稳定表达RASSFIA基因肝癌细胞株的建立

目的建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。方法真核表达载体pcDNA3．1( )RASSF1A经阳离子脂质体介导转染肝癌细胞株QGY-7703和Hep3B，通过G418筛选阳性细胞克隆，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot鉴定目的基因的表达。结果(1)QGY-7703，Hep3B细胞株的G418最佳筛选浓度分别为800ug／ml和400ug／ml；(2)QGY-7703和Hep3B细胞株各获得2个稳定表达RASSF1A基因的细胞克隆。结论成功建立了稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。     

稳定表达RASSF1A基因肝癌细胞株的建立

目的建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。方法真核表达载体pcDNA3.1(+)RASSF1A经阳离子脂质体介导转染肝癌细胞株QGY-7703和Hep3B,通过G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot鉴定目的基因的表达。结果 (1)QGY-7703,Hep3B细胞株的G418最佳筛选浓度分别为800 μg／ml和400 μg／ml;(2)QGY-7703和Hep3B细胞株各获得2个稳定表达RASSF1A基因的细胞克隆。结论成功建立了稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。     

杰出青年医师培养工程对医师科研和诊疗水平提升效果研究

目的：探讨杰出青年医师的培养模式，以加快医师队伍建设步伐，为提升医院实力提供人才保障和智力支撑。方法：对某大学附属医院青年医师培养工程入选人才在培养前后三年获得的科研和诊疗技术成果数，以及人才在三年培养期与未入选人员获得的科研及诊疗技术成果数进行对比分析。结果：青年医师培养工程入选人才在经过培养后获得的高层次科研项目、高水平科研成果、技术奖项明显高于未入选人员。差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论：青年医师培养工程对医师科研和诊疗水平的提升有显著效果，有助于医院整体实力的提升。     

基因启动区异常甲基化导致肝癌中RASSF1A基因外失活的研究

目的观察肝癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达情况和由于启动区异常甲基化导致其基因外失活的状况，并分析DNA异常甲基化与肝癌临床相关因素之间的关系。方法利用RT—PCR和MS-PCR的方法，结合DNA测序和Taq I酶切消化法，分析了24例肝癌标本、4株肝癌细胞株（SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703）中RASSF1A基因的表达情况，以及其基因启动区异常甲基化的情况。采用甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理肝癌细胞株，观察RASSF1A重新表达的情况。结果66．7％的肝癌组织未表达RASSF1A；4株肝癌细胞株中仅SMMC7721检测到RASSF1A的表达。83．3％的肝癌组织及4株肝癌细胞株都发生了异常甲基化，而正常肝组织和正常肝细胞株（L02）中却未发现甲基化。甲基化与肝硬化、乙肝表面抗原、肿瘤分化程度及血管浸润和远处转移有相关性。原来RASSF1A表达失活的3株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理后，又重新恢复了表达。结论基因转录启动区的异常甲基化是导致肝癌中RASSF1A表达失活的主要原因。检测RASSF1A启动区异常甲基化可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现和早期诊断，以及预后的判断。     

RASSF1A基因在肝癌中表达失活的研究

最新研究进展揭示，抑癌基因功能的抑制或失活，除了与基因片段的丢失，DNA序列的错位、缺失、重组、变换、点突变等机制相关外，还与DNA序列中CpG岛（CpG island）中胞嘧啶（C）碱基环上发生的甲基化（^mCpG）有极其重要的相关性。RASSF1A基因（RAS association domain family 1 Agene）这一由Dammann等发现并命名的基因，在原发性肝癌中的表达情况则未有报道。     

正交分析法优选半乳糖化羧甲基壳聚糖磁性纳米载体的制备条件

目的:优选半乳糖化羧甲基壳聚糖磁性纳米载体(galactosylated-carboxymethyl chitosan-magnetic iron ox-ide nanoparticles,Gal-CMCS-Fe3O4NP)的制备条件。方法 :采用正交分析试验方法 ,以Fe3O4NP与羧甲基壳聚糖(car-boxymethyl chitosan,CMCS)质量比、pH值和搅拌时间为考察因素,纳米载体的粒径和磁响应性为考察指标。结果 :Fe3O4NP与CMCS的质量比为1∶2、pH值为7、搅拌时间为1 h时为最佳制备条件,最终所制备的Gal-CMCS-Fe3O4NP的平均粒径为20 nm,具有较好的磁响应性。结论:获得较满意的Gal-CMCS-Fe3O4NP的制备条件,纳米载体性状符合要求。     

