酸消旋山莨菪碱胃肠动力障碍模型小鼠的脾经穴位与非穴点注射甲硫酸新斯的明,考察对模型动物胃排空、肠推进率的影响.结果 2种模型动物脾经穴位给药均能纠正其病理偏态,作用优于肌肉注射给药,脾经不同位点给药作用大小不同.结论 经络穴位给药具有一定的药效特异性.     

眼镜蛇毒神经毒素的^125I标记及其在大鼠体内的分布

目的用氯胺T法标记眼镜蛇神经毒素（Neurotoxin．NTX）,观察其在大鼠体内的分布。方法实验组和对照组的大鼠分别单次静脉注射^125I-NTX50／Ag·kg^-1和相同剂量的Na^125I与NTX的临时混合浪。于给药后30min和2h分两批处死。取各脏器组织样本称重并计算每g组织的cpm。用组织与丘液的脉冲比值作为放射性相对掺入量的标准,用实验组（e）和对照组Co）相对放射性掺入量的比值（e／c）作为判断^125I-NTX在太鼠备脏器组织分布多少的依据。结果大鼠静脉给^125I-NTX50μg·kg^-1后30min,分布最多的是肾脏,每g组织放射性达44cpm,为对照组的11倍。膀臆及尿、肺、肠及内容物、肾上腺亦有较高分布。给药后2h。分布最多的仍是肾脏,但比0．5h时减少一半左右。结论NTX主要分布在肾脏。肾脏以外的实质性脏器分布均较少,脑中分布最低。     

蛇毒纤溶酶原激活剂的研究进展

蛇毒是含有多种生物活性蛋白质和多肽的混合物,其中一些蛋白可作用于人的凝血系统。蛇毒纤溶酶原激活剂是具独特活性的蛇毒丝氨酸蛋白酶,具有较长的半衰期,可专一性地裂解人Glu-纤溶酶原的Arg^561-Val^562肽键,使之变成有活性的纤溶酶,从而发挥溶栓作用。该文主要对蛇毒纤溶酶原激活剂的结构特点和作用机制进行了阐述,旨在为新型溶栓剂的研究提供方向。     

舟山眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化、理化及酶学性质

目的 从舟山眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAO),测定其理化和酶学性质.方法 应用Sephadex G-100凝胶色谱和POROS CM20离子交换色谱分离纯化LAO;Wellner和Lichtenberg法测定LAO活力,SDS-PAGE法测定相对分子质量.结果 舟山眼镜蛇蛇毒经Sephadex G-100凝胶色谱和两次POROS 20离子交换色谱后,获得LAO纯品(暂定名NA-LAO).NA-LAO在非还原和还原条件下相对分子质量均为58 kD左右;其反应最适pH为8.0,最适温度为60℃,对L-苯丙氨酸的米氏常数(Km)为3.08 mmoL/L.结论 应用凝胶过滤色谱和离子交换色谱可从舟山眼镜蛇毒中分离纯化LAO.     

蛇毒纤溶酶原激活剂的研究进展

蛇毒纤溶酶原激活剂能间接溶解纤维蛋白,具有较强抗PAI的抗性及半衰期较长等优点,由于其在临床上潜在的应用价值,因此是一个值得开拓、前景广阔的领域。本文综述了蛇毒纤溶酶原激活剂的研究近况。     

溶血栓药物研究进展

血栓性疾病如心肌梗死、动脉血栓和脑梗死等严重危害人类的身体健康,溶栓被认为是治疗血栓性疾病的重要方法之一。近年来溶栓药物的研发主要集中在两方面,一方面为通过基因工程和单克隆抗体技术改造的新型纤溶酶原激活剂药物,另一方面为新来源的溶栓药。本文将先概述溶栓机理,并对近年来溶栓药物的研究进展及发展方向进行综述。     

舟山眼镜蛇毒神经毒素的分离纯化及镇痛作用研究

目的从舟山眼镜蛇毒中分离纯化神经毒素,并测定其部分理化性质及镇痛活性。方法应用SP-Sephadex C-50离子交换色谱法分离眼镜蛇毒粗毒,用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、CM-Sephadex C-25离子交换色谱纯化神经毒素;SDS-PAGE(Tris-Tricine系统)鉴定纯度;用Meier方法测定毒性;用热板法观察神经毒素的镇痛作用。结果应用SP-Sephadex C-50离子交换柱层析,从舟山眼镜蛇毒中分离得到14个蛋白峰,其中6个组分(NNAV-Ⅶ ~Ⅻ)经鉴定为含有神经毒素组分,将神经毒活性最强的组分XI经Sephadex G-50、CM-Sephadex C-25纯化得神经毒素纯品NTⅪ。该纯品分子量12.3kD,小白鼠静脉注射和腹腔注射的LD50分别为1.9875、2.2217 mg·kg-1。NTXI能显著提高小鼠对热板刺激的痛阈。腹腔注射0.2mg·kg-1NTXI可使小鼠的热板痛阈提高84.35%。NTXI的镇痛作用具有时效性,给药后2h起效,4h作用达峰值。结论舟山眼镜蛇毒中分离得到一个神经毒素纯品NTⅪ,具有镇痛作用。     

舟山眼镜蛇毒细胞毒素的克隆及原核表达

目的构建舟山眼镜蛇毒细胞毒素（Cytotoxin,CTX）原核表达载体（pET42α（＋）-CTX）,并在大肠杆菌中表达CTX重组蛋白。方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素（CTX）,测定N-末端氨基酸序列并据此设计引物,以提取的舟山眼镜蛇毒腺总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增细胞毒素基因序列（CTXcDNA）。将CTXcDNA定向克隆到原核表达载体pET42α（＋）中,双酶切图谱、PCR和DNA测序鉴定,转化宿主菌E.coliBL21（DE3）,异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导,SDS-PAGE凝胶电泳分析表达产物,GSTrap FF亲和层析纯化融合蛋白CTX;Western-blotting鉴定。结果成功合成CTXcDNA,并构建原核表达质粒pET42α（＋）/GST-CTX,在大肠杆菌E.coliBL21（DE3）中表达融合蛋白CTX,SDS-PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的28.9%,Western-blotting证实纯化蛋白为重组CTX融合蛋白（rCTX）。结论成功构建CTX基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,获得rCTX具有眼镜蛇毒CTX的抗原性。