人脑胶质瘤裸鼠实验模型NHG-1的LDH同工酶检测

LDH 同工酶由H 亚基和M 亚基所组成。在恶性肿瘤时,以M 亚基占优势,呈M 型。这种生化特性上的变化,可以反映肿瘤的恶性特征和程度.本文对我室建立的人脑胶质瘤裸鼠实验模型NHG-1,接种瘤细胞、移植瘤细胞和再培养瘤细胞等进行了LDH 同工酶的检测,以观察其生化指标的特性改变。     

磁微粒化学发光法测定DKK-1在肝细胞癌诊断中的价值

目的首次运用磁微粒化学发光免疫分析法探讨血清Dickkopf-1(DKK-1)检测在肝细胞癌(HCC)诊断中的临床应用价值。方法采用双抗体夹心磁微粒化学发光免疫分析法定量测定205例HCC患者、40例肝硬化患者和200例健康体检者血清DKK-1和AFP水平,计算ROC曲线下面积及DKK-1和甲胎蛋白(AFP)对HCC诊断的灵敏度和特异度。结果 HCC组DKK-1水平显著高于肝硬化组和健康体检组(P0.01)。DKK-1对AFP阴性的HCC阳性率高达66.3%。ROC曲线结果表明:DKK-1最佳诊断界值为2.4ng/mL,AUC为0.822(95%CI:0.783~0.856),灵敏度为65.9%,特异度为87.5%。此外,DKK-1与AFP联合检测HCC曲线下面积(AUC)为0.915(95%CI:0.886~0.940),灵敏度为81.5%,高于任一单一指标检测(P0.05)。结论 DKK-1对HCC的诊断具有重要价值,尤其对AFP阴性的HCC患者有较高的检出率,DKK-1联合AFP检测可显著提高HCC诊断的灵敏度及准确度。     

HC3898基因的初步功能研究

目的：初步研究HC3898基因的功能。方法：通过细胞集落形成实验、裸鼠成瘤实验和计算机分析对HC3898基因的功能进行初步研究。结果：HC3898在蛋白质水平与酵母、果蝇、线虫中一些与细胞生长分化相关的蛋白质有很高的同源性。HC3898全长cDNA克隆转染SMMC－7721细胞能显著抑制集落的形成。 转染HC3898基因的SMMC－7721细胞在裸鼠中的抑瘤率为50％,统计学差异显著。常规病理切片显示实验组瘤中坏死灶内可见较多凋亡细胞及凋亡小体,在未坏死区可见散在凋亡细胞及凋亡小体。TUNEL染色证明有较多凋亡细胞。抽提实验组瘤块的组织DNA,经1．5％琼脂糖电泳分析,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论：HC3898可能通过诱导细胞凋亡而抑制SMMC－7721细胞的生长,提示它是细胞生长分化相关的基因。     

肿瘤外周酸性微环境促进肝癌HCCLM3细胞的转移

目的:探讨肿瘤外周酸性微环境对肝癌HCCLM3细胞转移的影响.方法:将肝癌细胞HCCLM3分别培养在不同pH值(pH 7.4、pH 7.0和pH 6.6)的细胞培养液中,通过细胞体外迁移实验和体外侵袭实验分析HCCLM3细胞在迁移和侵袭能力方面的改变,通过Western印迹、明胶酶谱及原位酶谱法分析HCCLM3细胞在基质金属蛋白酶2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)合成、分泌和激活方面的变化.结果:当细胞外周微环境向酸性变化时,HCCLM3细胞的迁移及侵袭能力均明显增强(P<0.01),虽然细胞内MMP-2的合成未发生明显改变,但细胞分泌的MMP-2及MMP-2的激活均明显增强(P<0.01).结论:细胞外周酸性微环境可以上调细胞MMP-2的分泌及激活,并促进肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭和迁移能力,提示肿瘤外周酸性微环境对肝癌细胞HCCLM3的转移具有促进作用.     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体携带阿霉素在荷瘤鼠体内的分布

采用Ｄｅｘｔｒａｎ　Ｔ－４０桥联法将抗人脑胶质瘤单克隆抗体ＳＺ－３９与氚标记阿霉素（３Ｈ－ＡＤＲ）交联，制备成免疫交联物３Ｈ－ＡＤＲ－ＰＡＤ－ＭＡｂＳＺ－３９。在荷瘤鼠体内观察免疫交联物分布情况。结果显示，ＡＤＲ－ＭＡｂＳＺ－３９在相关肿瘤浓聚，发挥了单抗高选择性定位作用，其分布特异指数平均为３．７９，心脏为４，骨为２，有可能降低阿霉素的主要副作用──心脏损害及骨髓抑制。但其在肝、脾内摄入相对较多，临床应用时应予注意。     

用λgt11载体构建人脑胶质瘤基因文库

自人脑胶质瘤手术标本中提取mRNA,逆转录合成cDNA,在T_4DNA 连接酶作用下,与一头是平末端,另一头是EcoR I 粘性末端、内含Not I 切点的插头相连,经T_4多聚核苷酸激酶磷酸化后,再与脱磷酸处理过的λgt11 臂连接,形成重组λgt11DNA。体外包装,构建了一个库容量含1.02×10~6重组子的人脑胶质瘤cDNA 基因文库。克隆效率为1.08×10~7pfu/μg cDNA。重组百分比为96.2%。     

血清蛋白的微型双向电泳检测

双向电泳对分析含有复杂蛋白质的样品是一种分辨力很高的方法。通常使用的双向电泳,一般在第一向电泳中使用较长(100—300mm)、较粗(3～6mm)的胶管,第二向电泳采用较大(高135～400mm、宽110～400mm)的胶板,每次电泳仅做1～2个样品,电泳时间长达十数小时到数十小时。这种“大型”双向电泳很难适应临床检验的要求。真锅敬等所设     

人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定

目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。     

运用γgt11噬菌体构建人脑胶质瘤基因文库的实验研究

自２例入脑胶质瘤手术标本中纯化ｍＲＮＡ，逆转录合成双链ｃＤＮＡ分子。在Ｔ４ＤＮＡ连接酶作用下，与Ａｄａｐｔｏｒ插头相连。经Ｔ４多聚核苷酸激酶磷酸化后，再与脱磷酸处理过的γｇｔ１１臂连接，得到重组γｇｔ１１ＤＮＡ。体外包装，构建了一个库容量含１．０２×１０＾６重组子的人脑胶质瘤ｃＤＮＡ基因文库，该文库的克隆效率为１．０８×１０７ｐｆｕ／μｇ ｃＤＮＡ，重组百分比为９６．２％。并初步筛选出了胶质纤维…     

肝癌患者β-catenin基因第三外显子的体细胞突变

目的探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无β-catenin基因突变.方法采用PCR-SSCP方法,设计扩增β-catenin基因第三外显子的引物,检测20例肝癌患者及7株人肝癌细胞中有无β-catenin基因突变,并通过DNA测序及限制性内切酶对突变加以验证.结果20例肝癌患者中有2例发生β-catenin基因突变,均为41位密码子由编码苏氨酸变成编码丙氨酸.7株人肝癌细胞均无β-catenin基因突变.结论10%(2/20)的肝癌组织样品有β-catenin基因突变.提示β-catenin基因突变可能参与了部分肝癌癌变过程,但不是中国地区肝癌发生发展过程中的主要和关键原因.