原发性肝癌中RASSF1A基因表达失活及其临床意义

目的 研究肝癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达情况和由于启动区异常甲基化导致其基因外失活的状况,并分析DNA异常甲基化与肝癌临床相关因素之间的关系.方法 利用RT-PCR和MS-PCR的方法,结合DNA测序和TaqⅠ酶切消化法,分析24例肝癌标本、4株肝癌细胞株中RASSF1A基因的表达情况,以及其基因启动区异常甲基化的情况.采用甲基化抑制剂5'-Aza-CdR处理肝癌细胞株,观察RASSF1A重新表达的情况.结果 66.7%的肝癌组织未表达RASSF1A;4株肝癌细胞株中仅1株检测到RASSF1A的表达.83.3%的肝癌组织及4株肝癌细胞株都发生了异常甲基化,而正常肝组织和正常肝细胞株(L02)中却未发现甲基化.甲基化与肝硬化、乙肝表面抗原、肿瘤分化程度及血管浸润和远处转移有相关性.原来RASSF1A表达失活的3株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5'-Aza-CdR处理后,又重新恢复了表达.结论 基因转录启动区的异常甲基化是导致肝癌中RASSF1A表达失活的主要原因.检测RASSF1A启动区异常甲基化可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现、早期诊断以及预后的判断.     

抑癌基因RASSF1A在肝癌中表达的研究

目的研究抑癌基因RASSF1A在肝癌组织以及肝癌细胞株中的表达情况及其与临床相关因素间的关系。方法收集24例手术切除的肝癌及其癌旁组织以及4株肝癌细咆株（SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703（由国家人类基因组南方中心提供）。用RT-PCR和Northern Blot的方法来分析基因RASSF1A在肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况。结果67％的原发性肝癌组织中未检测到RASSF1A的mRNA，而相应的癌旁组织中仅33％的样本未表达RASSF1A；75％（3／4）肝癌细胞株也未表达RASSF1A。结论RASSF1A在肝癌中是一潜在的抑癌基因．RASSF1A基因的失表达在原发性肝癌的发生发展中起重要作用，检测RASSF1A的表达情况可用于对肝癌的早期发现和早期诊断，结合临床相关因素对肝癌预后评估也有帮助。     

磷脂酰肌醇3(PI3K)激酶信号途径对血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与I型胶原表达的影响

目的观察磷脂酰肌醇3激酶特异性抑制剂(LY294002),对血小板源生长因子(PDGF-BB)促大鼠肝星状细胞(HSC)增殖与Ⅰ型胶原表达的影响,并探讨其作用机制。方法用不同浓度的PDGF-BB和LY294002对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)进行处理,MTT法检测细胞的增殖,逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测HSC-T6内I型胶原mRNA的表达。结果PDGF-BB在浓度1~10 ng/ml时呈剂量依赖性地促进HSC细胞增殖(P<0.05),当浓度大于10 ng/ml时处理组间无显著差异(P>0.05),其促增殖作用达到饱和。5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L的LY294002均能显著且剂量依赖性地抑制PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖(P<0.001)。PDGF-BB能促进HSCⅠ型胶原mRNA表达,24 h、48 h时相对于对照组的表达量为112.2%,182.5%。LY294002能显著抑制PDGF-BB促Ⅰ型胶原表达,24 h4、8 h时相对表达量为76.4%,52.6%。结论磷脂酰肌醇3激酶信号途径是调节血小板源生长因子促肝星状细胞增殖与分泌胶原的重要通道,抑制该通路可以抑制肝星状细胞增殖和胶原表达,具有抗肝纤维化的作用,对防治肝纤维化有一定的意义。     

CUSA精细解剖法在改良乳腺癌根治中的应用

目的:比较CUSA精细解剖法与传统锐性解剖法行乳腺癌改良根治术的临床效果。方法:回顾性分析60例乳腺癌改良根治术手术资料,其中22例用CUSA精细解剖法手术,38例用传统锐性解剖法,比较两组的手术时间、术中出血量、术后引流量、术后再出血、引流管留置时间及术后并发症等。结果:CUSA精细解剖法组与传统锐性解剖法组相比,两组手术时间、出血量、引流管留置天数、总引流量差异有统计学意义;两组皮下积液、游离皮瓣坏死、术中副损伤和术后再出血率差异无统计学意义。结论:乳腺癌改良根治术应用CUSA精细解剖法效果好,特别在保护神经方面,能明显减轻患者术后痛苦,提高生活质量。