靶向表皮生长因子受体的shRNA抑制U251胶质瘤生长的实验研究

目的探讨靶向表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的RNA干涉(RNAi)技术抑制恶性胶质瘤体外细胞系U251的EGFR表达后,在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法在人EGFR开放阅读框的细胞内区酪氨酸激酶结构域选择1个siRNA靶序列、进行短发夹RNA(shRNA)表达载体psiRNA-2400的构建,并以含有随机序列的psiRNA-scr表达质粒为对照进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用RT-PCR检测EGFR表达水平,应用MTT法、流式细胞术和Matrigel基质生长实验评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导shRNA基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组化的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导、靶向EGFR的shRNA可显著抑制U251细胞ECFR表达,MTT法分析显示psiRNA-2400转染组细胞生长抑制率为68%;与对照组和psiRNA-scr转染组比较,细胞周期分析结果表明psiRNA-2400转染组G_0～G_1期细胞数没有明显变化,进入S期的细胞数较对照组减少了12.7%～13%,而进入G_2期细胞则增加了10.5%～11.7%。Matrigel基质生长实验显示对照组和psiRNA-scr转染组细胞呈正常形态贴壁生长,而psiRNA-2400转染组细胞不能贴壁生长,呈团块状簇集生长。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示psiRNA-2400显著抑制皮下肿瘤生长,组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降、PCNA标记指数降低而GFAP表达上调。结论靶向EGFR的RNAi技术可以显著抑制U251细胞的EGFR表达,在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。因此,shRNA表达质粒介导的基因治疗可以成为胶质瘤靶向性EGFR治疗的新策略。     

腹股沟疝手术中要注意的几个问题——和基层外科医生商榷

过去的十几年里,我曾参加过数次下乡巡回医疗。工作中发现腹股沟疝手术中一些在教材上或手术学上没有提及的,或者没有强调的问题,在这里提出来和基层外科医生讨论、商榷。(一)病人说:“术前阴囊大小正常、很软,术后阴囊又肿又硬”。检查发现阴囊既肿又硬,皮肤紧张、发紫。其原因是手术时没有确切地止血;术后创面渗血,逐渐沉积到阴囊里机化,长期不能自行消退。避免这种血肿形成,关键在于确切地止血。剥离疝囊后精索侧分离面的微小出血点,都应细致结扎。在完全性或先天性斜疝,与睾丸、附睾粘连的疝囊远端部分并不需要剥离切除,以免渗血,只要将较易剥离的精索侧疝囊切除,并将残留的远端疝囊边缘外翻固定即妥。但残留疝囊边缘的出血点一定要——结扎。     

门脉高压症猪脾组织中内皮素受体及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的意义

探讨胆汁性肝硬化门脉高压症猪脾组织中内皮素受体(ETR)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达及其对内脏血流动力学的影响.采用原位杂交方法检测实验组(n=10)和对照组(n=5)猪脾组织冰冻切片中ETR(ETAR、ETBR)及iNOS mRNA的表达.同时监测猪的门脉血流量(Qpv)、门静脉压(PPv)及平均动脉压(MAP).结果,实验组ETAR mRNA表达水平与对照组无显著差异(P＞0.05),而ETBR及iNOS mRNA表达水平显著高于对照组(P＜0.01),其中ETAR mRNA表达主要位于血管平滑肌细胞中;ETBR mRNA主要位于脾窦内皮细胞;iNOS mR-NA主要在血管平滑肌细胞、巨噬细胞和内皮细胞中.ETAR mRNA的表达与Qpv、Ppv无明显相关(P=0.11或P=0.08);ETBR与iNOS mRNA的表达水平分别与Qpv、PPv呈正相关(P＜0.05或P＜0.01);而分别与MAP呈负相关(P＜0.05或P＜0.01).研究表明ETBR及iNOS mRNA的表达可能在门脉高压症和内脏高血流动力学中起重要作用.     

胆管结石患者胆汁对人胆管癌细胞增殖的影响

目的观察胆管结石患者胆汁对人胆管癌细胞QBC939生长的影响 ,探讨胆管结石与胆管癌发生、发展的关系。方法应用噻唑蓝比色法检测 2 0份胆管结石患者胆汁和 10份正常胆汁对QBC939增殖的影响 ,应用流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果胆管结石患者胆汁与正常胆汁比较 ,明显促进QBC939细胞增殖 ,用胆管结石患者胆汁处理 4 8h的QBC939细胞增殖指数显著上升 (P <0 0 1) ,胆管结石胆汁组 (47%± 10 % )S期细胞比例比正常胆汁组 (2 3%± 3% )明显增高 (P <0 0 1) ,G0 /G1期细胞比例 (42 %± 8% )比正常胆汁组 (6 3%± 10 % )明显降低 (P <0 0 5 )。结论胆管结石患者胆汁具有潜在的促增殖活性 ,胆管结石与胆管癌的发生、发展关系密切     

