陕西及其周边地区肺吸虫感染情况调查分析

目的:为了解陕西及其周边地区肺吸虫病的流行特征,做好肺吸虫病的防治工作。方法:采用皮内试验及酶联免疫试验对365例疑似肺吸虫病人进行流行病学分析。结果:365例疑似病人中有92例为皮试阳性,77例为酶联免疫吸附试验阳性,其中男61例,占总确诊病例数的79.22%,是女性患者的4倍(P<0.05),各年龄组阳性率以儿童组最高为25.66%,农村人口为89.60%,约为城镇人口的9倍。结论:陕西及其周边地区男性及儿童肺吸虫病发病率高,建议有关部门应加强对农村地区肺吸虫病的防治。     

我国恶性疟原虫地理株SSUrDNA特定序列的变异分析

采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，分别从我国安徽、海南及云南三省疟区来源的恶性疟原虫株基因组ＤＮＡ中，扩增出该虫小亚单位核糖体核糖核酸（ＳＳＵｒＲＮＡ）基因特定片段，长约５７０ｂｐ，将其插入Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９载体中，以双脱氧末端终止法测序。读序结果分析表明，恶性疟原虫地理株间及与巴西ＩＭＴＭ２２株７Ｇ８克隆间，ＳＳＵｒＤＮＡ特定片段序列具有高度同源性，差异仅表现为个别碱基置换、插入或缺失所致的点突变，且均发生在可变区中，其发生频率亦无明显差别。     

大蒜素体外抗疟作用的研究(摘要)

目的研究大蒜素对恶性疟原虫体外生长活性的影响.方法用新鲜配制或储存的疟疾完全培养基大蒜素稀释液在不同浓度(100μg/mL～5μg/mL)处理恶性疟原虫,实验过程中在12h,24h换液或者不换液.分别作用12h,24h和48h后,检测虫体感染率的变化分析药物的作用效果.同时以大蒜素处理正常红细胞观察对虫体宿主细胞的影响.结果以新鲜配制的大蒜素处理疟原虫时,作用12h后50μg/mL的浓度即可清除虫体,当作用48h后在低至10μg/mL的浓度也可杀灭原虫.而使用储存大蒜素换液或者新鲜配制的大蒜素不换液则需要较高的浓度.大蒜素处理正常红细胞时,在高于50μg/mL的浓度对宿主红细胞有破坏作用,而该浓度下虫体生长可被有效抑制.结论大蒜素在体外具有强烈的抗疟作用.30μg/mL是可以有效抑制疟原虫生长但对宿主红细胞没有损伤的适宜浓度.     

恶性疟原虫富组氨酸蛋白2的原核表达、纯化及表达产物的鉴定

目的 为将恶性疟原虫的富组氨酸蛋白２（ＨＲＰ２）应用于疟疾诊断和疫苗研究,本文原核表达、纯化及鉴定了恶性疟原虫的ＨＲＰ２。方法 将ＨＲＰ２基因片段克隆入原核表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１／ＨＲＰ２;诱导ｐＧＥＸ－４Ｔ－１／ＨＲＰ２转化的ＢＬ２１菌,纯化表达产物并免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠;以免疫色谱法鉴定表达产物,以免疫小鼠血清对受染红细胞（ＩＲＢＣ）进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 成功构建了ｐＧＥ     

以恶性疟原虫MSP1和AMA1疫苗组合免疫小鼠诱导保护性免疫

目的以MSP1和AMA1的DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗组合免疫小鼠,诱导针对疟疾红内期抗原MSP1和AMA1的保护性抗体。方法将编码恶性疟原虫MSP1全片段和AMA1胞外域的DNA免疫质粒(VR1020/190.3和VR1020/E)、痘苗病毒载体(rMVA/190.3和rMVA/E)及重组蛋白(d-GX190H和E)的同种类型疫苗混合,作为核酸疫苗(D)、病毒疫苗(V)及蛋白疫苗(P)按照“初始-强化”策略免疫小鼠。间接ELISA测血清中抗MSP1和AMA1抗体;用免疫血清进行体外原虫入侵红细胞抑制实验;由转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19和P.bANKA株分别对免疫鼠进行体内攻击。结果各组免疫血清中均产生了较强的抗体应答,抗MSP1抗体与抗AMA1抗体滴度的变化趋势一致。实验组免疫小鼠血清在体外对两株原虫入侵红细胞均有较大程度的抑制。体内攻击实验中实验组小鼠平均存活时间较对照组略长。结论采用以MSP1和AMA1为基础的DNA、重组痘苗病毒和重组蛋白疫苗的组合免疫小鼠能诱导出有效的保护性抗体。以上结果为疟疾红内期疫苗合理免疫方案提供了重要的实验依据。     

