意外胆囊癌伴右腋窝淋巴结转移1例报告及文献复习

胆囊癌以肝转移、腹腔淋巴结转移多见,腋窝淋巴结转移罕见.我科1例腹腔镜术后意外胆囊癌患者发生右侧腋窝淋巴结转移.现报道如下:     

抗人CD33单链抗体与CD80胞外区融合基因的构建、表达及其生物活性检测

目的构建及表达CD80胞外区与抗人CD33单链抗体(scFv)融合基因,并初步检测融合蛋白的生物活性。方法扩增CD80胞外区,利用人血清白蛋白(HAS)第三结构域亲水性的403-427位氨基酸作为链间连接肽将其与抗人CD33 scFv连接,并克隆至原核表达载体PET22b(+)中,经IPTG诱导,在大肠杆菌Rosseta(DE3)内得到融合蛋白的表达。表达产物经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的融合蛋白。并用间接免疫荧光法检测融合蛋白与人CD33抗原结合活性。结果克隆出CD80胞外区序列,大小为633 bp,正确合成作为链间连接肽的人血清白蛋白(HAS)第三结构域的403~427位氨基酸。成功构建融合基因表达载体,SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,融合蛋白在Rosseta(DE3)中得到高效表达,融合蛋白相对分子质量(Mr)约为55 000,复性后经过间接免疫荧光检测表明具有与人CD33抗原结合活性。结论成功构建PET22b(+)-CD80胞外区-CD33 scFv(ExCD80-CD33scFv)融合基因表达质粒,融合蛋白在宿主菌Rosetta(DE3)中获得了表达,并初步检测其生物学活性。     

寻常型天疱疮抗原细胞外区3-4表位的致病性研究

目的：研究寻常型天疱疮抗原(pemphigus vulgaris antigen，PVA)细胞外区3—4(extracellular domain，EC3—4)表位的致病性，并与EC1—2进行比较。方法：通过寻常型天疱疮新生鼠模型，构建含有PVA EC3—4片段的重组质粒，进行融合蛋白的表达和纯化。通过免疫家兔获得特异性抗血清，皮下注射至BALB/c新生鼠，从临床、组织病理、电镜和免疫荧光等方面进行评价。结果：实验组小鼠经皮下注射特异性兔抗EC3—4抗体后均未出现红斑、水疱等临床表现；组织病理亦未见表皮内水疱形成，可见棘层松解现象。电镜显示棘层细胞排列松散，细胞间距增宽，部分桥粒分离、溶解、消失。免疫荧光以正常小鼠皮肤为底物，显示IgG荧光沉积。结论：PVA EC3—4表位亦为PVA的致病性表位。     

Lman1基因复合杂合突变导致的凝血因子Ⅴ、Ⅷ联合缺乏症

凝血因子Ⅴ和Ⅷ(FⅤ、FⅧ)联合缺乏症(F5F8D)是一种罕见的常染色体隐性遗传性出血性疾病。近年的研究发现,该病病因在于基因lman1或mcfd2的突变。本研究的目的是对1名F5F8D先证者及其家系成员的lman1、mcfd2基因进行扩增、测序,以查找潜在的致病突变。采集了先证者及其父母的外周血样本,进行了凝血功能相关检查,包括活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、血浆纤维蛋白原(Fg)、FⅤ促凝活性(FⅤ∶C)、FⅧ促凝活性(FⅧ∶C),并提取基因组DNA,通过PCR法对先证者lman1基因的13个外显子及侧翼序列、mcfd2基因的4个外显子及侧翼序列进行特异性扩增,产物经纯化后直接测序,以检测致病突变。根据先证者突变所在位点,选择性扩增其父、母的相应片段,纯化、测序,以便进行家系分析。结果表明:先证者APTT82.2秒、PT19.6秒、TT18.6秒,Fg2.9 g/l,FⅤ∶C 7.1%,FⅧ∶C 18.7%。先证者及其母亲lman1基因第8外显子区出现杂合性单碱基插入c.912_913insA,导致蛋白序列改变p.Glu305fsX20;先证者及其父亲lman1基因11外显子区出现杂合性无义突变c.1366CT,导致p.Arg456X。结论:先证者lman1基因的复合杂合突变c.912_913insA、c.1366CT是导致其发病的原因;前者继承自其母,后者继承自其父。这种复合杂合突变的组合方式尚未见有报道。     

桡骨小头骨折的治疗

Objective To treat radial head fractures with open reduction and internal fixation, removal of the radial head and artificial joint replacement based on different fracture types to discuss the outcome of these methods and summarize optimal strategy for treatment of radial head fractures. Meth-ods A retrospective study was done on data of 47 patients with 48 radial head fractures treated in our de-partment from November 1999 to May 2008. Among them, nine patients were treated conservatively (all type Mason Ⅰ fractures), 28 treated with open reduction and internal fixation (one patient with type Ma-son Ⅰ fracture, 14 with type Mason Ⅱ and 13 with type Mason Ⅲ), eight with removal of radial head (three patients with type Mason Ⅲ fractures and five with type Ⅳ) and three with artificial joint replace-ment (all type Mason Ⅳ fractures). Results All patients were followed up for average 2.8 years (1-4.4 years). Two patients treated with artificial joint replacement were followed up for six months and three months respectively. According to the Mayo Elbow Performance Index, the excellence rate was 8/9 in conservative treatment, 82% (23/28) in open reduction and internal fixation, 6/8 in removal of the radial head and 3/3 in artificial joint replacement respectively. Conclusions The radial head fracture should be given anatomical reduction for early functional exercise. Conservative treatment can be used for type Mason Ⅰ fractures, open reduction and internal fixation for type Mason Ⅱ , type Mason Ⅲ fractures and part of type Mason Ⅳ fractures. The removal of radial head or mental prosthesis replacement are al-ternative for parte of type Mason Ⅳ fractures that can not attain stable fixation through open reduction and internal fixation.     

