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人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:扩增、克隆人骨形成蛋白-3(hBMP-3)成熟肽cDNA基因,利用大肠杆菌表达hBMP-3成熟肽.方法:PCR方法扩增hBMP-3成熟肽cDNA基因,双脱氧终止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pDH,受控于PRPL启动子,重组质粒pDHB-3m以大肠杆菌DH5α为宿主菌在42℃进行温度诱导.结果:扩增出hBMP-3成熟肽cDNA基因,序列测定完全正确;含重组质粒pDH-B3m的工程菌诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,分子质量为14.5ku,与预期hBMP-3成熟肽分子量大小一致,约占菌体总蛋白的28%.结论:成功扩增、克隆hBMP-3成熟肽cDNA基因,并可在大肠杆菌中得到高效表达 相似文献
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正咳嗽变异型哮喘(cough variant asthma,CVA)是以慢性咳嗽为主要或唯一表现的特殊类型哮喘[1],并常反复发作。CVA缓解期的治疗对防止或减少急性发作有重要作用。笔者运用自拟桔梗蜈蚣散配合穴位敷贴治疗CVA缓解期疗效显著,现报道如下。1临床资料1.1一般资料154例均为2005年9月-2011年9月天水市第四人民医院呼吸科门诊患者。按门诊顺序号随机分为3组。治疗组52例,其中男28例,女24例;年龄16~69岁,平均(46.3±7.8)岁;病程65~131 d,平均(112.67±28.12)d。 相似文献
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携载rhBMP-2微球的新型复合人工骨的释药及成骨活性研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 制备一种具有良好降解性和成骨活性,可注射的自凝固新型骨修复材料。方法制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球,并将其与rhBMP-2/磷酸钙骨水泥(CPC)复合。制备出rhBMP-2/PLGA微球/CPC复合人工骨。测定了复合材料释药速度,将复合材料及rhBMP-2-CPC分别植入兔双侧股骨髁骨缺损区域,通过X线、组织学观察比较不同时期材料的降解及成骨情况。结果 复合材料各时间点的体外释药量均大于单纯rhBMP-2/CPC组.与单纯rhBMP-2/CPC材料相比较,复合材料植入体内后不同时间点材料的降解和新骨生成均高于单纯rhBMP-2/CPC植入组。结论 rhBMP-2/PLGA微球的掺入可明显加快rhBMP-2的释放。提高材料的降解速度和成骨活性。 相似文献
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人防御素-α克隆表达纯化及生物活性初步检测 总被引:1,自引:1,他引:0
防御素(Defensin)是一类阳离子大环形多肽,在人体多种器官和组织广泛存在,起着重要的屏障防御作用,对G+/-菌、真菌及病毒都有杀灭作用.临床观察表明,测定血浆及各种体液中防御素的改变有助于某些炎症性疾患的诊断,如脓毒症、细菌感染及早产等.此外,提纯或重组防御素作为“超级抗生素”来取代传统的抗生素已成为药学界的研究热点.本研究拟在大肠杆菌中表达人防御素-α,建立稳定表达的工程菌和纯化、复性技术途径,获得活性蛋白,为进一步研究提供材料. 相似文献
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目的研究联合使用骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞成骨表型的影响。方法向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-2和bFGF,观察成纤维细胞形态学变化、碱性磷酸酶(ALP)活性与染色的情况和骨钙素表达的变化,同时观察细胞增殖周期的变化。结果在两种因子作用下,成纤维细胞由长梭形向多角形方向转化,细胞体积增大、细胞内颗粒增多;成纤维细胞ALP活性增高、骨钙素表达增多,细胞内ALP染色加深;细胞增殖周期缩短。结论联合使用rhBMP-2和bFGF可以促进成纤维细胞成骨表型表达并促进细胞增殖。 相似文献
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目的:探讨rhBD3-BPI是否对革兰阴性菌具有抗菌活性.方法:采用密度梯度稀释法检测rhBD3-BPI对铜绿假单胞菌标准株和不同来源的临床多药耐药革兰阴性菌株的抗菌活性,确定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).以基因工程重组的人β-防御素3(rhBD3)作为对照.结果:rhBD3-BPI对各待检菌的MIC在1~4 μg·mL-1之间,MBC在4~8 μg·mL-1之间.rhBD3对革兰阴性菌的MIC在4~8 μg·mL-1之间,MBC在8~16μg·mL-1之间.rhBD3-BPI和rhBD3对G-菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度有统计学差异(分别为P=0.006 0、P=0.005 3),rhBD3-BPI对G-1菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度低于rhBD3对G-1菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度.结论:rhBD3-BPI和rhBD3均对革兰阴性细菌具有显著的抗菌活性,两者之间具有显著差异. 相似文献
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目的 :对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法 :对人成骨样细胞Saos 2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周 /分钟 ,加载 12小时后分别提取牵张力作用后Saos 2细胞及未作处理的正常Saos 2对照细胞的mR NA ,反转录制备cDNA ,将cDNA进行消减杂交 ,构建加载细胞与未加载细胞的差异表达基因的扣除cDNA文库 ,克隆后进行序列测定。结果 :克隆到的基因片段中 ,功能已知基因片段 15个 ,功能未知基因片段 2个 ,其中牵张力敏感基因 (SSG1)位于 9号染色体上 ,功能未知 ;牵张力敏感基因 (SSG2 )位于 18号染色体上 ,与转录因子 2 ,4高度同源。结论 :用消减杂交技术可以对人成骨细胞样机械牵张力敏感基因进行有效的克隆研究。 相似文献
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0 引言 骨形成蛋白 [1 ] (bone morphogenetic proteins,BMPs)是属于 TGF-β超家族的成员 ,目前已有 18个 h BMP基因被克隆 .除 BMP- 1外 ,其他 BMPs在胚胎时期骨组织分化发育、成年骨损伤修复、胚胎发育期中胚层的诱导和分化以及神经系统的发育和修复等方面都起着重要作用 [2 - 4 ] ,因而BMPs有十分乐观的临床应用前景 .利用 E.coli表达的不同的长于成熟肽的羧端肽经复性后均具有不同程度诱骨活性 [5 ,6 ] ,但对短于成熟肽的肽段及其氨基酸组成与其生物学活性的关系 ,尚未见报道 .在上述工作的基础上 ,本研究在大肠杆菌中表达削… 相似文献