肾综合征出血热纯化疫苗候选毒株在Vero细胞上的适应传代及其免疫原性研究

目的 将肾综合征出血热纯化疫苗候选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法 将汉滩病毒H8207株和汉城病毒Y86013株在Vero细胞上进行连续终末稀释传代，采用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验和空斑减少中和试验，研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度、抗原量及免疫原性。结果 经过5次终末稀释传代，两株病毒在Vero细胞上均显示出良好的适应性，从第六代开始病毒滴度稳定在7．0Lg TCID50/m1以上，第八代两毒株抗原量均已达到1：64，H8207株抗原量继续升高，最高时达1：256。用两株病毒不同培养代次上清液制备的单价原液灭活疫苗免疫家兔二针，免疫血清对同型毒株的中和效价均达到1：10。结论 两株病毒已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero细胞肾综合征出血热灭活纯化疫苗的候选毒株。     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

本文用HFRS病毒McAbs免疫家兔,制备了抗Id抗体(Ab_2),用小鼠γ球蛋白-Sepharose4B免疫亲和层析柱纯化了Ab_2,并以ELISA试验对其特异性作了鉴定。结果表明,所制备的Ab_2具有良好的Id特异性,并能与所用的小鼠抗HFRS病毒单抗、兔抗HFRS病毒抗体和HFRS病人血清结合。同时提示,这种Ab_2可能具有替代抗原的免疫潜能。     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端编码基因真核表？…

构建以恶性疟原虫红内期重要的疫苗候选抗原－裂殖子表面蛋白羧基端编码分子量４２０００蛋白的基因片段为外源基因的可用作候选核酸疫苗的真核表达载体。方法目前对疟疾核酸疫苗的研究仅见于鼠疟，将恶性疟原虫ＦＵＰ株裂殖子表面蛋白１羧基端编码４２０００蛋白的基因片段用常规分子克隆方法，分别克隆入非分泌性真核表达载体ＶＲ１０１２和改建后的分泌型载体ＶＲ１０１２／ＴＡ中，通过ＰＣＲ和酶切鉴定出重组克隆。     

读者来信

编辑同志: 您好! 贵刊第5卷第3期报道了中国免疫学会正式成立,并确定贵刊为中国免疫学会会刊的消息。我们作为陕西省免疫学会的会员,对此表示衷心的祝贺!并祝贺《中国免疫学杂志》4年来取得的可喜成绩。     

以恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段基因为基础的复合核酸疫苗诱导小鼠体液免疫反应的研究

目的: 检测以恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 的17 区片段基因为基础的复合核酸疫苗VR1012/TPA/HG-MSP1-17(分泌性)和VR1012/HG-MSP1-17(非分泌性)诱导小鼠的体液免疫反应。方法: 分别用分泌性与非分泌性核酸疫苗肌注免疫小鼠。用间接ELISA法测定小鼠血清的特异性抗体。结果: 每只小鼠经3 次100 μg/100μl非分泌性核酸疫苗免疫后, BALB/c小鼠和C57BL/6 小鼠均产生明显的抗HG和抗真菌表达的MSP1 17 区蛋白(YMSP119 )抗体。但总体抗体水平不高。BALB/c小鼠经3 次200 μg/100 μl非分泌性核酸疫苗免疫后, 产生较高的抗HG抗体, 但抗MSP1-17 的抗体无明显变化。经3 次200 μg/100 μl分泌性核酸疫苗免疫后, 只产生较低的抗HG抗体。结论: 非分泌性核酸疫苗较分泌性核酸疫苗具有更强的免疫原性     

原虫基因转染的研究进展

随着恶性疟原虫 (Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ ,Ｐ ｆ .)2号[1] 、9号[2 ] 和 3号[3] 染色体序列的相继明了 ,关于Ｐ ｆ.基因组的研究大大向前迈进了一步 ,在未来的 2～ 3年内 ,将有可能完成其全部基因组序列分析 ,疟原虫研究即将或已经进入后基因组时代[4 ] 。对疟原虫各种基因及其基因产物的功能研究是发现有效疫苗和抗疟药物作用靶位的必要前提 ,但许多基因的功能 ,尤其是与疟原虫致病力有关的重要基因的功能尚未得以阐明 ,因而影响了疟疾防治工作进展。以往的基因功能研究局限于与已知功能基因的比较和间接地推测 ,近年来…     

