WWOX基因调控Lewis肺癌细胞免疫抑制效应研究

目的：探讨WWOX基因调控Lewis肺癌细胞免疫抑制效应。方法：将已构建的真核表达载体pCDNA4.0/myc-WWOX转染到Lewis肺癌细胞中,采用MTT法检测转染前后肿瘤细胞培养上清对鼠脾细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法检测肿瘤生长相关因子mRNA的表达。体内肿瘤局部注射pCDNA4.0/myc-WWOX质粒,计算抑瘤率并采用MTT法检测NK、CTL杀伤活性和淋巴细胞增殖能力。结果：WWOX基因转染细胞的培养上清对鼠脾细胞的增殖抑制作用与对照组比较显著下降（P〈0.05）;WWOX基因转染后TGF-β、VEGF、FasL三种肿瘤生长相关因子的mRNA表达降低;WWOX基因体内注射后能够抑制肿瘤生长,抑瘤率可达71%;NK、CTL的杀伤活性和淋巴细胞转化能力与对照组比较,具显著差异（P〈0.05）。结论：WWOX基因转染Lewis肺癌细胞具有抑瘤作用与免疫抑制效应,提示WWOX基因可能通过降低肿瘤生长相关因子的mR-NA表达、促进淋巴细胞增殖、提高NK和CTL的杀伤活性,实现其对Lewis肺癌细胞免疫抑制效应的调控。     

胸腺肽α1诱导MUC1特异性Th2型免疫应答

目的：采用黏蛋白与麦芽糖结合蛋白融合蛋白（MUC1-MBP）作为特异性抗原,研究胸腺肽α1（Tα1）加强诱导MUC1特异性免疫应答的类型,探讨其作为佐剂应用的可行性。方法：将C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组（注射生理盐水）、MUC1-MBP+BCG组（注射MUC1-MBP＋BCG）和MUC1-MBP和Tα1组（注射MUC1-MBP＋Tα1）,分别进行T细胞免疫活性、MUC1特异性抗体效价及亚类、Tα1联合MUC1-MBP抗肿瘤作用检测。第3次免疫后4~7 d无菌取脾脏组织,测定脾指数;淋巴细胞增殖反应测定各组小鼠的刺激指数（SI）;ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）和白细胞介素10（IL-10）的水平及小鼠血清中MUC1特异性抗体水平;第3次免疫后7 d,注射黑色素瘤细胞B16-MUC1,观察各组小鼠生存期。结果：与生理盐水组比较,MUC1-MBP+BCG组和MUC1-MBP+Tα1组小鼠脾指数与SI均升高（P<0.05或P<0.01）,MUC1特异性SI明显升高（P<0.05）。与生理盐水组比较,MUC1-MBP+BCG组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-2水平均明显升高（P<0.05）;IL-4和IL-10水平均略微升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与生理盐水组比较,MUC1-MBP+Tα1组小鼠脾细胞培养上清中IL-4水平明显升高（P<0.01）;IFN-γ、IL-2和IL-10水平均略微升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。MUC1-MBP+Tα1免疫小鼠能够产生抗MUC1特异性抗体且效价随浓度升高而升高。抗体亚型检测,与生理盐水组比较,MUC1-MBP+Tα1组IgG1水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,IgG2a水平无明显变化。肿瘤预防实验,与生理盐水组比较,MUC1-MBP＋BCG组和MUC1-MBP+Tα1组小鼠生存期未见明显差异。结论：MUC1-MBP联合Tα1更倾向于Th2型免疫应答,Tα1可以作为预防性疫苗佐剂使用,不适合治疗性疫苗使用。