恶性疟原虫顶端膜抗原-1(P.f AMA-1)基因在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化

本文采用PCR方法自 P.f 基因组中扩增了编码AMA-1完整胞外域及其相应结构域的基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-16b和pET-30a(+),经测序确证后将重组子转入BL21(DE3)进行诱导表达,用SDS PAGE鉴定,对可溶性和包涵体形式的重组蛋白分别采用天然状态和变性状态下的Ni离子亲和层析进行纯化,变性蛋白再在GSH/GSSG氧化还原条件下经透析重新折叠复性.所得纯化产物为进行有关AMA-1功能和免疫保护特性的研究提供了条件.     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1羧基端片段基因核酸疫苗的构建

核酸疫苗能引起明显的细胞免疫反应,在体内为真核天然表达,不需体外表达、纯化等繁琐工作;已有相当数量的试验表明其可引起明显的免疫保护.目前疟原虫仅有关鼠疟约氏疟红前期核酸疫苗的报道[Sedegah M et al.ProcNatl Acad Sci USA,1994;91:9866]我们选择了恶性疟原     

酶标抗免疫球蛋白单克隆抗体ELISA检测肾综合征出血热病毒抗体

早在1960年代已证实在灵长目的γ球蛋白之间存在共同的抗原。本文作者证实灵长目与非灵长目动物的γ球蛋白之间也存在抗原相似性,并制备出抗免疫球蛋白(Ig)种间交叉反应抗原单克隆抗体。在此基础上用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗Ig单克隆抗体(单抗1B11和2A_4),并应用     

rhBMP-2m对化疗损伤小鼠的修复治疗作用

目的 :探讨重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP 2m)对环磷酰胺 (CTX)致骨髓损伤小鼠的治疗作用。方法 :18只小鼠随机分为 3组 :即CTX注射组、BMP治疗组和PBS对照组 ,每组 6只小鼠。CTX组和BMP治疗组小鼠 ,一次性腹腔注射 2 0 0mg/kgCTX建立骨髓损伤的模型。注射CTX第 2天 ,BMP治疗组每只小鼠腹腔注射 0 .5mg的rhBMP 2m开始治疗。观察 3组小鼠外周血白细胞数的变化。分别在第 5天和第 8天 ,用流式细胞仪 (FCM )检测骨髓有核细胞中DNA的含量及细胞周期的变化 ,同时进行粒单细胞集落形成 (CFU GM)细胞培养。结果 :注射CTX后第 4天 ,BMP治疗组和CTX注射组的外周血白细胞数均降至最低点 ,然后逐渐回升 ,两组相比较无显著差异 (P >0 .0 5 )。注射CTX后第 5天 ,BMP治疗组骨髓有核细胞中 ,G0 /G1期细胞的比例较CTX组明显提高 ,细胞的坏死及凋亡率明显下降 (P <0 .0 1)。第 8天 ,BMP治疗组的骨髓有核细胞数较CTX组增加明显 (P <0 .0 1)。结论 :BMP对CTX所致小鼠骨髓的损伤具有修复治疗作用     

约氏疟原虫可溶性抗原对鼠疟红内期保护性免疫调节作用的研究

用约氏疟原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｙｏｅｌｉｙｏｅｌｉ，）可溶性抗原加佐剂免疫小鼠，观察原虫攻击后的保护作用及鼠脾细胞ＣｏｎＡ诱导的ＩＦＮ－γ分泌水平，并设佐剂对照组和空白组。结果显示：免疫组血原虫推迟出现，感染率明显低于其它两组（Ｐ＜００１）。感染时间明显缩短，佐剂对照组原虫率也低于空白组；且与空白组比较，免疫组和佐剂对照组ＩＦＮ－γ高峰出现早，说明ＩＦＮ－γ对抑制血中原虫起一定作用     

