抗小鼠SHP-1、SHP-2和SHIP三种蛋白酪氨酸磷酸酶单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备抗小鼠蛋白酪氨酸磷酸酶的单克隆抗体(mAb),分别以SHP-1、SHP-2和SHIP重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗相应磷酸酶的mAb。用Western blot检测mAb对重组蛋白和细胞中天然磷酸酶的反应性。共获得12株可稳定分泌抗磷酸酶mAb的杂交瘤细胞株。其中6株可分泌抗SHP-1 mAb(LX-SHP1.1~LX-SHP1.6),3株可分泌抗SHP-2 mAb(LX-SHP2.1~LX-SHP2.3),3株分泌抗SHIP mAb(LX-SHIP1~LX-SHIP3)。LX-SHP1.2~LX-SHP1.6,LX-SHP2.1和LX-SHP2.3,以及LX-SHIP2和LX-SHIP3可应用于相应重组蛋白的Westernblot检测。LX-SHP1.5,LX-SHP2.3,以及LX-SHIP2在EL-4细胞及原代T细胞相应天然磷酸酶分子的Western blot检测中有较好的实验效果。     

PAGE-4单克隆抗体的制备及表达分布

目的:制备抗PAGE-4 mAb并鉴定其特异性及敏感性,应用该抗体在蛋白质水平上分析PAGE-4在正常与疾病组织中的表达. 方法:以PAGE-4为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术建立稳定分泌抗PAGE-4 mAb的杂交瘤细胞系. 采用Western Blot及ELISA等方法鉴定抗体的特异性和敏感性. 应用正辛酸-饱和硫酸铵方法纯化抗体. 利用免疫组织化学方法对PAGE-4在正常与疾病组织中的表达进行分析. 结果:获得4株分泌特异性抗PAGE-4 mAb的杂交瘤细胞株,mAb具有较高的特异性与敏感性. 在正常男女生殖系统组织如:睾丸、前列腺、子宫中以及正常胰腺组织中有PAGE-4的表达,在前列腺癌、子宫内膜腺癌中PAGE-4高表达. PAGE-4在蛋白质水平上的表达格局与以往有关PAGE-4在mRNA水平上的报道一致. 结论:成功获得抗PAGE-4 mAb,为研究PAGE-4定位及功能提供了重要工具.     

参苓白术散对妇科腹部术后患者免疫功能的影响

目的探讨分析参苓白术散对妇科腹部术后患者免疫功能的影响。方法以我院2011年8月²013年8月,收治的120例妇科腹部手术后患者为研究对象,随机分为观察组与对照组,所有患者均予以常规治疗,观察组患者在此基础增加口服参苓白术散汤剂治疗,比较两组患者术后第5d白细胞总数、红细胞总数、C反应蛋白、IgM、IgA、IgG之间的差异。结果观察组治疗后第5d白细胞总数、红细胞总数恢复正常情况优于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后第5d反应蛋白低于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后第5d IgM含量高于对照组,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论参苓白术散具有减轻妇科腹部术后应激反应,提高患者细胞免疫和体液免疫应答,增强机体免疫力,促进机体健康恢复的作用。     

Treg与IL-17在复发性口腔溃疡中表达的相关性研究

目的:探讨Treg细胞和IL-17在复发性口腔溃疡(RAU)发病机制中的作用。方法:采用流式细胞术检测复发性口腔溃疡(n=21)和健康人(n=21)外周血中调节性T细胞比例的变化,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg在T淋巴细胞中的比例,ELISA检测外周血IL-17水平的变化。结果:复发性口腔溃疡的溃疡期CD4+CD25+Foxp3+Treg水平低于对照组,而IL-17的表达则高于对照组,CD4+CD25+Foxp3+Treg的比例和IL-17的表达呈负相关(r=-0.582,P0.05)。结论:调节性T细胞和IL-17在RAU患者的外周血中的表达异常,可能在RAU的发生发展中发挥了一定的作用。     

可溶型LAIR-1分子在冠心病患者血清中的ELISA检测

白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1,LAIR-1)为Ⅰ型跨膜糖蛋白,属免疫球蛋白超家族(IgSF)成员,1983年首先发现9·1C3/LAIR-1参与杀伤细胞的功能[1],1997年基因克隆成功[2]。LAIR-1基因位于人染色体19q13·4上的白细胞免疫球蛋白     

LAIR基因的克隆、原核表达及免疫反应性鉴定

目的：克隆和表达淋巴细胞相关免疫球蛋白样受体(1euko—cyte—associated immunoglobulin—1ike recepto，LAIR)，鉴定抗LAIR—1单克隆抗体(mAb)与LAIR—2分子的免疫反应性。方法：利用RT—PCR，从人外周血单个核细胞(PBMC)及白血病细胞系Jurkat和HL-60中克隆了LAIR cDNA。将LAIR—1的脑膜外区基因及LAIR—2cDNA，克隆入GST融合蛋白表达载体pGEX—4T—3中。以其转化E.cobi菌株后，在IPTG诱导下进行表达，表达产物用谷肮甘肽交联的Sepharose 4B纯化。用间接见ELISA法，鉴定抗LAIR—1mRNA对表达蛋白的免疫反应性。结果：克隆并表达了LAIR—1和LAIR—2cDNA。同时克隆了5种新的LAIR—1异型，其中从HL-60细胞克隆的2种包含LAIR—1开放读框(0RF)，从Jurkat细胞中克隆的3种为LAIR—1cDNA片段。mAb鉴定表明LAIR—1与LAIR—2的免疫反应性不同。结论：LAIR基因的转录、转录后的加工及表达，可能与个体和疾病状态有关。LAIR—1和LAIR—2免疫反应性的不同与其构象有关。     

肿瘤患者外周血中抑制性受体LAIR-1表达升高

目的:研究LAIR-1在肿瘤患者中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫应答中的作用.方法:应用夹心ELISA检测肿瘤患者血清中可溶型sLAIR-1的水平;应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察LAIR-1在患者PBMC中NK细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞和B细胞上的表达.结果:肿瘤患者血清sLAIR-1水平为(4.6±3.2) μg/ L,明显高于正常人血清sLAIR-1 水平(3.9±3.0) μg/L,P<0.05.NK细胞,CD4 T细胞及CD8 T细胞表达LAIR-1水平上调.肺癌患者CD4/CD8比值明显低于正常人,B细胞百分率明显高于正常人.NK细胞、CD4 T细胞CD8 T细胞中LAIR-1的表达阳性率高于对照组.结论:在肿瘤患者LAIR-1分子表达水平高于正常人.肿瘤患者抑制性受体LAIR-1 表达水平的上调可能与肿瘤的免疫逃逸有关.