云南省间日疟原虫SSUrRNA基因片段的体外扩增、克隆及序列分析

根据已知间日疟原虫、其它相关原虫及人小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因序列,借助计算机程序分析,设计一对寡聚核苷酸引物。采用聚合酶链式反应(PCR)技术,从云南省两例间日疟患者血样DNA抽提物中,均扩增出长约641个碱基对(bp)的SSUrRNA基因特定片段;双脱氧链末端终止法测序结果表明,两份样本扩增片段DNA序列完全相同,但与背景序列比较,在第269位出现碱基置换由G变为A,而在第630位则缺失一碱基C,从而导致该两处限制性内切酶位点的改变。     

肾综合征出血热病毒(HFRSV)抗独特型抗体免疫调节初探

本文应用一株HFRSV抗独特型抗体(Ab_2)观察其对HFRSV感染BALB/c小鼠脾细胞体外增殖的影响,以及部分淋巴因子在其中的作用,旨在探讨抗独特型抗体对免疫应答的调节机理。从感染HFRSV小鼠脾细胞中分离制备单个核细胞悬液体外培养,加入不同剂量Ab_2,用~3H-TdR掺入法测定脾细胞增殖水平。结果Ab_2可明显抑制感染小鼠脾细胞在体外的增殖,并呈剂量依赖关系及具有独特型特异性。早期加入EL-4细胞上清或rHuIL-2可完全逆转此抑制作用,且具有剂量依赖和时间相关性。EL-4细胞上清含有IL-2和IL-6。对抗独特型抗体产生抑制作用的机制进行了讨论。     

适于标记的HFRS病毒组特异性McAb的建立及其应用

用陕西81-14A株HFRSV,免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗HFRSV抗体的C_4株杂交瘤细胞系。C_4株McAb与我国各地的28株及朝鲜的76-118株、Seoul株HFRSV均产生免疫反应,表明是HFRSV组特异性扩体,并适用于荧光素及辣根过氧化物酶标记。经初步应用,效果满意。     

HBV-TRL重组腺病毒载体的抗病毒活性

目的:观察有linker插入的乙肝病毒靶向核糖核酸酶(HBV-TRL)重组腺病毒载体(RAd)对HBV复制的抑制作用.方法:以第四军医大学病原生物学教研室已构建的pc DNA3.1(-)/TRL,TR,TRmut,HBVc和hEDN为基础,分别将目的片段TRL,TR,TRmut,HBVc和hEDN插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒共转染HEK293细胞,重组产生含各目的片段的复制缺陷型腺病毒,即RAd/TRL,TR,HBVc和hEDN,经鉴定、扩增及滴度测定.其中RAd/TRL,TR为实验组,其余重组腺病毒为对照组.将获得的重组腺病毒感染HepG2.2.15细胞后通过间接免疫荧光检测重组腺病毒在细胞中的表达,并应用荧光定量PCR法检测细胞上清中HBVDNA含量.同时,应用MTT比色法检测细胞的代谢活性.结果:成功获得了含TRL,TR,HBVc和hEDN等不同目的片段的复制缺陷型腺病毒载体.RAd/TRL在HepG2.2.15细胞中得到有效表达,并且明显降低了细胞上清HBV-DNA含量,与RAd/TR相比(P=0.0266,P＜0.05),与其他对照组相比(P＜0.01).MTT比色分析表明细胞代谢活性未受到影响(P＞0.05).结论:成功地构建了RAd/TRL,其有效表达成功地抑制了HBV的复制.