HIV-1 Gag抗原HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析

初步筛选HIV-1 Gag抗原的HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化。采用超基序、蛋白酶解预测等相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞株测定肽与HLA-A*0201分子的亲和力和稳定性试验来评价修饰后表位与HLA-A*0201之间亲和性。结果:筛选出3个低亲和性CTL候选表位,经修饰后的表位与HLA-A*0201之间的亲和性均有不同程度的提高。YIYKRWIIL(259-267Y1),YQANFLGKI(429-437Y1)和YTNNPPIPV(249-257Y1)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.68、2.54和2.35,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8h。预测的低亲和力表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位。     

一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物诱发小鼠体液免疫反应的研究

本文用ＥＬＩＳＡ间接法检测了一种恶性疟原虫保护性抗原重组复合基因表达产物诱导小鼠体液免疫的反应。该复合基因包含了编码ＭＳＡ１、ＭＳＡ２和ＲＥＳＡ上的Ｔ和／或Ｂ细胞刺激位点的基因片段，同时加有ＩＬ－１和ＴＴ上的广谱Ｔ细胞刺激位点的基因片段。该复合基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达产物（简称复合抗原）在有和无佐剂的条件下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，均产生了明显的抗复合抗原的抗体，同时也产生了明显的抗可溶性裂殖子抗原的抗体。相反，用可溶性裂殖子抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠则不能产生明显的抗复合抗原的抗体。另外，经复合抗原免疫的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠也能产生明显的抗复合抗原的抗体     

Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性

目的:原核表达野生型p53与TatPTD(proteintransductiondomain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法:利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果:成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白,制备p53特异的抗血清,证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内。结论:Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础。     

HIV-1 pol抗原HLA-A＊0201限制性低亲和性CTL表位预测及改造分析

目的:初步筛选HIV-1 pol抗原的HLA-A*0201 限制性低亲和性CTL表位,预测并初步鉴定修饰后的表位与HLA-A*0201之间亲和性的变化.方法:采用超基序、蛋白酶解、HLA结合力等预测相结合的办法筛选HLA-A*0201限制性低亲和性CTL表位,通过氨基酸置换适当修饰,并以T2细胞检测HLA-A*0201分子与肽的亲和力和稳定性来评价修饰后表位.结果:筛选出的低亲和性CTL候选表位,经修饰后与HLA-A*0201 之间的亲和性均有不同程度的提高.其中,YVSLSFPQI (pol52-60Y1),YVSQIIEQL(pol673-681Y1),YIQKETWEA(pol548-556Y1)HLA-A*0201呈高亲和力结合,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(Dissociation Complex50,DC50)均大于8 h.结论:预测的pol抗原表位经过修饰可能会成为潜在的HLA-A*0201限制性表位.     

利用分子生物学方法推测寄生原虫间的进化关系

本对分子生物学方法在推测原生生物物种间种系发生关系中的重要作用，以期为兽医相关寄生生物的研究提供重要参考。     

约氏疟原虫可溶性抗原对鼠疟红内期保护性免疫调节作用的研究

用约氏疟原虫(简称P.y)可溶性抗原免疫小鼠,观察原虫攻击后保护作用及鼠脾细胞ConA诱导的IFN-γ分泌水平,并设佐剂对照组和空白组.结果显示:免疫组血中原虫推迟出现,感染率明显低于其它2组(P<0.01),感染时间明显缩短,佐剂对照组原虫率也低于空白组;且与空白组比较,免疫组和佐剂对照组IFN-γ高峰出现早,说明IFN-γ对抑制血中原虫起一定作用.     

浅谈中德高等医学教育

中德高等医学教育有各自的特点和优势，通过比较发现，中国高等医学教育要注重于基础理论的理解和记忆，而德国更注重于医学前沿发展的传授，其教学方式方法更灵活，更全面。通过对比，有助于借鉴和改进各自的教学体系，也有利于日益增加的医学留学人员适应於相应的教学体系。     

生物素-抗生物素标记蛋白的制备及BA-ELISA建立和初步应用的研究

探讨用生物素标记自制的五种生物素化蛋白最适标记量,并制备出高效价的Avidin-HRP结合物。在同一条件下与Sigma同类产品比较,自制产品的敏感性比Sigma的Avi-HRP高2～4倍。应用这些生物素-抗生物素标记蛋白建立了三种BAS-ELISA,经初步检测肺吸虫抗体,炭疽抗毒性抗体,肾综合征出血热病毒抗原和抗体,发现BA法的敏感性比常规ELISA高4～16倍(除检测HFRSV-Ab外),且敏感性和特异性也比ABC-ELISA好。     

固相致敏血球凝聚试验检测葡萄球菌肠毒素的研究

直接检测肠毒素是证实葡萄球菌食物中毒及食品卫生监控的重要依据。鉴于目前所用各种血清学检测法,在简易性、快速性及准确性上尚嫌不足,本研究初步建立了一种检测葡萄球菌肠毒素(简称葡肠毒素)的固相致敏血球凝聚技术(Solid-phase Aggregation of Coupled Erythrocytes SP-     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab_2)检测细胞表面抗原受体是将Ab_2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(IB_1)作间接免疫荧光试验,检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先,采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞,将淋巴细胞用RPMl1640不完全培养液离心洗一次后弃上清,将沉降细胞重新悬浮后调至0.1ml并加入5％小牛血清,混匀,取约10～30μ1加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上,800rpm离心5