恶性疟原虫富组氨酸蛋白2重组蛋白与真核表达质粒免疫特性的比较

目的　探讨以恶性疟原虫富组氨酸蛋白 2 (PfHRP2 )为基础的不同形式的侯选疫苗诱导小鼠免疫应答的特性 ,为包含HRP2的恶性疟红内期疫苗的研制提供实验依据。方法　用重组蛋白TP HRP2及真核表达质粒pcDNA3 1(- ) HRP2免疫BALB c小鼠 ,对抗体应答的动力学及特异性进行分析 ,取脾细胞进行体外增殖实验 ,用免疫血清进行P f.体外生长抑制实验。结果　重组蛋白TP HRP2加福氏佐剂诱导BALB c小鼠产生了高水平的抗体 ,其抗体产生快、持续时间久 ,并具较高的特异性 ,细胞应答被同期激活 ,免疫血清可明显抑制红细胞内发育期疟原虫。重组真核表达质粒pcDNA3 1(- ) HRP2诱导BALB c小鼠产生了较高水平和具有一定特异性的抗体 ,其抗体的产生需要多次免疫和较长时间 ,初始化的脾细胞对抗原再刺激的回忆应答显著 ,但免疫血清对疟原虫的体外生长没有抑制作用。结论　HRP2重组蛋白与真核表达质粒在小鼠具有较为不同的免疫特性 ,HRP2重组蛋白疫苗具有潜在的应用前景     

不同血样收集和模板制备方法聚合酶链反应检测疟疾比较

目的：在聚合酶链反应（PCR）检测疟疾中寻找最佳的标本采集和模板制备方法。方法：以3种方法收集标本,8种方法制备模板,通过复合PCR对其在疟疾检测中的结果进行比较研究。结果：冻存血标本检出率略高达93％,磷酸三钠法制备模板方便且检出率高为96％。结论：冻存血标本采集法和磷酸三钠制备模板的方法用于疟疾PCR检测效果最好,值得推广。     

有linker插入的靶向核糖核酸酶抑制乙肝病毒复制

目的 :构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN )与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)之间插入有linker(Gly4Ser) 3 的融合真核表达载体 (该融合蛋白即为靶向核糖核酸酶 ) ,以优化分子折叠 ,并将其应用于抑制HBV复制的体外研究 .方法 :以第四军医大学病原生物学教研室已构建的pcDNA3.1 (- ) /TR为基础 .首先合成linker序列 ,经过退火形成双链并克隆入 pcDNA3.1 (- ) /TR生成pcDNA3.1 (- ) /HBc linker质粒 ;随后hEDN片段经PCR扩增后克隆入 pcDNA3.1 (- ) /HBc linker质粒生成 pcDNA3.1 (- ) /TNL质粒 ,其中效应分子 (hEDN)与靶向分子 (HBVc)之间为linker序列 .应用间接免疫荧光法检测 pcDNA3.1 (- ) /TNL在细胞的表达 ,并应用放免法测定其抗HBV活性 .同时 ,应用MTT比色法检测细胞的代谢活性 .结果 :成功构建了有linker (Gly4Ser) 3 介入的hEDN和HBVc真核融合表达载体 ;并在HepG2 .2 .1 5细胞中得到有效表达 .转染质粒 pcDNA3.1(- ) /TNL与 pcDNA3.1 (- ) /TR相比可明显地降低HepG2 .2 .1 5细胞上清中HBsAg的含量 (P <0 .0 5 ) .MTT比色分析表明细胞代谢活性未受到影响 (P >0 .0 5 ) .结论 :将linker插入靶向核糖核酸酶中可增强其对HBV复制的抑制效应     

HFRS病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

抗独特型抗体是由抗体(Ab_1)可变区上的独特型决定簇(Id)诱导产生的一种特殊的抗体(Ab_2)。由于Ab_2的可变区与Ab_1的Id在三维结构上相互补,或在部分一级结构上相类似,因此一部分Ab_2本身所具有的Id可以模拟始动抗原的作用。迄今尚未见到有关肾综合征出血热(HFRS)病毒Ab_2的研究报道。