IL-15与IL-21细胞因子组合优化临床级人NK细胞培养体系

目的探讨IL-15、IL-21细胞因子组合建立的临床级人NK细胞培养体系对NK细胞增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响。方法分离9例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),根据以下3组进行扩增培养:(1)对照组(我科临床级人NK细胞培养体系),(2)IL-15组(对照组+IL-15),(3)IL-15/IL-21组(对照组+IL-15+IL-21)。台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力;流式细胞术分析免疫细胞表型和NK细胞活化受体表达;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性。结果培养至14 d,IL-15/L-21组细胞总数明显升高,NK细胞增殖倍数达到(761.68±449.30)倍,明显高于IL-15组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-15/IL-21组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。3组培养物中CD3~-/CD56~+细胞百分率比较,IL-15/IL-21组和IL-15组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中CD3~+/CD4~+细胞百分率均呈下降趋势,且IL-15/IL-21组和IL-15组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组中总CD3~+细胞百分率比较,IL-15组明显低于对照组(P<0.05),但IL-15/IL-21组和IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。IL-15/IL-21组NKG2D活化受体表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但与IL-15组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组中CD3~+/CD56~+细胞百分率、CD3~+/CD8~+细胞百分率以及NKp46活化受体的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。相同的效靶比,3组细胞的细胞毒作用比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用IL-15/IL-21组合优化人NK细胞培养体系,可以选择性地扩增NK细胞,提高培养物中NK细胞数量和细胞总数,以及活化受体NKG2D的表达水平,这将为优化临床级人NK细胞制备体系提供科学依据。     

肥大细胞类胰蛋白酶在病理性瘢痕中的表达研究

目的 研究肥大细胞类胰蛋白酶(mast cell tryptase,MCT)在病理性瘢痕中的表达及分布情况,探讨MCT基因在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤中是否存在差别.方法 采集未经治疗的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤各20例,应用免疫荧光组化对MCT的表达进行定位,应用实时荧光相对定量PCR进行mRNA基因水平的相对定量分析.结果 MCT主要集中在瘢痕组织的胶原纤维柬之间,以瘢痕组织浅层分布较多;实时荧光PCR相对定量结果显示MCT基因在瘢痕疙瘩中表达高于增生性瘢痕和皮肤(P<0.01),瘢痕疙瘩中MCT基因表达量约为增生性瘢痕的2.5倍,皮肤的5.4倍.结论 MCT在瘢痕的形成中可能起一定的作用.     

仅保留门静脉血供的肝门部胆管癌根治术

目的 探讨仅保留门静脉血供的肝门部胆管癌根治术的适应证和方法,以进一步提高肝门胆管癌的治疗效果.方法 对2006年7月至2007年12月收治的6例肝门部胆管癌,均采取左半肝切除、肝外胆管切除、肝动脉切除、右肝管空肠吻合术. 结果6例均顺利恢复,术后发生胆漏1例、无肝功能衰竭及围手术期死亡病例;术后随访10～23个月,均存活.结论 仅保留门静脉血供的肝门部胆管癌根治术在严格掌握适应证的前提下是可行的,可提高肝门部胆管癌的根治切除率,改善患者预后.     

彩色多普勒超声在TIPSS围手术期及远期疗效评价中的临床应用

目的:探讨彩色多普勒超声在经颈内静脉肝内门体静脉支架分流(TIPSS)围手术期及中、远期疗效评价中的临床应用价值。方法:对拟行TIPSS术的门脉高压症患者行CDFI检查,包括肝脏、脾脏解剖学及肝内血管毗邻解剖学观察,门静脉血流的测定、肝动脉血流的测定、术后支架功能的测定;建立门静脉压力与门静脉血流量的回归方程。结果:1)门静脉术后不同时期先内径减小,然后呈逐渐加大趋势;血流速度术后加快然后缓慢下降;血流量术后增加,然后缓慢下降;充血指数术后下降,然后缓慢增加。2)肝动脉血流围手术期及中、远期肝动脉各参数均值均无显著差异。3)术中测量门静脉压力为(37.59±7.44)cm H2O(26～52 cm H2O),门静脉压力与其血流量回归方程为:Y^(Ppv,cm H2O)=16.302+0.018X(Qpv,m L/min)。结论:彩色多普勒超声可以为TIPSS提供快捷、方便、实时、有效的影像学评估,并可以量化、客观、准确、全面的评估TIPSS各时期相关的血流动力学特征,是TIPSS术前筛查、术中指导、术后复查及中、远期评价的良好手段,可以指导TIPSS诊疗的全过程。     

Sprouty 2蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中表达的实验研究

目的:观察人乳腺癌MCF-7细胞上Sprouty 2蛋白的表达情况,进一步研究Sprouty 2蛋白在乳腺癌的发病机制中的生物学功能。方法:通过培养Sprouty 2蛋白表达的乳腺癌MCF-7细胞,试验组采用Sprouty 2蛋白特异性抗体孵育,对照组采用DPBS代替一抗进行孵育,以流式细胞免疫荧光法检测Sprouty 2蛋白的表达情况。结果:以流式细胞免疫荧光法发现,试验组MCF-7细胞中的Sprouty 2蛋白阳性细胞百分数为(31.1±0.6)%,免疫细胞荧光强度明显弱于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乳腺癌的发生与Sprouty 2蛋白的表达失调有关。