艰难梭菌细胞毒素B功能区的表达

1 材料和方法 1.1 材料 限制性核酸内切酶,T4DNAligase购自New England Biolab公司. 厌氧发生剂、脑心浸液(干粉)购自生物梅里埃公司(bioMerieux). 其他试剂为国产分析纯. 艰难梭菌(clostridium difficile, C.d VPI10463)从兰州生物制品研究所购买. 大肠杆菌菌株BL21(DE3)及质粒PET22b( )系南方医科大学消化研究所存.     

性激素水平与男性冠心病发病关系的探讨

目的探讨性激素水平与男性冠心病之间的关系。方法用放射免疫法分别测定68例男性冠心病患者和15例进行健康体检的男性成年人的血清睾酮（T）和雌二醇（E2）水平及E2／T的比值。结果男性冠心病患者的性激素水平处于失衡状态。其E2水平和E2／T比值显著高于健康对照组（P〈0．05），而T水平显著低于健康对照组。结论睾酮水平降低和雌激素水平增高是男性冠心病发病的危险因素。     

尿11-脱氢-血栓素B2对2型糖尿病患者冠状动脉病变的诊断价值研究

目的 探讨尿11-脱氢-血栓素B2（11-DH-TXB2）对2型糖尿病患者冠状动脉病变的诊断价值。方法 收集2014年11月-2015年10月中国人民解放军第305医院因胸闷、胸痛疑诊为冠心病或已明确诊断为冠心病行经皮冠状动脉介入治疗的2型糖尿病患者156例,根据冠状动脉造影检查结果分为2型糖尿病合并冠状动脉病变组（冠状动脉病变组）105例及单纯2型糖尿病组（对照组）51例。收集患者的性别、年龄、糖尿病病程、身高、体质量,计算体质指数（BMI）,检测空腹血糖（FPG）、血脂、同型半胱氨酸（Hcy）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、糖化血红蛋白（HbA1c）、D-二聚体（D-D）、纤维蛋白原（Fg）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、尿11-DH-TXB2水平,根据冠状动脉造影结果评价Gensini评分。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价尿11-DH-TXB2诊断2型糖尿病患者冠状动脉病变的价值。结果 对照组与冠状动脉病变组患者性别、BMI、FPG、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、HbA1c、Fg、TT比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;冠状动脉病变组患者年龄、糖尿病病程、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、Hcy、hs-CRP、D-D、尿11-DH-TXB2水平高于对照组,PT、APTT低于对照组（P＜0.05）。冠状动脉病变组患者Gensini评分为5～60分,Gensini评分与年龄、糖尿病病程、Hcy、hs-CRP、D-D、尿11-DH-TXB2水平呈正相关（r=0.259,P=0.001;r=0.235,P=0.003;r=0.308,P＜0.001;r=0.163,P=0.042;r=0.396,P＜0.001;r=0.228,P=0.004）,与APTT呈负相关（r=-0.190,P＜0.05）;Gensini评分与PT无直线相关关系（r=-0.070,P=0.385）。多元线性逐步回归分析结果显示,糖尿病病程、Hcy、D-D、尿11-DH-TXB2水平进入方程,回归方程为Gensini评分=-7.468+0.378病程+0.354Hcy+0.075D-D+2.731(尿11-DH-TXB2)。尿11-DH-TXB2诊断2型糖尿病患者冠状动脉病变的ROC曲线下面积（AUC）为0.670〔95%CI（0.582,0.758）〕,最佳临界点为3 622 pg/mgUcr,灵敏度为71.4%,特异度为68.6%,阳性预测值为82.4%、阴性预测值为53.9%。结论 尿11-DH-TXB2作为一种安全、简便、灵敏的无创性检查方法,对2型糖尿病患者冠状动脉病变早期筛查具有一定的诊断价值。     

受试者特征曲线评价妊娠相关血浆蛋白A在急性冠状动脉综合征早期诊断中的价值

目的探讨外周血炎症标志物妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)在急性冠状动脉综合征(ACS)早期诊断中的应用价值。方法测定60例ACS患者发病12 h内的外周血PAPP-A与超敏C-反应蛋白(hs-CRP),并同时测定30例稳定型心绞痛与30例健康志愿者PAPP-A与hs-CRP作对照,描绘相应的受试者特征(ROC)曲线并进行ROC曲线分析。结果PAPP-A在AMI组和UA组ROC曲线下面积(AUC)分别为(0.890±0.034)(、0.854±0.049),均大于hs-CRP(分别为0.759±0.050、0.781±0.040)。PAPP-A在ACS组的ROC曲线下面积(0.872±0.030)亦大于hs-CRP(0.770±0.042)。结论PAPP-A较hs-CRP具有更好的ACS诊断价值,有望成为新的ACS早期诊断的炎性标志物。     