线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 观察外源性线粒体融合素基因-2(Mfn2)对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的影响,探讨其抑制乳腺癌细胞产生增殖的机制.方法 将含有Mfn2cDNA的质粒在阳离子聚合物的介导下在体外转染MCF-7,蛋白印记法(Western blot)检测绿色荧光蛋白(GFP)、p21waf1、CDK2蛋白的表达,细胞计数测定Mfn2对MCF-7细胞增殖的影响,DNA直方图分析法测定Mfn2对MCF-7周期分布的影响,用Cyclins/DNA双参数流式细胞术对Cyclin A进行标记,Cellquest软件分析.结果 转染Mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP蛋白;细胞计数测定表明转染Mfn2cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受抑,DNA直方图分析法测定显示细胞停滞于S期;转染质粒组S期细胞占42.70%,转染空质粒组和空白对照组分别为17.15%、19.58%(P《0.05);用Cyclins/DNA双参数流式细胞术检测转染质粒组Cyclin A较对照两组明显升高;Western blot显示转染质粒组p21高表达,磷酸化CDK2低表达.结论 转染Mfn2基因可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,并使细胞停滞于S期.     

转染可溶性CD40基因的树突状细胞在体外对T淋巴细胞功能的抑制作用

目的探讨转染可溶性CD40(sCD40)基因的树突状细胞(DC)在体外对T淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的细胞毒活性的影响。方法采用脂质体转染法,将携带鼠CD40胞外区和绿色荧光蛋白的融合基因的质粒pEGFP-N1/sCD40转染小鼠DC细胞株(DC 2.4)。以Balb/c小鼠淋巴细胞为反应细胞,分别以转染组DC、空载体转染组(空载体组)DC和未行转染处理的DC(空白DC)作为刺激细胞,进行单向混合淋巴细胞培养,四唑氮化合物比色法检测细胞增殖情况。用乳酸脱氢酶释放试验和流式细胞术检测转染组DC及其培养上清液对CTL细胞毒活性及其凋亡的影响。结果转染组DC及其培养上清液对同种细胞刺激的淋巴细胞增殖反应有显著的抑制作用(P<0.05),并对特异性CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用(P<0.05);转染组DC可诱导CTL凋亡(P<0.05)。结论稳定表达sCD40-EGFP融合蛋白的DC,在体外对T淋巴细胞的增殖和CTL的细胞毒活性具有明显的抑制作用,并可诱导CTL凋亡。     

PDGF mRNA及TGF-β在门静脉高压症病人内脏血管重构中的表达及意义

目的　研究门静脉高压症病人脾动脉血小板源性生长因子 (PDGF)mRNA及转化生长因子 β(TGF β)的表达并探讨与门静脉高压血管病变的关系。方法　肝硬化门静脉高压病人 37例及外伤性脾破裂病人 17例 ,取脾门处脾动脉。原位杂交法检测PDGFmRNA的表达 ,免疫组化法检测TGF β的表达 ,经计算机图像处理后行统计学分析。 结果　对照组PDGFmRNA及TGF β表达为阴性或弱阳性 ,门静脉高压组PDGFmRNA及TGF β表达均明显增强 ,为中到强阳性 ,平滑肌层有明显表达。图像光密度值有显著性差异 (PDGFmRNA :73 2 6± 12 35vs 18 2 7± 5 86 ,P <0 0 5 ;TGF β:6 5 36± 9 74vs 12 17± 6 5 5 ,P <0 0 5 )。结论　门静脉高压内脏血管PDGFmRNA及TGF β的表达增加可能为高动力循环、毒血症等引起的血管损伤所诱导 ,并可加重平滑肌细胞过度增生及纤维化 ,在门静脉高压血管病变及细胞表型转化过程中有一定意义。     

门脉高压症外科治疗中应重视的几个问题

1　门脉高压症外科治疗应该是综合性治疗多种肝病导致的肝内血流受阻是形成门脉高压的始动因素 ,在肝脏病变未获彻底纠正前 ,门脉高压症的治疗显然是对症性质的。外科治疗的目的主要是预防和控制食管胃底曲张静脉破裂大出血。上消化道出血并非是门脉高压症的必然结果 ,即使已发生上消化道大出血 ,也不是全部适合或需要立刻手术治疗。因此 ,目前多数病人是以药物和内镜治疗为首选手段。据报道 ,第一次大出血的死亡率为 15%～ 50 % ,平均30 % [1] ,包括出血性休克和大出血诱致的肝功能衰竭所引起的死亡。因此门脉高压症引起的食管胃底曲张静脉…     

美国的10个细节

1当我站在帝国大厦上看纽约时,觉得和上海差别不大,高楼林立,热闹繁华,但驾车行驶在一些小城市或者乡村时,会感觉没法比。由此体会,中美之间的差距在大城市缩小了,在小地方依然很大。2中国人真多,一路上总能见到同胞,仿佛走在中国的景区。我能感觉到,美国人已经意     

肿瘤外科新入科护士的护理风险管理

总结肿瘤外科新入科护士的护理风险管理。由于新护士缺乏应对突发事件的知识和能力、缺乏专业能力,入科轮转学习期间存在安全隐患。对新护士进行病房突发事件应急处理的训练和专科业务培训,采取多种措施提高新护士的安全意识,使新护士提高专业水平和综合能力,从而消除安全隐患,提高护理质量及患者的满意度。