单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因部分缺失 重组质粒的构建及序列分析

目的：构建ＨＳＶ１ 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法：以ｐ ＵＣ１８／ ＴＫ 重组质粒ＤＮＡ 为模板,用ＰＣＲ 方法扩增ＴＫ５′端５０３ｂｐ 基因片段,并将扩增的片段克隆入载体ｐ ＵＣ１８ 中（ｐ ＵＣ１８／ＴＫ１） ;用Ｐｓｔ Ｉ 和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切ｐＵＣ１８／ ＴＫ, 获得ＴＫ３′端３８３ｂｐ 片段, 将此酶切片段克隆入ｐＵＣ１８／ ＴＫ１ 中, 并进行测序。结果： 构建成重组质粒ｐＵＣ１８／ ＴＫ－ 。经酶切鉴定获得１ 条约９００ ｂｐ 的基因片段; 序列测定证实, ＨＳＶ１１７ｓｙｎ ＋ ＴＫ 基因缺失了第４９３ ～７４４ 位２５１ 对碱基。结论：成功地构建了部分缺失的ＨＳＶ１／ＴＫ－ 基因重组质粒,为研制其突变株奠定了基础。     

单纯疱疹病毒Ⅰ形胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达

用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-1TK)基因的pUC18/TK质粒,将切出的TK基因片段克隆入原核表达载体pWR450-1中,构建成HSV-1TK基因重组表达质粒pWR450-1/TK。以HSV-1TK特异性引物TK1For和TK2Rev进行PCR鉴定可扩增出预期的503bp的TK基因编码区部分序列;EcoRⅠ和HindⅢ双酶切质粒pWR450-1/TK,可切出约1150bp的DNA片段,表明重组质粒中已插入HSV-1TK基因片段。用IPTG诱导pWR450-1/TK/JM109,表达出相对分子质量（Mr）约为97000的TK和β-半乳糖苷酶(Mr55000)融合蛋白。薄层扫描显示,该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的27.47％。     

大鼠重组EPO结合蛋白的表达纯化及活性鉴定

EPO是调控骨髓红系造血的关键因子，其与红系祖细胞表面的特异受体EPO—R结合引发胞内信号机制，防止细胞凋亡并促进其增殖和分化。EPO—R胞外域是与EPO发生结合的受体区段，又称为EPO结合蛋白（EBP）。迄今，采用基因工程方法制备的EBP主要被应用于受体一配体结合特性及物理结构研究，其在治疗EPO反应性增生失调如红白血病和红细胞增多症中的可能性探讨尚未见报道。我们依据EPO-R与EPO结合的化学计量特性设计了串联融合的双体结合蛋白，采用原核系统进行表达，对其体内外结合活性进行了鉴定。     

复合PCR系统检测间日疟原虫的应用研究

应用一种简易、快速的复合 PCR扩增系统检测间日疟原虫 (P.v)及混合感染。方法 :以间日疟原虫和恶性疟原虫 (P.f)小亚单位核糖体核糖核酸基因 (SSUr DNA)特定片段为靶基因 ,设计并合成引物 ,建立复合 PCR扩增系统。采用煮沸法快速制备 DNA模板研究该系统的敏感性和特异性 ,并用于临床血样的检测。结果 :从间日疟原虫和恶性疟原虫感染血样中分别扩增出分子量大小为 70 5bp和 575bp的特定扩增带。而食蟹猴疟原虫、诺氏疟原虫及正常人血样均无扩增带出现。单独检测 P.v敏感度达到 0 .1 5× 1 0 -5(约 7个原虫 /μl全血 ) ,在 P.f存在的情况下检测 P.v敏感度为 0 .1 5× 1 0 -4 。检测 1 32例疟区门诊病人冻存血标本 ,1 0 4份与镜检法结果相同。并发现 1 4份混合感染和 5份为镜检虫种鉴别失误。结论 :该系统敏感性高 ,特异性强 ,操作简单 ,并可在一次扩增中同时检出间日疟原虫和恶性疟原虫 ,具有一定的推广应用价值。