自体骨髓干细胞动员对实验兔急性冠脉综合征破裂斑块的治疗作用

目的 研究自体骨髓干细胞动员对急性冠脉综合征(ACS)兔破裂斑块模型的治疗作用.方法 20只雄性新西兰白兔,用液氮冻伤术建立ACS破裂斑块模型,动员组注射重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)动员自体骨髓干细胞,对照组注射生理盐水.分别于动员后1周、4周分批处死兔子取出血管,HE染色,光镜及电镜观察斑块修复情况;免疫组化方法检测CD34+、BrdU标记的阳性细胞及-SMC actin、CD68、Ⅷ因子的表达情况.结果 4周后,动员组新生内皮细胞及胶原纤维明显增多;动员后1周,动员组可见大量CD34+细胞,但4周后动员组只有少数CD34+细胞浸润,动员组斑块区发现有增值的BrdU标记的阳性细胞,-SMC actin与Ⅷ因子染色强度也明显高于对照组,CD68明显低于对照组(P＜0.05).结论 应用rhG-CSF动员自体骨髓干细胞能通过促进血管内皮细胞、平滑肌细胞和胶原纤维再生,改善血管新生,降低炎症因子而治疗ACS斑块破裂.     

血管内皮细胞功能与氧化低密度脂蛋白的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白对内皮细胞株304细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α的影响。方法:实验于2005-06/12在解放军第三零五医院老年病中心实验室完成。内皮细胞株304细胞(由武汉中国生物典藏中心提供)。①内皮细胞株304细胞加入DMEM培养基孵育培养,传代时以质量浓度为25g/L的胰酶消化。显微镜下细胞呈鹅卵石样紧密排列,无重叠生长现象。②将未经修饰的低密度脂蛋白溶于0.15μmol/L氯化钠溶液中,透析除去残余试剂,4℃条件下储存,以防脂蛋白氧化。③将内皮细胞株304细胞以3×104/孔细胞悬液接种到96孔板中,分为氧化低密度脂蛋白0,50,100,200mg/L浓度组,每组重复3孔。细胞融合生长后换用含不同浓度的氧化低密度脂蛋白DMEM培养基,作用24h,留取细胞上清液,检测纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α的含量。④细胞悬液接种到96孔板后,加入100mg/L的氧化低密度脂蛋白,分别作用3,6,12,24h,留取细胞上清液,测定纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α含量,观察氧化低密度脂蛋白时间效应。以氧化低密度脂蛋白0mg/L浓度组作为空白对照。结果:①氧化低密度脂蛋白对内皮细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1及6-酮-前列腺素F1α含量的影响:与氧化低密度脂蛋白0mg/L浓度组比较,氧化低密度脂蛋白50,100,200mg/L浓度组纤溶酶原激活物抑制剂1的含量均明显升高[(180.1±2.5),(248.1±9.0),(278.6±15.6),(290.3±15.1)μg/L,P=0.000];6-酮-前列腺素F1α的含量均明显降低[(1113.6±10.6),(995.0±8.8),(767.0±25.1),(660.9±20.3)ng/L,P=0.000]。②氧化低密度脂蛋白对内皮细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1的时间效应:氧化低密度脂蛋白100mg/L浓度组作用3,6,12,24h,各时间点纤溶酶原激活物抑制剂1的释放均明显高于氧化低密度脂蛋白0mg/L浓度组(t=3.77～15.75,P<0.05)。③氧化低密度脂蛋白对内皮细胞释放6-酮-前列腺素F1α的时间效应:与氧化低密度脂蛋白0mg/L浓度组比较,作用3h时氧化低密度脂蛋白100mg/L浓度组明显升高(t=3.86,P=0.018),6h时两组基本相似(t=2.13,P=0.100),12,24h时均明显降低(t=16.21～21.76,P<0.001)。结论:氧化低密度脂蛋白可促进内皮细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂1,抑制6-酮-前列腺素F1α的分泌,从而促使血管痉挛、血栓形成和动脉粥样硬化的发生发展。     

人心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的方法学评价及在急性冠状动脉综合征患者诊断中的临床应用

目的探讨中国自主研发成功具有完全自主知识产权的人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)ELISA检测试剂盒与已上市的同类型试剂盒在临床诊断检测性能方面的等效性,并针对其性能的可接受性做全面的评估。方法选取就诊于中国人民解放军总医院并被怀疑为急性冠状动脉综合征(ACS)收住院的患者,以及定期在中国人民解放军第三○五医院进行健康体检人员的血浆或血清。从中选出240例患者作为该临床研究的样本,按照平行分组和设置对照的实验原则,比较国产与荷兰两种H-FABP试剂盒的检测效果和相关性,同时针对国产H-FABP试剂盒检测实施了精密度试验、回收试验、抗干扰试验和稳定性试验,利用有关的智能软件来分析相关的试验数据,针对其临床检测的性能做完整的评估。结果在全自动免疫分析测定仪的检测精度范围内,国产与荷兰试剂盒测定H-FABP值的相关系数R=0.96(P0.001)。对于国产试剂盒来说,其检测H-FABP的批内变异系数为5.7%~8.2%,批间变异系数为3.9%~4.1%,而回收率为91.1%~105.7%。并且,当总胆红素(TBIL)的浓度不相同时,对正常水平的H-FABP的影响度在-9.57%~2.39%;对异常水平的H-FABP的影响度在-20.71%~7.47%。当TG的浓度不相同时,对正常水平的H-FABP的影响度在-6.66%~10.13%;对异常水平的H-FABP的影响度在5.07%~10.91%。当溶血血红蛋白的浓度不相同时,其对正常水平的H-FABP的影响度在-9.18%~8.16%;对异常水平的H-FABP的影响度在-9.27%~9.83%。结论国内自主研发的H-FABP检测试剂盒与荷兰生产的同类产品比较,具有良好的相关性和潜在临床应用价值。     

生物人工肝用肝细胞低温保存的现状与进展

大量功能好的肝细胞是生物人工肝支持系统(bio-artificial liver support system,BLASS)的核心,是制约BLASS临床广泛应用的瓶颈.探索出一种实用的肝细胞低温保存方法,建立一个随时可用(ready to use)的肝细胞库是BALSS普遍推广的基础.目前肝细胞低温保存分为4℃或零下非结冰保存和-80℃或-196℃深低温冻存两大类,两大类保存方法各有优缺点.影响肝细胞低温保存的因素很多,如保存(冻存)液、(冻存)保护剂等.有关肝细胞在低温保存过程中死亡的机制尚未完全阐明,但大量研究发现细胞凋亡是除了坏死之外低温保存肝细胞死亡的另一个重要的途径.     

老年女性亚临床甲状腺机能减低患者血浆脂蛋白(a)和载脂蛋白的变化

近年来亚临床甲状腺功能减退(甲减)有较高的患病率，尤其在大于60岁的老年妇女中可达11．1％～13．6％。甲减患者多伴有高胆固醇血症及高血压，且与心血管疾病密切相关。亚临床甲减患者是否存在血浆脂蛋白(a)、载脂蛋白及血脂水平变化，以及甲状腺素替代治疗是否影响亚临床甲减患者脂代谢状况，一直存在争议。     

急性心肌梗死心肌型脂肪酸结合蛋白的动态变化

目的　了解心肌型脂肪酸结合蛋白在急性心肌梗死 (AMI)后血清浓度变化特征 ,探讨其对AMI的潜在价值。方法　采用酶联免疫吸附实验一步夹心法对 12 6例健康体检者和 5 3例AMI患者进行血清心肌型脂肪酸结合蛋白(H FABP)检测 ,其中AMI患者分为再灌注组和非再灌注组 ,同时测定肌红蛋白、心肌型肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白I,以各自的诊断参考值为基值作标准化比值时间曲线进行动态分析。结果　AMI后 2hH FABP和肌红蛋白血清浓度明显升高 ,峰值时间及恢复时间较肌酸激酶同工酶和肌钙蛋白I前移 ,脂肪酸结合蛋白、肌钙蛋白I峰值标准化比值显著高于肌红蛋白、肌酸激酶同工酶 ,再灌注组的H FABP较非再灌注组曲线前移和峰值增高更为显著。结论　H FABP将是一种可为临床提供多种有用信息 ,有重要临床价值的AMI心肌标志物